научная статья по теме ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОВОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КОКЛЮША, ДИФТЕРИИ, СТОЛБНЯКА, ГЕПАТИТА В И ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ ТИПА B, СОДЕРЖАЩЕЙ БЕСКЛЕТОЧНЫЙ КОКЛЮШНЫЙ КОМПОНЕНТ Биология

Текст научной статьи на тему «ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОВОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КОКЛЮША, ДИФТЕРИИ, СТОЛБНЯКА, ГЕПАТИТА В И ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ ТИПА B, СОДЕРЖАЩЕЙ БЕСКЛЕТОЧНЫЙ КОКЛЮШНЫЙ КОМПОНЕНТ»

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОВОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КОКЛЮША, ДИФТЕРИИ, СТОЛБНЯКА, ГЕПАТИТА В И ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ ТИПА B, СОДЕРЖАЩЕЙ БЕСКЛЕТОЧНЫЙ КОКЛЮШНЫЙ КОМПОНЕНТ

Николаева А. М., Соснина О. Ю., Белякова О. В., Вязникова Т. В., Афанасьева Т. М., Языкова М. Н.

Филиал ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России «Пермское НПО «Биомед»,

Пермь, Россия

Проведены доклинические исследования новой пятикомпонентной вакцины против коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В, гемофильной инфекции типа Ь, содержащей бесклеточный коклюшный компонент (вакцины аАКДС-Геп В+Н1Ь) разработанной в ФГУП НПО «Микроген». Установлено, что вакцина не обладает токсическими свойствами и формирует напряженный иммунитет в отношении всех компонентов, входящих в ее состав, и может быть рекомендована к проведению первой фазы клинических испытаний.

Ключевые слова: вакцина, доклинические исследования, токсичность, иммуногенность

Введение. Расширение числа инфекций, контролируемых специфической профилактикой, обуславливает необходимость максимально широкого использования различных комбинаций вакцинных препаратов. Особенно актуальными являются исследования по созданию комбинированных вакцин с включением в них компонента со специфической направленностью против гемофильной инфекции типа b, а также замена цельноклеточного коклюшного компонента на бесклеточный. В филиале ФГУП «НПО «Микроген» в г. Пермь разработана технология получения поливалентной комбинированной вакцины против коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и гемофильной инфекции типа b (вакцина аАКДС-Геп B+Hib), содержащей бесклеточный коклюшный компонент, представляющий собой природный комплекс антигенов Bordetella pertussis, аналогичный цельноклеточной вакцине.

Цель работы: проведение лабораторно-экс-периментального (доклинического) исследования эффективности и безопасности новой пятикомпонентной вакцины аАКДС-Геп B+Hib.

Материал и методы. Исследуемым препаратом являлась комбинированная вакцина аАКДС-Геп B+Hib (Пермское НПО «Биомед»). Одна доза вакцины после приготовления со-

держала не менее 8 международных единиц (МЕ) в 1 мл коклюшного компонента, не менее 60 МЕ/мл дифтерийного анатоксина, не менее 80 МЕ/мл столбнячного анатоксина, 5 мкг НВзА^ 10 мкг полирибозилрибитола фосфата, конъюгированного со столбнячным анатоксином, а так же вспомогательные вещества: алюминия гидроксид, формальдегид, сахароза, однозамещенный натрия фосфат, двузаме-щенный натрия фосфат.

В качестве препаратов сравнения использовали вакцины: АКДС-Геп В (Пермское НПО «Биомед»); Пентаксим (Санофи Пастер, Франция), Инфанрикс (ГлаксоСмитКляйн Байолоджикалз, Бельгия), НШ-вакцина (НШ-компонент, входящий в состав комбинированной вакцины аАКДС-Геп В+ШЬ, представляет собой лиофилизат для приготовления суспензии для внутримышечного введения, Пермское НПО «Биомед»).

Экспериментальные исследования выполнены на 2604 животных (мышах белых беспородных, мышах линии BALB/c, морских свинках, белых половозрелых и неполовозрелых беспородных крысах, кроликах шиншилла). Животные поставлялись из филиала ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России «Пермское НПО «Биомед» и из питомни-

ка ГУ НЦБМТ РАМН филиал «Андреевка», г. Москва.

За основу дизайна доклинического исследования были взяты рекомендации действующих методических документов [2-5]. Оценка препаратов проводилось с соблюдением этических правил гуманного отношения к животным. Методы анализа вакцины были стандартными и включали изучение общетоксического действия (исследование острой и хронической токсичности, местного, местного раздражающего действия, патоморфоло-гические, гематологические и биохимические исследования, определение пирогенности), гуморального иммунного ответа, аллергизи-рующего действия (реакция общей анафилаксии, определение гиперчувствительности замедленного типа).

Содержание бактериальных эндотоксинов определяли методом хромогенного ЛАЛ-теста по конечной точке с использованием коммерческой тест-системы (Hycult biotech, Нидерланды) в соответствии с инструкцией по применению.

Иммуногенную активность комбинированной вакцины аАКДС-Геп В+Hib оценивали по содержанию специфических антител в крови кроликов в отношении каждого антигена, входящего в состав вакцины. Иммунизацию проводили двукратно в дозе 0,5 мл внутримышечно с интервалом 14 суток. Забор крови осуществляли на 21 день после первой иммунизации.

Определение антител к коклюшным антигенам Bordetella pertussis, дифтерийному, столб-

нячному анатоксинам и анти-HBs проводили с помощью иммуноферментных тест-систем «Анти-Кок», «Анти-ДС» и «МикрАТ-HBs» (ФГУП «НПО «Микроген»), к полисахариду H. influenzae типа b - «Rabbit Anti-Haemophilus influenzae type b IgG ELISA Assay» (XpressBio, США).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием методов описательной статистики.

Результаты. При изучении пятикомпонент-ной вакцины аАКДС-ГепВ+Hib в тестах острой токсичности на морских свинках и половозрелых и неполовозрелых крысах (при однократном внутримышечном и внутривенном введении препарата в дозе, превышающей более чем в 400 раз дозу для человека) и хронической токсичности на морских свинках и половозрелых крысах (при ежедневном внутримышечном введении в течение 10 дней в терапевтической дозе в пересчете на соответствующее животное) не наблюдалось изменений поведенческой и двигательной активности, снижения аппетита, изменения волосяного покрова, снижения массы тела и гибели животных. При этом так же не отмечалось патологических изменений внутренних органов и значимых изменений биохимических и гематологических показателей крови, что свидетельствует об отсутствии токсического действия препарата на системы и органы лабораторных животных.

При оценке аллергизирующего действия вакцины аАКДС - Геп В+Hib в реакции гиперчувствительности замедленного типа на мы-

Таблица. Результаты изучения иммуногенных свойств комбинированных вакцин в опытах на животных

Вакцина Определяемые антитела (средняя геометрическая титра, доверительный интервал)

Столбнячные, МЕ/мл Дифтерийные, МЕ/мл Коклюшные, ИЕ/мл* Анти-HBs, мМЕ/мл Гемофильные, мкг/мл

аАКДС-Геп В+Hib 12,1 [7,9-18,6] 15,2** [7,8-29,4] 2822,7 [1496,9-5322,7] 566,5 [99,5-3224,2] 59,1 [26,1-133,5]

АКДС-Геп В 7,5 [6,4-8,6] 5,0 [2,6-9,5] 2188,4 [968,9-4942,7] 852,5 [81,3-8937,7] -

Инфанрикс 4,8 [2,3-9,9] 8,4 [5,5-12,8] 1138,6 [244,6-5299,8] - -

Пентаксим 9,6 [5,8-15,8] 14,3** [9,6-21,4] 142,5** [44,6-455,4] - 30,9 [13,7-69,4]

Hib-вакцина - - - - 12,4 [4,8-32,2]

Примечания:* иммуноферментные единицы; ** различия существенны при сравнении с АКДС-Геп В (р<0,05)

шах самцах линии BALB/c было установлено, что вакцина аАКДС - Геп В+Hib обладает менее выраженным аллергизирующим действием, чем вакцина АКДС - Геп В. Показатели интенсивности иммунного воспаления по массе и толщине стопы были достоверно выше (р<0,05) в контрольной группе, получившей АКДС - Геп В, и составили для исследуемого препарата 36,67±1,97 и 27,04±5,12, для препарата сравнения - 54,61±12,01 и 64,70±12,44. В реакции воспроизведения анафилаксии у морских свинок не было отмечено гибели животных, а также изменения поведения, волосяного покрова, возникновения зуда.

В испытаниях по определению пирогенно-сти, установлено, что вакцина аАКДС-Геп B+Hib не обладает пирогенными свойствами (в опытах на кроликах) и по показателю содержания бактериальных эндотоксинов (25-30 ЭЕ/доза) полностью соответствует требованиям Европейской Фармакопеи (<100 ЭЕ/доза), предъявляемым к вакцинам, содержащим бесклеточный коклюшный компонент [6, 7].

Вакцина аАКДС-Геп B+Hib вызывает выработку антител на дифтерийный, столбнячный, коклюшный и гепатитный компоненты (табл.) на уровне коммерческих вакцин, применяющихся в педиатрической практике.

Обсуждение. Трудности создания сложной вакцины связаны, прежде всего, с решением проблем совместимости ее компонентов, стабильности и сохранения достаточной иммуно-генности препарата. В частности, в отношении Hib-компонента, в литературных источниках имеются данные, как по интерференции, так и по потенцированию иммунного ответа на Hib-компонент в составе комбинированных вакцин [1]. При иммунизации кроликов разработанной вакциной аАКДС-Геп В+Hib наблюдался более высокий уровень антител к полисахариду H. influenzae типа b по сравнению с моновакциной Hib (р<0,05), при этом не было отмечено снижения гуморального иммунного ответа на дифтерийный, столбнячный, коклюшный и гепатитный компоненты по сравнению с вакциной АКДС-Геп В. Таким образом, была продемонстрирована полная иммунологическая совместимость дифтерийного, столбнячного, коклюшного, гепатитного и гемофильного компонентов в составе вакцины аАКДС-Геп В+ Hib.

Следует особо отметить, что уровень коклюшных антител, индуцируемый бескле-

точным коклюшным компонентом вакцины аАКДС-Геп В+Hib, сопоставим с уровнем антител к цельноклеточному коклюшному компоненту вакцины АКДС-Геп В, эффективность которого подтверждена многолетней педиатрической практикой. Кроме того, вакцина аАКДС-Геп В+Hib, содержащая природный комплекс антигенов Bordetella pertussis по антигенной структуре максимально приближенный к цельноклеточной вакцине, дает более высокий иммунный ответ к коклюшному компоненту по сравнению с другими коммерческими бесклеточными вакцинами, содержащими отдельные антигены, такими как «Пентаксим», который содержит в своем составе филаментозный гемагглютинин и коклюшный анатоксин, и «Инфанрикс», в состав которого также входит пертактин, что свидетельствует о перспективности использования новой комбинированной вакцины для профилактики коклюшной инфекции.

Таким образом, проведенные исследования эффективности и безопасности показали, что пентавакцина аАКДС-Геп В+Hib безопасна, обладает выраженными иммуногенными свойствами, что позволяет рекомендовать ее для клинического изучения.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Плоткин С. Вопросы современной педиатрии 2012, 1, 18-36.

2. РД 42-28-8-89 «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения». М. 1989.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому)

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком