ЖУРНАЛ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ, 2007, том 62, № 6, с. 636-640
^=ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
УДК 543.544
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ ПАРАЦЕТАМОЛА, КОФЕИНА И АСПИРИНА НА СОРБЕНТЕ С ПРИВИТЫМИ НИТРИЛЬНЫМИ ГРУППАМИ И АНАЛИЗ ТАБЛЕТОК "АСКОФЕН П"
© 2007 г. Г. Б. Голубицкий*, Е. В. Будко**, Е. М. Басова***, В. М. Иванов****, А. В. Костарной*
*ОАО "Фармстандарт-Лексредства" 305039 Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18 **Курский государственный медицинский университет 305004 Курск, ул. К. Маркса, 3 ***Международный университет природы, общества и человека "Дубна" 141980 Московская обл., Дубна, ул. Университетская, 19 ****Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет
119992 ГСП-3, Москва, Ленинские горы Поступила в редакцию 25.01.2006 г.
Исследованы хроматографические свойства лекарственных препаратов - парацетамола, кофеина и аспирина на сорбентах с привитыми нитрильными группами. Изучено влияние концентрации ацето-нитрила, фосфата калия в подвижной фазе и рН подвижной фазы на удерживание названных компонентов, а также вероятной примеси - салициловой кислоты. По сравнению с ранее использовавшейся в серийном анализе колонке с сорбентом С18 полученные хроматограммы характеризуются более высокой эффективностью разделения, а предлагаемая методика экономичнее и экспресснее.
Таблетки "Аскофен П" жаропонижающего и противовоспалительного действия, содержащие парацетамол, аспирин (ацетилсалициловую кислоту) и кофеин, в течение нескольких лет выпускает ОАО "Фармстандарт-Лексредства". Содержание действующих веществ, а также салициловой кислоты, образующейся при возможном разложении аспирина, определяют методом ВЭ-ЖХ в обращенно-фазовом режиме на колонке с сорбентом типа С18. При содержании в подвижной фазе (ПФ) 17 об. % ацетонитрила и 0.025 М фосфатного буферного раствора с рН 2.5 времена удерживания компонентов (в мин): ацетонит-рил 1.603, кофеина 2.118, ацетилсалициловой кислоты 6.980, салициловой кислоты 9.952. Недостатки этой методики заключаются в неполном разделении парацетамола и кофеина, а пики аспирина и салициловой кислоты получаются несимметричными. Эти факторы отрицательно влияют на точность результатов, особенно при определении примеси салициловой кислоты, концентрация которой обычно сравнительно невелика.
В работе [1] подробно исследовано удерживание парацетамола, аспирина, кофеина и салициловой кислоты на сорбентах С18 с разной остаточной силанольной активностью и показаны возможности значительного улучшения характе-
ристик разделения этой смеси при оптимизации pH и состава ПФ.
Представляет теоретический и практический интерес исследование удерживания компонентов таблеток "Аскофен П" на сорбентах более высокой полярности. Ранее нами изучены возможности колонки с сорбентом Nova-Pak HP CN (4 мкм) [2-4] и показано, что сорбент с привитыми нитрильными группами слабее удерживает ряд лекарственных препаратов по сравнению с сорбентами С18, что позволяет повысить экспрессность и экономичность методик количественного анализа.
Цель данной работы - исследование хромато-графических свойств компонентов таблеток "Аскофен П" на колонке с сорбентом с привитыми нитрильными группами и разработка методики для серийного анализа.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Реагенты. Для приготовления подвижных фаз, а также для растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. сорт 0 (Криохром, Россия) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18.2 МОм/см, полученную на установке Direct Q (Millipore). В качестве стандартов (образцов сравнения) определяемых лекарственных веществ
220 240 260 280
300 320 X, nm
Рис. 1. Спектры поглощения кофеина (1), парацетамола (2), аспирина (3) и салициловой кислоты (4) в ПФ 10 об. % СН^ и 0.01 М КН2Р04, рН 5.
(PCO) использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям нормативной документации (НД). Все остальные использованнные реактивы имели квалификацию не ниже ч. д. а.
Аппаратура. Использовали хроматограф Waters Alliance 2695 с диодно-матричным детектором Waters 2996 ("мертвый" объем хроматографа по паспорту был менее 0.650 мл и колонку с сорбентом с привитыми нитрильными группами Zor-bax SB CN 3.5 мкм (Agilent Technologies) длиной 150 мм и внутренним диаметром 3.9 мм.
Приготовление растворов. Для выполнения анализа 20 таблеток "Аскофен П" взвешивали на аналитических весах и находили среднюю массу таблетки (с точностью 0.0001 г). Около 0.1250 г (точная навеска) растертых таблеток 5 мин встряхивали в мерной колбе емк. 100 мл в 20 мл смеси (1 : 1) ацетонитрил-вода. Полученный раствор разбавляли водой до метки и перемешивали. Параллельно готовили раствор РСО, содержащий 0.05 г аспирина, 0.05 г парацетамола, 0.01 г кофеина и 0.0015 г (готовили разбавлением) салициловой кислоты в 100 мл смеси (1 : 9) ацетонитрил-вода. Все растворы фильтровали через гидрофильный фторопластовый мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм, устойчивый в водно-аце-тонитрильных растворах.
Проведение анализа, расчет результатов. Хро-матографировали испытуемый раствор и раствор сравнения, получая не менее 3 хроматограмм каждого раствора. В качестве ПФ использовали раствор, содержащий 10 об. % CH3CN и 0.01 М КН2РО4 (pH 5.6). Объем вводимых проб и расход ПФ составляли 5.0 мкл и 1.0 мл/мин соответствен-
2.0 1.5 1.0
0.5 0
4 6 8 10 12 14 16 18 20
с(СН3СК), об. %
Рис. 2. Зависимость удерживания парацетамола (1), аспирина (2), кофеина (3) и салициловой кислоты (4) от концентрации ацетонитрила в ПФ на колонке с сорбентом Zorbax SB CN 3.5 мкм. 0.025 М КН2Р04, рН 5.6.
но. Определяемые вещества детектировали при 220 нм.
По площадям пиков определяемых компонентов находили количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле:
x = (^итсттс)/^еттн>
где 5и и Бст - средние площади пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого раствора и раствора сравнения соответственно; тст, тс и тн - массы стандарта определяемого вещества в растворе сравнения, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток для приготовления испытуемого раствора соответственно (в г).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Оптимальные условия анализа. Длина волны. Спектры поглощения компонентов и салициловой кислоты в ПФ, зарегистрированные диодно-матричным детектором хроматографа в режиме on line, приведены на рис. 1. Поскольку для определяемых веществ нет общего максимума поглощения, для детектирования выбрана длина волны 220 нм, обеспечивающая оптимальную чувствительность для всех компонентов.
Влияние концентрации ацетонитрила в ПФ показано на рис. 2. Удерживание всех изученных веществ с увеличением концентрации CH3CN в ПФ уменьшается. Установлено, что оптимальная концентрация ацетонитрила, обеспечивающая экспрессное и эффективное разделение данной
638
ГОЛУБИЦКИЙ и др.
0 0.005 0.010 0.015 0.020 0.030 0.040 0.050
с(КН2Р04), М
Рис. 3. Зависимость удерживания парацетамола (1), аспирина (2), кофеина (3) и салициловой кислоты (4) от концентрации КН2РО4 в ПФ на колонке с сорбентом Zorbax SB CN 3.5 мкм. 8 об. % СН3С^ рН 5.6.
смеси, равна 10 об. %. При более низком содержании удлиняется анализ, при более высоком - не разделяются пики парацетамола и салициловой кислоты.
Влияние концентрации КН2РО4 в ПФ на удерживание исследуемых веществ показано на рис. 3. Концентрация КН2РО4 не влияет на хроматогра-фическое поведение парацетамола и кофеина, так как при изученных условиях эти вещества находятся в молекулярной форме. Аспирин и салициловая кислота при отсутствии фосфата в ПФ практически не удерживаются. При увеличении концентрации КН2РО4 до 0.01 М их удерживание быстро возрастает, лишь незначительно изменя-
1п k
2.5
2.0 1.5 1.0
0.5
3
2.90 3.27 3.71 4.29 4.73 5.23 5.75 6.26
рН
Рис. 4. Зависимость удерживания парацетамола (1), аспирина (2), кофеина (3) и салициловой кислоты (4) от рН подвижной фазы на колонке с сорбентом Zor-Ьах SB CN 3.5 мкм. 5 об. % СН3С^ 0.025 М КН2РО4.
ясь при дальнейшем добавлении соли. Для успешного разделения этих веществ концентрация фосфата не должна быть ниже 0.01 М. Причина такого хроматографического поведения анионов рассмотрена в работе [2] на примере анальгина.
Влияние рН подвижной фазы на удерживание компонентов показано на рис. 4. Парацетамол и кофеин, не проявляющие в использованном растворителе заметных кислотно-основных свойств, не изменяют удерживания при изменении рН. Удерживание аспирина и салициловой кислоты снижается при их диссоциации (имеет промежуточное значение при рК ~ 4.5).
Типичная хроматограмма раствора таблеток, получаемая по предлагаемой методике, приведена на рис. 5. Время удерживания компонентов (в мин): ацетилсалициловой кислоты 2.315, салициловой кислоты 3.484, парацетамола 4.176 и кофеина 5.909.
Метрологические характеристики. Для подтверждения достоверности получаемых результатов определения компонентов препарата и примеси были проанализированы 17 модельных смесей, содержащих определяемые и все вспомогательные вещества таблеток. Смеси отличались содержанием действующих веществ, которые вводили в диапазоне от 90 до 110% от нормируемого количества. Салициловую кислоту вводили в количествах от 10 до 150% ПДК, которая составляет 3% от содержания аспирина в таблетке. Установлено, что результаты анализа не имеют систематической погрешности, так как средние относитель-
Усл. ед.
0.70 - со ы чо
0.60 - 'о _ о "о 1
0.50 ~ о о й
■<5 - о < рч
0.40 сл
0.30 00 ^ со о »о . е
0.20 тз 'о о и
0.10 о А
0 V V А
, , , д д 1 д 1 1 1 а 1 л 1 1 л а 1 1 1
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0
t, мин
Рис. 5. Хроматограмма раствора таблеток "Аскофен П", полученная по предлагаемой методике.Колонка Zorbax SB CN 3.5 мкм. 10 об. % СН3С^ 0.025 М КН2РО4; рН 5.6.
2
1
4
Таблица 1. Метрологические характеристики методики определения аспирина, парацетамола, кофеина и ацетилсалициловой кислоты в таблетках "Аскофен П"
Компонент 5max, г 2 е тах £ % е % ср' Дег, % е % сг тах' /и
Аспирин 0.00037
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.