ДОКЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ИММУНОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ РАЗРАБОТАННОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОБРАЗЦА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА БАЦИЛАКТ В СОСТАВЕ ТРАСДЕРМАЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ
СИСТЕМ
Забокрицкий Н.А.1,2, Ларионов Л. П.1, Юшков Б. Г.2, Киселева А. А.1
'Уральский государственный медицинский университет, кафедра фармакологии и клинической фармакологии; 2Институт иммунологии и физиологии УрО РАН,
Екатеринбург, Россия
Статья посвящена актуальным вопросам изучения иммунотропного действия разработанного бикомпонентного пробиотического препарата бацилакт в мягкой лекарственной форме (на основе тизоля, эфтидерма и кремнийтитанорганического глицерогидрогеля) на количественные изменения показателей гуморального иммунитета и уровня цитокинов при лечении локализованной гнойной инфекции кожи животных, вызванной Staphylococcus aureus. Так, в частности, было установлено увеличение фагоцитарной активности ней-трофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов (в среднем в 2 раза), повышалось количественное содержание Т- и В-лимфоцитов (в 1,5-2 раза), титры иммуноглобулинов А и G увеличивались в 2 раза, менее значительно возрастало количество иммуноглобулинов Е и М. Особый интерес представляло увеличение титров а-интерферона и рецепторного антагониста интерлейкина-1 во всех без исключения группах подопытных животных, подвергавшихся лечению экспериментальными образцами препарата бацилакт (независимо от вида транскутанного проводника). Исследования по оценке иммунного статуса подопытных животных с локализованной гнойной инфекцией кожи, вызванной S. aureus, лечение которых проводили испытуемыми гелевыми препаратами, позволяет сделать заключение о наличии у них выраженных иммуномодулирующих свойств. Более значимые эффекты отмечены для бацилакта, на основе тизоля и кремнийтитанорганиче-ского глицерогидрогеля.
Ключевые слова: бацилакт, пробиотик, тизоль, эфтидерм, кремнийтитанорганический глицерогидрогель, иммунотропное действие, гуморальный иммунитет
Введение. Все большую значимость приобретает проблема борьбы с воспалительными и гнойными заболеваниями кожных покровов и слизистых. По данным некоторых авторов неудовлетворительные результаты лечения таких поражений существенно возросли [1-4]. Произошедшие в последние десятилетия кардинальные преобразования окружающей среды, урбанизация условий жизни, изменения структуры и качества пищи, воды и воздуха, включая их микробно-антигенную контаминацию, обуславливают дезадаптационные нарушения гомеостаза у все большего числа людей, затрагивающие, прежде всего, функции иммунной и ней-роэндокринной систем, обеспечивающих
устойчивость организма к стрессорам, в том числе инфекционным, соматическим, онкологическим и другим болезням [3, 5, 6, 7]. Следует обратить внимание, что ускорение хода эволюции микроорганизмов, эпидемические последствия которого остаются зачастую малопредсказуемыми, сопровождается определенными изменениями (по спектру и количеству антигенно - информационных структур), иммуностимулирующего и имму-норегуляторного влияния сапрофитов и симбионтов, обуславливающих необходимость выбора и обоснования применения (согласно конкретному специфическому механизму их фармакологического действия) новых эффективных и безопасных иммунокорригирую-
щих средств (адаптогенов). Однако, с учетом значимой конструктивной роли микробного фактора среды в функционировании систем гомеостаза, в частности, иммунной системы, наиболее физиологичным, по мнению многих исследователей, представляется использование пробиотиков - медицинских иммунобиологических препаратов на основе симбионтов и сапрофитов различных родов бактерий и, в частности, непатогенных бацилл, которые в естественных условиях выполняют совместно с другими микроорганизмами положительную (иммуностимулирующую) роль в онтогенезе человека, равно как и других млекопитающих [2-5, 8]. Таким образом, концепция микробного фактора среды позволяет на этапе современных преобразований экосферы, возникающих эпидемиологически сложных условий и наличии определенных физиологических изменений в организме человека, осуществлять целенаправленный выбор и рациональное использование эффективных и безопасных
иммунокорректоров (адаптогенов), которыми и являются пробиотические препараты на основе живых бактерий [8].
Цель работы - провести доклинические исследования по оценке иммунотропного действия бикомпонентного препарата баци-лакт в составе трандермальных терапевтических систем.
Материал и методы. Экспериментальный образец пробиотика бацилакт содержал в своем составе культуры бактериальных клеток Bacillus subtilis В-2335 - Ь106 см 3 КОЕ и Lactobacillus plantarum 8P-A3 - Ь106 см 3 КОЕ и геле-вые основы - тизоль, эфтидерм, кремнийтита-норганический глицерогидрогель (КТГГ).
Моделирование гнойной инфекции осуществляли на белых беспородных мышах (общее количество животных - 42) массой тела 18,0-20,0 г. Предварительно, за одни сутки перед заражением, шерсть на брюшке животных тщательно выстригали на участке кожи размером 2,0x2,0 см. Суточные бактериальные культуры стафилококка, стрептококка и си-
Таблица. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета и уровня цитокинов при лечении локализованной гнойной инфекции кожи животных, вызванные S. aureus (M±m, n=7)
Образцы препаратов Срок наблюдения, сутки Исследуемые показатели
Ig м, мг-см-3 Ig A, мг-см-3 Ig G, мг^см-3 Ig E, мг-см-3 a-IFN, пг^см-3 РА IL-1, пг^см-3 ЦИК, опт.ед.
Бацилакт (тизоль) 1 8,68±0,24* 1,30±0,12* 14,1±1,3* 0,60±0,01* 63,2±1,4* 37,1±1,2 0,59±0,03*
7 2,83±0,29* 2,79±0,16* 21,7±1,8 0,44±0,02 33,8±1,6 8,9±0,2* 0,14±0,02
Бацилакт (эфтидерм) 1 7,86±0,36* 1,13±0,18* 13,6±1,4* 0,60±0,03 57,2±1,7* 31,3±1,6 0,62±0,03*
7 3,15±0,34* 2,54±0,12* 20,3±1,5* 0,46±0,02 37,3±1,4 8,0±0,3* 0,16±0,02
Бацилакт (КТГГ) 1 7,78±0,37* 1,14±0,11* 14,9±1,6* 0,63±0,05* 56,4±1,6* 33,6±1,9 0,56±0,03
7 2,81±0,28* 2,47±0,12* 19,3±1,4 0,42±0,03 32,1±1,4* 7,8±0,4* 0,14±0,01
Контроль (эплан) 1 6,52±0,30 1,02±0,16 14,0±1,5 0,56±0,04 47,5±1,3* 28,2±1,3 0,59±0,03
7 3,07±0,22* 2,23±0,17* 18,3±1,4 0,48±0,05 34,8±1,9 6,8±0,2* 0,18±0,02
Контроль (без лечения) 1 6,47±0,33 1,09±0,19 10,3±1,4 0,60±0,03 49,2±1,5 36,1±1,8 0,71±0,04
7 4,08±0,25 2,14±0,16 18,1±1,7 0,49±0,02 35,6±1,6 7,9±0,3 0,16±0,01
Контроль (интактные) 1 2,99±0,31 1,06±0,09 1,02±1,5 0,29±0,03 37,9±1,4 2,2±0,1 0,15±0,02
7 3,04±0,36 0,93±0,11 10,4±1,4 0,31±0,02 30,8±1,5 2,3±0,2 0,14±0,01
Примечание: оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р<0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».
негнойной палочки в виде взвеси их в физиологическом растворе вводили внутрикожно. Заражающая доза для стафилококка составляла 1,5-109 клеток в объеме 0,1 см3 суспензии. Гуморальный статус у экспериментальных групп животных при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов определяли путем исследования таких количественных показателей сыворотки крови, как: титр иммуноглобулинов М, мг-см-3; титр иммуноглобулинов G, мг-см-3; титр иммуноглобулинов А, мг-см-3; титр иммуноглобулинов Е, мг-см-3; титр а-интерферона (а-^К), пг-см-3; титр рецепторного антагониста ин-терлейкина-1 (РА ГЬ-1), пг-см-3; концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), опт. ед. Количественное определение концентрации ЦИК проводили при помощи метода преципитации 3,5% раствором по-лиэтиленгликоля. Количественное определение иммуноглобулинов (^М, IgG, ^А, ^Е), а-интерферона и рецепторного антагониста интерлейкина-1 в сыворотке крови проводили с помощью тест-систем, основанных на классическом твердофазном двухступенчатом «сэндвич» методе иммуноферментного анализа на микропланшетах. Забор материала для исследований (сыворотка крови) проводили на 1-е и 7-е сутки после начала лечения экспериментальными образцами испытуемых препаратов
Результаты. Как видно из полученных данных (табл.), в группе подопытных животных, с воспроизведенной моделью локализованной гнойной инфекции кожи (контроль - без лечения), по сравнению с контрольной (интактной) группой животных, на 1-е сутки отмечается повышение уровня всех изучаемых показателей гуморального иммунитета. В большей степени возросла концентрация иммуноглобулина М (более чем в 2 раза), циркулирующих иммунных комплексов (более чем в 2 раза) и иммуноглобулина Е (в 4 раза), а также концентрация исследуемых цитокинов.
Кроме того, в подопытной группе животных с локализованной гнойной инфекцией кожи на 7-е сутки наблюдали незначительное повышение титра иммуноглобулинов А и G, а-интерферона. Существенно возрастало количество рецепторного антагониста интерлейкина-1 (более чем в 3 раза), на фоне снижения концентрации в сыворотке крови иммуноглобулинов М и Е, хотя они остава-
лись достаточно высокими, а также определяли снижение уровня ЦИК практически до нормальных величин.
На 1-е сутки после начала лечения испытуемыми образцами препаратов на основе баци-лакта наблюдалось значительное повышение титра иммуноглобулина М во всех группах подопытных животных. Наиболее высокая концентрация иммуноглобулина М была определена в группе подопытных животных, получавших испытуемый препарат бацилакт и тизоль (8,68±0,24 мг-см-3), в меньшей степени титр иммуноглобулина М увеличился в группе подопытных животных, получавших препарат сравнения эплан (6,52±0,30 мг-см-3). В контрольной группе (без лечения) титр иммуноглобулина М был также достаточно высоким - 6,47±0,33 мг-см-3. Параллельно с повышением концентрации иммуноглобулина М выявили значимое повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов. Увеличение содержания ЦИК происходило одновременно с увеличением титра иммуноглобулина М. Так, в группе подопытных животных, для лечения которых использовали испытуемый препарат бацилакт (эфтидерм), концентрация ЦИК достигала величины 0,62±0,03 опт. ед, что значительно больше, чем в группе животных, получавших препарат сравнения эплан - 0,59±0,03 опт. ед. При воспроизведении модели локализованной гнойной инфекции кожи на 1-е сутки после начала лечения определяли дос
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.