РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2014, том 8(17), № 1, с. 79-82
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
ДИФФЕРЕНЦИРОВКА CD8+ КЛЕТОК ПАМЯТИ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ
© 2014 г. А.В. Кудряшова, Л.В. Кадырова
Лаборатория клинической иммунологии ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н.Городкова» Министерства здравоохранения
Российской Федерации, Иваново, Россия
Поступила: 27.11.2013. Принята: 21.01.2014
Методом проточной цитофлюориметрии в периферической крови беременных женщин исследовали содержание клеток памяти в популяции периферических CD8 + лимфоцитов. Было установлено, что в 1 триместре беременности уровень Tcm, Tem и Temra в популяции CD8 + лимфоцитов не изменялся по сравнению с небеременными донорами, во втором триместре снижалось содержание Tcm и Tem, в 3 триместре все показатели восстанавливались до уровня небеременных женщин. На всем протяжении гестации в периферической крови женщин сохранялся постоянный уровень CD8+ Tcm, Tem и Temra, продуцирующих Granzyme B. Снижение содержания Perforin-продуцирующих CD8+ клеток было характерным для Tem, начиная с 1 триместра, а для Tcm и Temra — со второго триместра беременности. Таким образом, в динамике неосложненной беременности во всех популяциях клеток памяти отмечается снижение цитотоксического потенциала периферических CD8+ лимфоцитов.
Ключевые слова: беременность, цитотоксические Т-лимфоциты, клетки памяти
Исследование основ «толерантности» материнской иммунной системы к АГ плода является одним из самых интересных аспектов иммунологии репродукции. Формирование плодово-плацентарного комплекса определяет беспрецедентную физиологическую ситуацию, при которой иммунная система матери, сталкивается с тканеспеци-фическими антигенами плода, отцовского генома. Предполагается, что стимуляция иммунной системы матери АГ плода является необходимым фактором нормального развития беременности, а избыточное поступление АГ при нарушении барьерной функции плаценты приводит к формированию акушерской патологии [1, 2]. Это позволило нам предположить, что при беременности могут формироваться специфические клоны лимфоцитов, реагирующие на АГ плода, с последующим формированием пулов клеток памяти.
Адрес: 153003, г. Иваново, ул. Красных Зорь, д.14, кв.5, Кудряшовой А.В. E-mail: niimid.immune@mail.ru
Целью проведенного исследования было установить особенности содержания центральных (Tcm), претерминально-дифференци-рованных (Tem) и терминально-дифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфо-цитов (CD8+) небеременных доноров и беременных женщин в динамике неосложненной беременности, и исследование эффекторной активности данных пулов клеток памяти на основании изучения внутриклеточной продукции GranzymeB и Perforin.
Проводилось определение содержания Tcm (CD45RA-CD62L+), Tem (CD45RA-CD62L-) и Temra (CD45RA+CD62L-) клеток памяти, в популяции CD8+ лимфоцитов в периферической крови 30 небеременных женщин репродуктивного возраста, 54 женщин в 1 триместре, 35 женщин во 2 триместре, 43 женщин в 3 триместре беременности. Внутриклеточную продукцию GranzymeB и Perforin клетками памяти оценивали в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови 9 небеременных женщин, 10 женщин в 1 триместре, 9 женщин
во 2 триместре, 15 женщин в 3 триместре беременности. Все женщины не имели тяжелой соматической патологии, а также акушерской патологии на момент обследования.
Исследование осуществляли методом многоцветной цитофлюориметрии на проточном цитофлюориметре FACSCantoII в программе FACSDiva (Becton Dickinson, США). В работе использовали моноклональные антитела: анти^8 PerCP-Cy5.5 (clone RPA-T4), анти-CD45RA APC (clone HI100), анти-CD62L (clone DREG-56) FITC, анти-GranzymeB (clone GB11) PE, анти-Perforin PE (clone dG9) производства «eBioscience» (США).
Статистическая обработка данных проводилась с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического с использованием программы Microsoft Excel из комплекта Microsoft Office 2000. Достоверность различий сравниваемых показателей определялась по t-критерию Стьюдента.
Проведенное нами исследование показало, что в 1 триместре беременности в популяции периферических CD8 + лимфоцитов достоверно снижалось содержание Tem, во втором триместре — содержание Tcm и Tem по сравнению с показателями небеременных женщин (p < 0,05, p < 0,01 и p < 0,01, соответственно) (рис. 1).
Содержание Tcm в популяции CD8 + лимфоцитов во 2 триместре было достоверно снижено по сравнению с показателями беременных женщин в 1 триместре гестации (p < 0,001). В 3 триместре беременности содержание всех
20 18 16 14 12
%
3530252015105-
CD45RA-CD62L+(Tcm) CD45RA-CD62L-(Tem) CD45RA-CD62I^(Temra) □ Доноры О 1 триместр О 2 триместр Ш 3 триместр
Рис. 1. Содержание Tcm, Tem и Temra в популяции CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности.
* коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*p < 0,05, **p < 0,01); Хкоэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных в 1 триместре гестации (Хр < 0,001);
коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных во 2 триместре гестации (Yp < 0,05).
фракций клеток памяти в популяции CD8 + лимфоцитов востанавливалось до уровня небеременных доноров.
Проведенное исследование внутриклеточной продукции цитолитических молекул клетками памяти показало, что при неосложненной беременности в 1 триместре в популяции CD8 + лимфоцитов снижался уровень Tem, продуцирующих Perforin, по сравнению с показателями доноров (р < 0,05) (рис. 2).
10 8 6
4 +2-1-
0
±
I
±
Т
JÜ
д
т
JL
I
Perf+Tcm Perf+Tem Perf+Temra GrB+Tcm GrB+Tem GrB+Temia
П Доноры О 1 триместр О 2 триместр Н 3 триместр
Рис. 2. Содержание Tcm, Tem и Temra, внутриклеточно продуцирующих Perforin и GranzymeB, в популяции CD8 + лимфоцитов в динамике неосложненной беременности.
* коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*р < 0,05, *р < 0,01);
Хкоэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных в 1 триместре гестации (Хр < 0,02).
Дифференцировка CD8+ клеток памяти при беременности
81
Во 2 триместре беременности в популяции периферических CD8+ лимфоцитов снижалось содержание Tcm, Tem, Temra, продуцирующих Perforin (p < 0,01, p < 0,05, p < 0,01 по сравнению с показателями небеременных доноров, p > 0,05, p > 0,05, p < 0,02 по сравнению с показателями беременных в 1 триместре). В 3 триместре уровень Perforin+ Tcm, Tem и Temra в популяции CD8+ лимфоцитов оставался сниженным по сравнению с показателями небеременных доноров (p < 0,01, p < 0,01, p < 0,05 соответственно). Уровень GranzymeB+ Tcm, Tem и Temra в популяции CD8+ лимфоцитов не претерпевал значительных изменений в динамике неослож-ненной беременности и был сопоставим с таковым у небеременных доноров (p > 0,05 во всех случаях).
Результаты исследований последних лет показывают, что во время беременности в периферический кровоток матери поступают как фрагменты синцитиотрофобласта и ДНК плода, так в значительном количестве и его лимфоциты [3]. В связи с этим возникает вопрос о том, каким образом материнская иммунная система реагирует на АГ плода и почему в норме не развиваются реакции отторжения плода и плаценты?
Существует мнение, что ключевыми местами для установления материнской толерантности к плоду на периферии являются вторичные лимфоидные структуры [4]. Предполагается, что во время неосложненной беременности при минимальном количестве лимфоцитов плода, поступающих в кровоток матери, развивается явление микрохимериз-ма, при котором клетки плода воспринимаются иммунной системой матери как «свое» [3, 5]. Однако в работе Erlebacher A. с соавторами (2007) было показано, что материнские Т-лимфоциты способны отвечать пролиферацией на стимуляцию антигенами плода, причем этот эффект сохраняется и вне беременности [4]. Этот факт свидетельствует в пользу предположения о том, что процесс дифференцировки материнских Т-лимфо-цитов под действием АГ плода может завершаться формированием клеток памяти. Однако проведенное нами исследование не выявило увеличение пропорции различных пулов CD8+ клеток памяти в периферической крови беременных женщин на всем протяжении гестации. Более того, во 2 триместре беременности уровень CD8+ Tcm и Temra достоверно снижался по сравнению
с показателями у небеременных женщин. Факторы, определившие такие изменения в содержании клеток памяти в популяции CD8+ лимфоцитов неясны. С одной стороны, у беременных женщин нами ранее отмечалось изменение пропорции внутри популяции лимфоцитов в сторону преобладания наивных CD45RA+CD62L+ лимфоцитов [6]. С другой стороны, уже начиная с ранних сроков гестации, патологическое развитие иммунного ответа ограничивается действием регуляторных Т-лимфоцитов [7]. Наряду с этим нельзя отрицать и возможную роль микрохимеризма клеток плода. Следует отметить, что явление микрохимеризма характерно только при поступлении в организм хозяина небольшого количества клеток другого организма. При патологии беременности, связанной с нарушением плацентарного барьера, в том числе и для клеток плода, развивается патологический иммунный ответ. В этой ситуации, как показали проведенные нами ранее исследования, в популяции периферических CD8+ лимфоцитов отмечалось повышение уровня Tcm и Tem при угрозе невынашивания беременности [8], и Temra при преэклампсии [9].
Наиболее интересным фактом по нашему мнению является отмеченное при беременности угнетение продукции Perforin всеми типами клеток памяти в популяции CD8 + лимфоцитов. Возможно, это объясняется особыми механизмами регуляции функциональной активности цитотоксических лимфоцитов при беременности. Так, например, в литературе имеются данные о том, что секретируемый децидуализированным эндометрием гликоделин, способен контролировать экспрессию Perforin в CD8+ клетках. При его воздействии подавляется синтез IL-2Ra и снижается экспрессия Eomes, который вместе с IL-2 непосредственно регулирует продукц
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.