Из литературных источников следует, что пептид тафтсин усиливает реакцию ГЗТ в дозе 25 мкг/мышь, следовательно, полученные данные соответствуют мировой практике [7]. Различий при развитии клеточного иммунного ответа после иммунизации ЭБ между свободным и находящимся в комплексе пептидом обнаружено не было. Следовательно, ком-плексообразование не изменяет способность тафтсина влиять на интенсивность ГЗТ.
Выводы. Таким образом, в используемой дозе при изученной схеме введения комплекс кукурбит[7]урила с тафтсином стимулирует гуморальное и клеточное звенья иммунной системы в ответ на тимус-зависимый антиген (ЭБ). Комплексообразование не влияет на выраженность клеточного иммунного ответа, и в то же время усиливает иммуномодули-рующие свойства пептида, вызывая повыше-
ние антителообразования. Кукурбит[7]урил в используемой дозе в данном исследовании не проявляет иммуномодулирующих свойств.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Перельмутер В. М., Одинцов Ю. Н., Климен-тьева Т. К. Сибирский онкологический журнал 2004, 4 (12), 57-62.
2. Hennig A., Ghale G., Nau W. M. Chem. Commun. 2007,1614-1616.
3. Uzunova V. D., Cullinane C., Brix K., et al. Org. Biomol. Chem. 2010, 8, 2037-2042.
4. Пашкина Е. А., Щепотина Е. Г., Гришина Л. В. и др. Вестник Уральской медицинской академической науки 2011, 2/2 (35), 50-51.
5. Cunningham A. Nature 1965, 207, 1106-1107.
6. Tzenoval E., Segal S., Stabinsky Y. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978, 75, 3400-3404.
7. Florentin I., Chung V., Martinez J. et al. Methods Find Exp. Clin. Pharmacol. 1986, 8 (2), 73-80.
EFFECT OF PEPTIDE TUFTSIN COMPLEX WITH CUCURBIT[7]URIL ON THE HUMORAL AND CELLULAR IMMUNE RESPONSES IN VIVO
Pashkina E. A., Grishina L. V., Lubimov G. Y., Kozlov V. A.
FSBI "Research Institute of Clinical Immunology" RAMS SB, Novosibirsk, Russia
In laboratory environment there has been examined the effect of immunomodulator taftsin complexed with cucurbit[7]uril on the cellular and humoral immunity components of laboratory animals. It was assumed that the molecule taftsin complexing protects against biodegradation and enhance the action of the peptide. It has been established that the complex effectively stimulates humoral component and has a similar effect on the cellular component, compared to the free taftsin in response to a thymus-dependent antigen.
Key words: cucurbit[7]uril, taftsin, peptides, complexation
ИММУННЫЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ НЕВЫНАШИВАНИЯ В УСЛОВИЯХ ЭКСПОЗИЦИИ ГИДРОКСИЛИРОВАННЫМИ БЕНЗОЛАМИ
Предеина Р. А.1, Бубнова О. АЛ2, Вдовина Н.А.1, ВаранкинаА. В.2
ФБУН «ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения»; 2Пермский государственный национальный исследовательский университет,
Пермь, Россия
Проведенная оценка результатов иммунодиагностики и анализа полиморфизма генов женщин фертильного возраста, выявила повышенную распространенность минорных аллелей генов детоксикации CYP1A1, СРОХ, SULT1A1, ассоциированную с контаминацией биосред фенолами и специфическим иммунологическим ответом на гаптен. Представленные данные свидетельствуют о преобладании вариантных аллелей онкогенов и генов, отвечающих за апоптоз в гетерозиготном состоянии у женщин с угрозой невынашивания в условиях экспозиции фенолами.
Ключевые слова: гидроксилированные бензолы, угроза невынашивания, 1дС к фенолу, гены детоксикации
Актуальным является использование современных диагностических иммунологических и молекулярно-генетических технологий, в частности проточная цитометрия и ПЦР, что позволяет провести объективную и достоверную оценку иммунного ответа и полиморфизма его генов у женщин с невынашиванием в условиях повышенной техногенной химической экспозиции [1, 2, 3].
Целью исследования является обоснование иммунологических и генетических маркеров у женщин с угрозой невынашивания в условиях повышенной внешнесредовой экспозиции фенолами.
Материал и методы. При углубленном изучении состояния на состояние здоровья женщин, проживающих в г. Перми с угрозой прерывания беременности выполнено иммунологическое диагностическое обследование 22 женщин (группа наблюдения), проживающих в зоне воздействия и 24 женщин, проживающих вне зоны воздействия факторной нагрузки (группа контроля).
Изучение маркеров клеточной дифферен-цировки методом проточной цитометрии -определение популяций и субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16+ CD56+) и показателей, характеризующих клеточную гибель (CD25+, CD95+) производилось на проточном цитометре FACSCalibur фирмы «Becton Dickinson» с использованием универсальной программы CellQuestPrO. Идентификация онкомаркеров (СА125, СА72-4, CYFRA 21-1), цитокинов (IL-^ета, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y, TNF), а также показателей гиперчувствительности (содержание IgE общего, содержание IgG специфического к фенолу) осуществлялась методом иммунофер-ментного анализа.
Для исследования полиморфных вариантов в изучаемых генах использовали методику ПЦР, в основе которой лежит реакция амплификации и детекция продуктов этой реакции в режиме реального времени с помощью флюоресцентных меток, которыми предварительно помечают используемые для реакции амплификации праймеры. Для одновременной детекции нескольких продуктов реакции используют разные флюоресцентные метки и зонды (мультиплексная ПЦР). В качестве праймеров использовали участок ДНК генов CYP1A1, MMP9, CPOX, VEGF, eNO-синтаза, ТОТальфа, BRCA1, BRCA2, SULT1A1, ESR1.
Для определения генотипа человека использовали метод аллельной дискриминации, когда различия между гетерозиготами, гомозиготами дикого и минорного вариантов устанавливали по различиям в протекании реакций амплификации соответствующих праймеров.
Определение органических соединений (мг/л) выполнялось в соответствии с МУК 4.1.2102-4.1.2116-06 на газовом хроматографе.
Для статистической обработки результатов исследования применялись современные методы математической статистики (параметрический критерий Стьюдента с учётом нормального распределения переменных в сравниваемых группах; коэффициент корреляции Спирмена). Различия между группами считали статистически значимыми при р<0,05.
Результаты и обсуждение. Исследования качества атмосферного воздуха были проведены на содержание фенола, крезо-лов. Результаты исследований свидетельствовали о наличии превышений разовых и среднесуточных гигиенических нормативов в атмосфере: фенола - до 2,3 ПДКс.с.; п,-м-крезола - до 2,0 ПДКс.с., до 7,4 ПДКм.р.; о-крезола - до 2,0 ПДКм.р.
По результатам иммунологического исследования выявлены нарушения: клеточного звена иммунитета (активация фагоцитоза, нарушение экспрессии лимфоцитарных фенотипов, отвечающих за апоптоз, активационных маркеров СБ95+ и СБ25+), гуморального звена иммунитета (гиперпродукция ^А и дефицит ^М и IgG), специфической чувствительности к компонентам факторной нагрузки (повышение содержания антител к фенолу), нарушения экспрессии фетальных белков по отношению к группе сравнения СА125, СА72-4, CYFRA 21-1, изменения синтеза медиаторов цитокинов ^-8, ^N-7, а также кортизола и се-ротонина. Установлен повышенный по сравнению контрольной группой уровень специфической сенсибилизации к фенолу по критерию IgG (содержание специфического IgG к фенолу - 0,194 у.е., контроль - 0,173 у.е.).
Установлены негативные ассоциации полиморфизма генов детоксикации (CYP1A1, СРОХ, SULT1A1) характеризующиеся повышенной над группой контроля распространенностью гетерозиготного варианта генов СРОХ, SULT1A1 CYP1A1 (9893АЮ), соответственно в 2,0 и 1,5 раза (табл.). Выявленные ассоциации усугубляются тем, что у женщин зоны
экспозиции фенолами повышена частота минорной гомозиготы гена CYP1A1 (в 2,5 раза), а также гетерозиготы генов ММР9, BRCA1, BRCA2, что указывает на наличие негативной генетической вариабельности с предрасположенностью к онкологическим и аутоиммунным заболеваниям.
Факторами, модифицирующими иммунный ответ, могут выступать компоненты внеш-
несредовой нагрузки, так как по результатам проведенных исследований направленность и достоверность отклонений формировались за счет прежде всего о-крезола и м-крезола.
По результатам иммуногенетического обследования можно сделать вывод, что в группе женщин проживающих вне зоны риска иммунологическая толерантность к вынашиванию плода развивается по стандартным канонам развития интрагенитальной патологии, в то же время изменения и особенности иммунологического статуса и формирования патологии у женщин, проживающих в «зоне воздействия» указывают на наличие дополнительных факторов коррекции патологических нарушений, которые вносят особенности в объективный статус, но приводят к аналогичному результату - невынашиванию беременности. Установленные генетические особенности у женщин основной группы, характеризуются мутациями генов, отвечающих за ферментсвязывающую активность детоксикации.
Таким образом, оценка результатов иммунодиагностики и анализа полиморфизма генов, выявила особенности генетического полиморфизма генов детоксикации CYP1A1, CPOX, SULT1A1, а также их ассоциацию с контаминацией биосред фенолами и специфическим иммунологическим ответом на гаптен. Представленные данные свидетельствуют о негативных иммуногене-тических ассоциациях экспозиции фенолами с угрозой невынашивания. Маркирование чувствительных генетических и иммунных показателей послужит основой создания критериев комплексной оценки формирования экстра- и интрагенитальной патологии в условиях воздействия антропогенных химических факторов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Таблица. Полиморфизм генов у женщин с угрозой невынашивания в условиях экспозиции фенолами (п=22) и ее отсутствия (п=24)
Группа наблюдения,% Группа контроля,%
Копропорфири-ногеноксидаза ЛЛ 54,5 ЛЛ 78,3
AC 40,9 AC 21,7
^ 4,5 ^ 0
Фактор некроза опухоли GG 88,9 GG 70
AG 11,1 AG 0
ЛЛ 0 ЛЛ 30
Цитохром P-450 GG 68,2 GG 82,4
AG 4,5 ЛG 5,9
ЛЛ 27,3 ЛЛ 11,8
ген В^Л1 GG 57,1 GG 75
GA 42,9 GЛ 25
ЛЛ 0 ЛЛ 0
ген В^Л2 ЛЛ 71,4 ЛЛ 100
GA 28,6 GЛ 0
GG 0 GG 0
ген Е8Я1 GG 73,7 GG 75
GA 26,3 GA 25
ЛЛ 0 ЛЛ 0
ген MMP9 ЛЛ 36,8 ЛЛ 39,1
AG 63,2 ЛG 30,4
GG 0 GG 30,4
ген 8ииГ1Л1
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.