РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2008, том 2(11), № 4 с. 433-439
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ
© 2008 г. И.В. Нестерова*, И.Н. Швыдченко, В.А. Роменская, Е.В. Фомичева, Е.Ю. Быковская, Г.Г. Рожкова, Н.П. Капранова, С.В. Ковалева
ФГУ «Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», Краснодар, Россия;
*Институт иммунофизиологии, Москва, Россия
Поступила: 28.08.08 г. Принята: 25.09.08 г.
Целью настоящего исследования явилось определение фенотипического профиля и функциональных характеристик нейтрофильных гранулоцитов (НГ) при воспалительных заболеваниях гастродуоденальной зоны — хронический неатрофический активный гастрит (ХГ), ассоциированный Helicobacter pylori (Нр), и язвенная болезнь (ЯБ) желудка и/или двенадцатиперстной кишки в стадии обострения заболевания. В результате проведенных исследований выявлены как однотипные изменения фенотипического профиля НГ при ХГ и ЯБ, связанные, по-видимому, с универсальностью механизмов воспаления, так и различия в характере и уровне реагирования поверхностной мембраны НГ на патологический процесс в зависимости от степени выраженности воспалительной реакции, наличия повреждений слизистой оболочки (язвы и эрозии). Активация рецепторного аппарата при Нр-ассоциированных воспалительных заболеваниях не сопровождалась усилением фагоцитарной активности НГ. Выявлено снижение количества формазан-позитивных клеток при ЯБ наряду с увеличением числа клеток с диффузным расположением формазана. Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ и Департамента образования и науки Краснодарского края, проект №06-04-96793 р_юг_а.
Ключевые слова: нейтрофильные гранулоциты, рецепторы, функциональная активность, воспаление, хронический гастрит, язвенная болезнь
ВВЕДЕНИЕ
Существуют убедительные доказательства, что Helicobacter pylori (Hp) является ключевым фактором в этиологии различных воспалительных заболеваний желудка: от бессимптомного хронического активного гастрита до язвенной болезни [1, 2]. Нр вызывает непрерывное воспаление практически у всех инфицированных лиц [3], характерной особенностью которого является массивная ней-трофильная инфильтрация слизистой [4 — 8]. Нейтрофильные гранулоциты (НГ) играют ключевую роль в иммунном ответе на хелико-бактерную инфекцию. Они действуют и как эффекторные клетки, действие которых на-
Адрес: 117513, Москва, ул. Островитянова, 4. E-mail: inesterova1@yandex.ru
правлено на элиминацию Нр, и как клетки, обладающие определенными регуляторными влияниями на развитие адаптивного иммунного ответа на Нр-инфекцию [9]. Наряду с этим, доказано, что Нр-индуцированные повреждения слизистой являются нейтрофил-опосредованными [10—13], а доступные данные подтверждают, что в индуцировании желудочного язвообразования имеют место со-четанные негативные эффекты влияний НГ и Нр [14, 15]. Таким образом, НГ являются одним из ведущих патогенетических факторов при воспалительных заболеваниях желудка.
В связи со значимостью НГ в патогенезе воспаления и новыми данными об их имму-норегуляторной роли появляется все больше работ, посвященных изучению их фено-типических и функциональных характеристик. Тем не менее, несмотря на интенсивные исследования в данном направлении,
остаются все еще малоизученными феноти-пические и функциональные особенности НГ при различных воспалительных заболеваниях желудка. Недостаточное понимание механизмов формирования дисфункций НГ при данной патологии, в свою очередь, обуславливает отсутствие патогенетически обоснованных иммунотерапевтических подходов, которые могли бы позволить модулировать и регулировать адекватное реагирование и функционирование НГ, и таким образом, позитивно влиять на исход воспалительного процесса.
Целью настоящего исследования явилось определение фенотипического профиля и функциональных характеристик нейтро-фильных гранулоцитов при воспалительных заболеваниях гастродуоденальной зоны.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Иммунологические исследования были проведены у 31 пациента с воспалительными заболеваниями гастродуоденальной зоны обоего пола в возрасте от 21 до 59 лет. Из них 20 пациентов наблюдались с диагнозом хронический неатрофический активный гастрит (ХГ), ассоциированный Нр, 11 больных — с язвенной болезнью (ЯБ) желудка и/или двенадцатиперстной кишки в стадии обострения заболевания.
Диагноз ставился на основании клинических данных, эзофагогастродуоденоскопии (ЭФГДС) и гистологического исследования. ЭФГДС проводили в утренние часы, натощак, со взятием биоптатов из зоны поражения слизистой оболочки. При морфологическом исследовании гистологических препаратов были выявлены высокие показатели лейкоцитарной инфильтрации (нейтрофильными гра-нулоцитами и лимфоидными клетками). Степень обсемененности слизистой оболочки Нр оценивалась полуколичественно по 4-х балльной шкале: отсутствие бактерий обозначали « — », до 20 микроорганизмов в поле зрения — « + », 20 — 50 — «2 + », более 50 — «3 + ». Наличие Нр в слизистой желудка подтверждалось в 70,9% случаев, и составило в среднем 2,4 ± 0,09 балла.
Кровь для исследования брали при первичном обращении до начала традиционного лечения. В качестве сравнения использовали показатели фенотипических и функциональных характеристик НГ, полученные в группе здоровых добровольцев (п = 69).
НГ выделяли из ЭДТА-стабилизированной (2,7%) периферической крови с помощью центрифугирования на двойном градиенте плотности фиколла-верографина (1,077:1,093) [16]. Фенотипирование НГ по основным группам функционально значимых поверхностных мембранных рецепторов и адгезионных молекул проводили непрямым иммунофлюо-ресцентным методом [17] с использованием панели моноклональных антител к данным клеточным структурам: анти-CDHb, -CD14, -CD15, -CD16, -CD80, -CD95, HLA-DR (ООО «Сорбент», Москва).
Функциональное состояние клетки оценивали в реакциях фагоцитоза опсонизирован-ного зимозана с определением относительного количества активно фагоцитирующих нейтро-филов (%ФАН). NADPH-оксидазную активность НГ определяли по показателям NBT-тес-та, подсчитывая клетки с восстановленным формазаном (% формазан-позитивных клеток — % ФПК, и средний цитохимический индекс — СЦИ). Для оценки степени дополнительной стимуляции внутриклеточного метаболизма использовались функциональные нагрузочные тесты in vitro c зимозаном с расчетом коэффициентов мобилизации (КМ) [17].
Весь материал был подвергнут статистической обработке с использованием методов вариационной статистики с расчетом средних величин (М), ошибок средних величин (±m), средних квадратичных отклонений (±5). Достоверность различия между отдельными средними величинами определялась с помощью критерия Стьюдента [18]. Наблюдаемые различия считались не случайными, когда вероятность «р» ошибочного принятия нулевой гипотезы не превышала 0,05. Вычисления проводились с использованием компьютерной программы Biostat 4.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В результате проведенного комплексного исследования НГ нами было установлено, что у пациентов с ХГ относительное и абсолютное количество циркулирующих НГ достоверно не отличается от уровня НГ здоровых лиц. При ЯБ эти показатели достоверно выше контроля (Табл. 1).
Анализ результатов, полученных при определении фенотипических характеристик НГ у пациентов с ХГ, выявил достоверное увеличение относительного и абсолютного количества клеток, экспрессирующих CD14, CD15,
Таблица 1. Характеристика нейтрофильных гранулоцитов (М±т)
Показатель Контроль (п = 69) Хронический гастрит (п = 20) Язвенная болезнь желудка и ДПК (п = 11)
Лейкоциты, кл/мл 5401±166,5 5580±419,8 6160±638,4**
Нейтрофилы, % 52,91±1,17 55,21±1,85 63,64±3,45***
абс, кл/мл 2843±106,1 3027±281,8 3932±574,9***
Сот, % 38,08±2,27 43,94±3,93 54,12±6,04*
абс, кл/мл 1133±87,99 1214±161,2 1960±340,4***
СБ14, % 21±2,45 30,32±2,25* 30,1±5,62
абс, кл/мл 584,9±73,96 924,2±87,49* 1181±229,1**
СБ15, % 17,65±1,39 31,4±2,47*** 31,75±5,73*
абс, кл/мл 495,4±37,89 931,8±106*** 1438±328***
СБ16, % 39,56±2,43 58,47±4,04*** 61,12±7,99**
абс, кл/мл 1236±90,81 1675±170,7* 1921±343,5***
СБ80, % 14,92±1,86 25,5±2,2** 34,75±4,49**
абс, кл/мл 413,3±58,45 745,4±92,65* 1337±299,4**
СБ95, % 21,84±1,52 34,42±4,18*** 21,9±2,99
абс, кл/мл 628,4±58,95 1006±109,7** 1192±240,4***
НЬА^, % 12,8±1,38 26,71±2,18*** 22,5±4,62*
абс, кл/мл 373,9±52,17 639,6±80,32* 1110±341,9***
% ФАН 50,2±1,58 47,15±2,5 45,09±4,12
% ФПК сп 2,17±0,34 1,35±0,3 1,11±0,11
СЦИсп 0,23±0,02 0,3±0,04 0,49±0,05***
% ФПК ст 6,58±0,76 5,15±1,44 1,0±0,0***
СЦИст 0,39±0,03 0,41±0,05 0,56±0,07***
КМ, усл. ед. 4,5±0,61 4,95±1,46 0,92±0,07***
Примечание: *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001 по сравнению с группой контроля
CD16r CD80r CD95r HLA-DR рецепторы, за исключением молекулы CD11b (Рис. 1). Вероятно, это связано с хроническим характером воспаления, т.к. известно, что адгезионный рецептор CD11b/CD18 (Мас-1) является маркером ранней активации НГ [19].
Несколько иной профиль фенотипа НГ выявлен при ЯБ, что, по-видимому, обусловлено большей выраженностью воспалительного процесса и его деструктивным характером. Так, при ЯБ имеет место достоверное увеличение в 1,4 раза относительного количества CD11b + -НГ. С другой стороны по экспрессии другого маркера позитивной активации — CD95 — количество НГ у пациентов с ЯБ не отличается от контроля. Относительное коли-
чество НГ, несущих рецепторы СD15r CD14 и CD16r повышено при ЯБ в 1,8, 1,4 и 1,5 раза, соответственно, по сравнению с группой контроля. (Рис. 1а). Абсолютное количество НГ, экспрессирующих все исследуемые рецепторы, при ЯБ значительно выше, чем у здоровых лиц и превышает аналогичные показатели при ХГ (Рис. 1б). Это согласуется с полученными нами ранее данными, продемонстрировавшими, что уровни реагирования рецеп-торного аппарата (количество CD11b + -r CD16 + - и CD95 + -НГ) при ЯБ могут в 1,5 — 2 раза превышать средние параметры нормативных значений [20 — 22].
Необходимо отметить, что
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.