ИММУНОФЕНОТИП И ГЕНОТИП В ПАТОГЕНЕЗЕ И ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА С
Балмасова И. П., Ющук Н. Д., Сафиуллина Н. Х., Малова Е. С., Федосеева Н. B.
ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им.А.И.Евдокимова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Статья посвящена исследованию соответствия иммунофенотипа и генотипа у больных хроническим гепатитом С результатам получения быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию пегилированным интерфероном а и рибавирином. Было установлено, что точность прогнозирования эффективности противовирусной терапии с учетом полиморфизма гена ^-28В значительно усиливается при учете роли клеток иммунной системы фенотипе пациента. Так, у больных хроническим гепатитом С, являющихся носителями благоприятной для развития быстрого вирусологического ответа аллели Г812979860СС/ Г88099917ТТ, успех терапии пегилированным и рибавирином определяется преимущественно содержанием в крови цитотоксических Т-клеток, а в случае неблагоприятных аллелей гс12979860СТ, TT/rs8099917ТG, GG - числом регуляторных Т-клеток, высоко активированных Т-лимфоцитов, пролиферативной активности естественных киллеров.
Ключевые слова: иммунофенотип, полиморфизм гена 1Ь-28В, естественные киллеры, регуляторные Т-клетки, хронический гепатит С
При высоком медико-социальном значении такого заболевания как хронический гепатит С (ХГС) изучение иммунопатогенеза заболевания, а также механизмов резистентности больных к терапии основными противовирусными препаратами (пегилированным интерфероном а и рибавирином) позволяет не только повысить эффективность лечения, но и выявить факторы, ответственные за спонтанное освобождение организма от возбудителя и развитие хронического инфекционного процесса [1]. Определенный прорыв в понимании значения отдельных факторов, ответственных за эффективность лечения, возник, в связи с открытием в последние годы феномена ассоциации ответа на лечение пегилиро-ванным 1БЫа и рибавирином пациентов, инфицированных генотипом 1Ь вируса гепатита С (ВГС), а также спонтанной элиминации ВГС из организма с вариантом полиморфизма гена 1Ь-28В человека [2, 3]. Было установлено, что аллельный вариант «12979860 СС по сравнению с «12979860 СТ и «12979860 ТТ является наиболее благоприятным с точки зрения получения быстрого и устойчивого ответа на лечение (у 80% пациентов), также как генотип
«8099917 ТТ был сопряжен с чувствительностью к названным терапевтическим воздействиям в гораздо большей степени, чем варианты rs8099917ТG и rs8099917GG [4].
По данным, полученным к настоящему времени, можно заключить, что индивидуальное предсказательное значение генотипа человека не достаточно высоко, поскольку устойчивого вирусологического ответа может достичь пациент как с благоприятным, так и неблагоприятным генотипом, и уже известен ряд факторов, которые могут модифицировать влияние генотипа человека на эффективность противовирусной терапии [5, 6]. В частности, в литературе есть сведения о взаимосвязи качества вирусологического ответа на лечение пегилирован-ным 1БЫа и рибавирином с функциональным состоянием естественных киллерных клеток (ЕК) и уровнем специфического Т-клеточного ответа на антигены ВГС [7, 8].
Ранее нами было показано, что в развитии хронического гепатита С определяющее патогенетическое значение приобретают три иммунофенотипа - (1) при ключевой роли цитотоксических Т-клеток, (2) при ключевой роли регуляторных Т-клеток, (3) при ключе-
вой роли естественных киллеров [9, 10]. Целью данного исследования служил анализ соответствия того или иного иммунофенотипа аллельному варианту полиморфного гена IL-28В и развитию быстрого вирусологического ответа (БВО) на стандартную терапию пеги-лированным интерфероном а и рибавирином у больных хроническим гепатитом С.
Для выполнения исследования у 38 больных ХГС методом ПЦР в модификации «примыкающих проб» определялись генотипические варианты rs8099917 и rs8099917 с идентификацией однонуклеотидной замены (С или Т для rs12979860 и Т или G для rs8099917). Дважды в процессе исследования определялась вирусная нагрузка ВГС методом ПЦР - до лечения и через 4 недели после начала лечения, в последнем случае, - с целью регистрации быстрого вирусологического ответа (БВО) в виде полного отсутствия вируса в крови.
Исследование крови выполнялось методом проточной цитофлуориметрии с использованием серии меченных моноклональных антител для определения базовых иммунограмм, а также числа лимфоцитов следующих фенотипов и функциональных свойств: CD3+CD25+ и CD3+CD25high (активированные Т-лимфоциты), CD3+FoxP3+ и CD3+CD25highFoxP3 + (регулятор-ные Т-клетки), CD3+Ki67+ (пролиферирующие Т-лимфоциты), CD3+CD4+Ki-67+ (пролиферирующие Т-хелперы), CD3+CD8+Ki-67+ (про-лиферирующие цитотоксические Т-клетки), CD16+CD56+Ki67+ (пролиферирующие ЕК). Исследованию предшествовало инкубирование лимфоцитарной взвеси в присутствии фито-гемаглютинина (позитивный контроль), а негативным контролем служило инкубирование клеток в среде, не содержащей митоген. Параллельно устанавливалась пролиферативная активность лимфоцитов в ответ на антигены ВГС 1b. Все иммунологические исследования проводились дважды - до лечения и через 4 недели после окончания лечения. Статистическая обработка данных проводилась на основе пакета программ SPSS.
Как показали результаты генотипирования, из 38 больных ХГС 16 человек были носителями аллельного варианта СС-ТТ (группа 1), который, по данным литературы, является весьма благоприятным для развития быстрого вирусологического ответа на терапию пе-гилированным IFNa и рибавирином. У других 22 больных (группа 2) определяемый генотип
включал хотя бы одну неблагоприятную аллель (СТ-ТТ - 7 человек, СТ-TG - 13 человек, TT-TG - 2 человека). Среди больных с благоприятным для лечения аллельным вариантом у 12 человек был получен быстрый вирусологический ответ на стандартную терапию (подгруппа 1А), а у 4 пациентов после лечения продолжала регистрироваться вирусная нагрузка ВГС в крови (подгруппа 1Б). При неблагоприятных аллельных вариантах определение быстрого вирусологического ответа позволило разделить больных примерно на 2 равные подгруппы - с наличием БВО в составе 10 человек (подгруппа 2А) и отсутствием БВО в составе 12 человек (подгруппа 2Б). Этот фрагмент исследований продемонстрировал, что прогнозирование успеха терапии пегилированным IFNa и рибавирином на основе варианта полиморфизма гена ГЬ-28В не является абсолютным и, действительно, требует дополнительных критериев.
Иммунологические исследования показали, что не удалось установить ни одного показателя, который позволял бы дифференцировать все 4 подгруппы одновременно. Поскольку основной целью исследования служил прогноз развития БВО, то в этой ситуации при анализе каждого аллельного варианта необходимо было выделить в рамках каждого из них патогенетически значимые иммунологические признаки, характеризующие наличие или отсутствие БВО.
Оказалось, что для аллели СС-ТТ, оцениваемой в литературе как благоприятная для развития БВО у больных ХГС, иммунологические критерии включали ряд показателей базовой иммунограммы (абсолютное содержание в крови СБ3+, СБ3+СБ4+, СБ3+СБ8+, СБ 19+ клеток) при наиболее выраженных сдвигах в сторону роста числа цитотоксических Т-кле-ток после лечения (СБ3+СБ8+), особенно под влиянием инкубирования в присутствии антигенов ВГС 1Ь.
Для неблагоприятных аллелей «не СС-ТТ» (СТ-ТТ, CТ-TG, TT-TG) патогенетически значимые иммунологические критерии были совершенно иными. До лечения они касались падения относительного числа пролифери-рующих ЕК (СБ16+/СБ56+/к1-67+), роста числа высоко активированных Т-клеток (СБ3+/ СБ25Ы®Ь), в том числе с фенотипом регулятор-ных Т-клеток (СВ3+/СБ25ы^охР3+). После лечения содержание этих клеток в крови боль-
ных ХГС этой группы проявляло четкую зависимость от наличия или отсутствия быстрого вирусологического ответа.
Так, в тех случаях, когда пацинты с неблагоприятным генотипом все-таки отвечали развитием БВО на терапию пегилированным интерфероном а и рибавирином число про-лиферирующих ЕК в их крови достоверно возрастало, а содержание высоко активированных Т-клеток падало на фоне полного отсутствия регуляторных Т-клеток. При отсутствии БВО число пролиферирующих ЕК вне зависимости от условий культивирования достоверно не изменялось, но значительно возрастал показатель CD3+CD25high лимфоцитов, как и пул регуляторных Т-клеток.
Таким образом, между установленными ранее тремя ведущими иммунофенотипами патогенеза хронического гепатита С и полиморфизмом гена IL-28B существует определенная взаимосвязь, которая влияет на развитие быстрого вирусологического ответа.
Большинство современных исследователей декларирует, что развитию хронического гепатита С сопутствует функциональное истощение Т-клеток, которое регистрируется как со стороны CD8+ лимфоцитов [11, 12], так и CD4+ [13]. В процессе лечения пегилированным IFNa и рибавирином происходит позитивная коррекция количественных и функциональных отклонений со стороны CD4+ и CD8+ Т-клеток, что коррелирует с развитием устойчивого вирусологического ответа [8]. Имеются сведения о контроле виремии у больных ХГС с участием В-клеток [14].
Проведенные нами исследования показали, что все эти иммунологические признаки действительно могут иметь значение в предсказании успеха БВО, но только при благоприятном аллельном варианте гена IL-28B -СС-ТТ, поскольку в случае неблаприятного варианта эффективность стандартного лечения проявляет зависимость от совершенно других факторов - формирования в организме пула регуляторных Т-клеток, возможности подавления этого процесса в ходе противовирусной терапии и влияния последней на способность к пролиферации естественных киллеров.
Выводы:
1. Прогнозирование успеха терапии пеги-лированным IFNa и рибавирином на основе варианта полиморфизма гена IL-28B не явля-
ется абсолютным и требует дополнительных иммунологических критериев.
2. У больных хроническим гепатитом С, являющихся носителями благоприятной для развития быстрого вирусологического ответа аллели rs12979860CC/rs
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.