ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
АНТИТЕЛА К ДНК В КРОВИ БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ
СКЛЕРОЗОМ
© 2007 г. Н.А. Ершова, Н.В. Гармашова, А.С. Могельницкий1, О.Б. Тышкевич2, Б.М. Доронин2, Л.П. Коненкова3, В.Н. Бунева, Г.А. Невинский
Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия;
1 Новосибирский Военный Госпиталь, Новосибирск, Россия;
2Новосибирская медицинская академия, Новосибирск, Россия;
3Институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия
Поступила: 12.01.07 г. Принята: 16.10.07 г.
Проведено сравнение уровня антител (АТ) против нативной (н) и денатурированной (д) ДНК в крови 49 больных рассеянным склерозом (РС), системной красной волчанкой (СКВ) и здоровых доноров. Показано, что у 18% и 53% больных РС уровень АТ против нДНК и дДНК, соответственно, статистически достоверно выше, чем у здоровых доноров. В отличие от АТ к дДНК при РС и при СКВ, уровни АТ к нДНК при СКВ достоверно отличаются от таковых при РС за исключением подгруппы больных с вторично-проградиент-ным течением РС. Титр АТ против дДНК обычно выше, чем к нДНК. Оценены коэффициенты корреляция между уровнями АТ к нДНК и дДНК для всей группы больных РС в целом (0,88), а также подгрупп этой группы с ремиттирующим (0,81), первично- (0,88) и вто-рично-проградиентным (0,89) течением заболевания. Проведен корреляционный анализ титров анти-ДНК АТ с 13 различными стандартными клиническими параметрами, включая оценку по функциональной шкале Куртцке. В целом для всей группы больных РС абсолютные значения коэффициентов положительной и отрицательной корреляции значений анти-ДНК АТ с клиническими показателями относительно низкие (0,36 — 0,89), но существенно повышаются для подгрупп с первично-, вторично-проградиентным и ремитти-рующим течением заболевания. Разбиение этих подгрупп на дополнительные подподгруп-пы приводит к повышению статистически достоверных коэффициентов корреляции, что согласуется с возможностью специфического сочетания генетического, хронического, воспалительного, аутоиммунного, демиелинизирующего, нейродегенеративного и других факторов в развитии РС у каждого отдельного больного. Уровень анти-ДНК АТ коррелирует в разных группах и подгруппах с различными клиническими параметрами, но чаще всего с нарушениями функции мозгового ствола, а также кишечника и мочевого пузыря и в меньшей степени мозжечковых функций.
Ключевые слова: антитела против нативной и денатурированной ДНК, кровь пациентов, рассеянный склероз
ВВЕДЕНИЕ
Аутоиммунные заболевания (АИЗ) характеризуются появлением в крови пациентов высоких титров антител (АТ), реагирующих со «своими» клетками, их структурными компонентами и продуктами жизнедеятельности. Репертуар В-клеток, секретирующих ауто-АТ, свидетельствует об их селекции специфическими аутоантигенами, роль которых в патогенезе большинства АИЗ остается, однако, неясной [1]. Наиболее хорошо изучена роль
темной красной волчанки (СКВ), одним из основных признаков которой является продукция АТ к ДНК [2]. Анти-ДНК АТ обнаружены также в крови больных такими АИЗ как полимиозит, первичный синдром Сьегрена, аутоиммунный тиреоидит и других [3].
Рассеянный склероз (РС) — хроническое заболевание центральной нервной системы (ЦНС), которым в мире страдает более 1 млн человек, относят к АИЗ. Этиология РС остается неясной, наиболее вероятна его многофакторная (комплексная) природа — воздействие внешних факторов (вирусные инфекции, климатогеографические характеристики среды обитания и др.) на индивиды с наследственной предрасположенностью. Основную роль в патогенезе играет сочетание хрониче-
гуморального иммунитета в патогенезе сис-
Адрес: 630090 Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8 Институт химической биологии и фундаментальной медицины. E-mail: nevinsky@niboch.nsc.ru
ского воспалительного и нейродегенератив-ного процессов, в генезе которых существенную роль играют аутоиммунные механизмы [4]. Индивидуальные различия во вкладе и взаимодействии факторов этиопатогенеза могут объяснять чрезвычайно гетерогенное клиническое течение РС [5]. Характерной па-томорфологической чертой РС является разрушение миелина — белково-липидной мембраны, синтезируемой олигодендроцитами и покрывающей нервные волокна в ЦНС, а также повреждение самих нервных волокон различной выраженности [4]. Хотя ведущим аутоиммунным механизмом при РС является Т-клеточный иммунитет, в развитии заболевания также участвует В-система (гуморальный иммунитет). Различные АТ-опосредованные эффекторные механизмы могут прямо участвовать в повреждении миелина, олигодендро-цитов и нервных волокон [6]. Одним из проявлений активации гуморального иммунитета при РС является повышенный синтез в ткани мозга и спинномозговой жидкости иммуноглобулинов, обычно 1дС [5, 7], а также свободных легких цепей 1д [8]. Хотя основные мишени для этих 1дС пока остаются неясными, при РС обычно выявляют АТ к основному белку миелина, миелин-олигодендроцитарно-му белку, протеолипидному белку и другим антигенам миелина. Гистологически В-клетки и депозиты 1д вместе с активированными компонентами комплемента часто наблюдаются именно по границам активных очагов демиелинизации [6].
В ряде исследований у больных РС были также выявлены антиядерные АТ, среди которых, как правило, присутствуют анти-ДНК АТ. Процент больных РС, у которых выявляли антиядерные АТ (как правило с низкими титрами) варьировал от 17% до 81% [3, 6, 9—14], что сильно зависело от чувствительности метода и особенностей выборки больных [11]. Присутствие антиядерных АТ при РС традиционно воспринималось только как одно из дополнительных свидетельств системного дисбаланса в иммунорегуляции, не имеющее самостоятельного патогенетического значения. В то же время было отмечено, что частота встречаемости этих АТ существенно выше у больных с неблагоприятным вторично-прогрессирующих течением РС [13], а при динамическом наблюдении — на активной стадии заболевания [14]. В одном из последних исследований был проведено клонирование и анализ репертуара 1дС непосредственно из активных бляшек мозга одной больной
РС и из В-клеток, присутствующих в ликворе другой [15]. Авторы показали, что высокоаффинные анти-ДНК АТ являются основным компонентом внутримозгового 1дС-ответа у обеих больных, а также наблюдали эффективное связывание полученных от этих больных ДНК-специфических моноклональных АТ с поверхностью нейрональных клеток и олигодендроцитов. Эти данные были интерпретированы как доказательство ведущей роли анти-ДНК АТ в патогенезе РС.
В этой связи следует особо отметить, что исключительно вредную роль в развитии некоторых АИЗ могут играть каталитически активные АТ (или абзимы) (для обзора см. [16—18]). ДНК- и РНК-гидролизующие абзимы обнаружены при СКВ [19 — 21], аутоиммунном тиреоидите и полиартрите [22] рассеянном склерозе [23 — 24], а также при различных формах вирусного гепатита [25] и при СПИДе [26] — заболеваниях, протекающих с очень сильным нарушением иммунного статуса.
Ранее нами были предприняты попытки выяснения возможной роли ДНК-гидролизу-ющих АТ в патогенезе некоторых АИЗ, включая РС [23-24] (для обзора см. [16-18]). Показано, что ~90% больных с достоверно установленным диагнозом РС содержат АТ, гид-ролизующие ДНК [16-18]. ДНК-гидролизу-ющие АТ из крови больных АИЗ цитотоксич-ны и в отличие от обычных АТ, они способны проникать через внешнюю и ядерную мембраны и гидролизовать ДНК хроматина и индуцировать апоптоз раковых клеток [18, 27]. Эти данные указывают на возможность важной роли анти-ДНК АТ в патогенезе РС.
Целью данного исследования было определение титра анти-ДНК АТ у больных РС в зависимости от клинических особенностей заболевания. Постепенно накапливаются данные о том, что уровни АТ к одноцепочечным и двухцепочечным ДНК, а также абзимов, специфичных к таким ДНК могут существенно различаться. Так показано, что в зависимости от пациента и его аутоиммунного заболевания в случае каждого отдельного пациента может происходить наработка АТ преимущественно гидролизующих нативную (двухце-почечную) или денатурированную (одноце-почечную) ДНК, а также 1д, гидролизующих эти ДНК примерно с сопоставимой скоростью (для обзора см. [16-18]). Таким образом, нельзя было исключить, что АИ-ответ на нативную и денатурированную ДНК у больных РС может существенным образом отли-
чаться. Учитывая это, в данной работе в качестве анализируемого антигена использовали как нативную, так и денатурированную ДНК.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследуемые группы больных РС и контрольные группы
Всего в исследование были включены 49 больных с достоверным диагнозом РС по критериям Позера и соавт. [28 — 29]. Пациенты наблюдались неврологами Военного госпиталя и 1-ой Городской клинической больницы (г. Новосибирск). Группы сравнения составили здоровые доноры и больные СКВ тех же возрастных групп, кровь последних была предоставлена сотрудниками ИКИ СО РАМН (г. Новосибирск). В ходе клинического анализа учитывали возраст больных РС, пол, первые симптомы заболевания, длительность первого обострения и первой ремиссии, общую длительность заболевания, оценку по функциональным шкалам Куртцке [29] с определением суммы баллов неврологического дефицита (Functional System scales — функциональная система —FS) и степени инвалиди-зации (Expanded Disability Status Scale —расширенная шкала степени инвалидности — EDSS), индекса скорости прогрессиро-вания (ИП). Суммарный неврологический дефицит (СНД) подсчитывали как сумму баллов, характеризующих повреждения по семи функциональным системам —FS шкалам [28, 29]. Помимо этого, рассчитывали время от начала заболевания до наступления определенной степени инвалидности, а именно до значения EDSS 3 или 6 по шкале Куртцке. Эти показатели, как и ИП, позволяют судить об активности течения заболевания в анамнезе. Для установления типов течения заболевания и стадии активности РС (обострение, ремиссия, вторичное или первичное прогрессиро-вание и т.д.) использовали общепринятые определения [28, 29].
Иммуноферментное определение IgG-ауто-антител к одноцепочечной и двуцепочечной ДНК в сыворотках крови
В работе использовали тест-системы для ИФА-а
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.