Тематический выпуск «Российский научный форум на Урале»
633
ASSOCIATION BETWEEN INFLAMMATORY COMPLICATIONS AFTER JOINT IMPLANTATION AND LYMPHOCYTE AND MONOCYTE IMMUNOPHENOTYPE
Tchuksina J. J., Shevelev S. V., Moskaletz O. V., Yazdovskiy V. V., Eremin A. V., Oshkukov S. A.
Moscow Regional Research Clinical Institute of M. F. Vladimirskogo, Moscow, Russia
Inflammatory complications after joint replacement still remain the actual orthopedic problem, Immune disfunction is the main factor associated with the risk of local postoperative infection in these patients. We studied lymphoyte and monocyte immunophenotype in 40 patients with periimplant in-flammatoin after large joint replacement. The expression of CD3, CD4, CD8, CD19, CD14, CD16/56, HLA-DR, CD25-antigens as well as CD4+CD45RA+ and CD4+CD45RO+ cell numbers were evaluated. All patients were devided into 3 grooops according to Coventry-Fitzgerald-Tsukayama classification. We revealed, that acute inflammatory process (stage 1) was associated with increased numbers and functional activity of T- and NK-cells and decreased numbers of T-memory cells. Slowly developed inflammation and long duration of the disease (stage 3) were characterised by significantly increased T-regulatory and T-memory cell numbers and decreased T-naive» cell numbers. Monocyte membrane HLA-DR expresson and B-cell numbers correlated with the severity of inflammation.
Key words: endoprotesis, joint, inflammfation, immunophenotype, lymphocyte, monocyte
ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ ПО ПРОГРАММЕ R-FC
Чуксина Ю. Ю., Шевелев С. В., Катаева Е. В., Голенков А. К.
ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М. Ф. Владимирского», Москва, Россия
Высокая эффективность таргетной терапии хронического лимфолейкоза, в частности, программы R-FC, доказана фактами увеличения беспрогрессивной и общей выживаемости пациентов. Часто встречающиеся инфекционные или аутоиммунные осложнения у больных хроническим лимфолейкозом свидетельствуют о несостоятельности факторов адаптивного и врожденного иммунитета, что обосновывает актуальность их дальнейшего изучения. Было проведено иммунофенотипирование циркулирующих лимфоцитов 60 пациентов хроническим лимфолейкозом в динамике терапии R-FC методом 4-цветной проточной цитометрии по В-, Т-, NK-клеточным антигенам и маркерам их активации (CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56, CD25, HLA-DR, CD95, CD62L, CD127, CD294), оценено соотношение наивных (CD4+/ CD45RA+) и Т-клеток памяти (CD4+/CD45RO+). Выявлены иммунологические прогностические критерии ремиссии, прогрессирования или рецидива заболевания у больных ХЛЛ.
Ключевые слова: хронический лимфолейкоз, иммунофенотип, лимфоциты периферической крови, таргетная терапия
Введение. ХЛЛ развивается при накоплении медленно пролиферирующих, долгоживущих, СБ5+ В-клеток с дефектами апоптоза и характеризуется разнообразием клинической картины. Клетки ХЛЛ СБ5+, СБ19+, СБ20+, СБ23+,
уровень экспрессии СБ20+ и СБ79Ь+ снижен относительно нормы. Высокая эффективность иммунохимиотерапии в лечении больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) таргетны-ми препаратами на основе моноклональных
634
Иммунопатология
антител (программа R-FC (Ритуксимаб, Флю-дарабин, Циклофосфан) доказана фактами увеличения беспрогрессивной и общей выживаемости пациентов.
Ключевую роль в элиминации неопластических клеток играет специфический (адаптивный) клеточный иммунитет, реализуемый Т-лимфоцитами и неспецифический (врожденный) иммунитет, реализуемый NK-клетками и макрофагами.
Нередко при лечении встречаются инфекционные, вирусные или аутоиммунные осложнения, также связанные с недостаточностью адаптивного Т-клеточного иммунитета, регулирующего большинство иммунологических реакций макроорганизма.
В настоящее время фенотипические и функциональные особенности Т-лимфоцитов у больных ХЛЛ изучены недостаточно.
Цель: выявление взаимосвязи между изменением фенотипических характеристик Т-лим-фоцитов, отражающих функциональную гетерогенность иммунорегуляторных клеток (Т-регуляторные клетки, субпопуляции Т-хел-перных лимфоцитов, NK-лимфоцитов) и клинической эффективностью программы R-FC у первичных и резистентных пациентов хроническим лимфолейкозом.
Материал и методы: Было обследовано 60 больных ХЛЛ. У 50% пациентов выявлена 2 стадия заболевания, у 50% пациентов -3 и 4 стадии. Пациенты были обследованы до начала лечения, в процессе и после проведения 6 курсов терапии. Кратность иммунофено-типических исследований составила от 1 до 7.
Клиническую эффективность лечения больных ХЛЛ оценивали по критериям NCI-WG (1996) как полную ремиссию (ПР), частичную ремиссию (ЧР), стабилизацию (СБ) и прогрес-сирование болезни (ПБ). ПР была достигнута у 35 пациентов, из них иммунофенотипическая ремиссия - у 30% к 5-6 курсам терапии.
Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови проводилось методом 4-цветной проточной цитометрии («Becton Dickinson", США) по В-, Т-, NK-клеточным антигенам и маркерам их активации. Оценивалась экспрессия CD25, HLA-DR, CD95, CD62L на Т- и В-лимфоцитах, определялось содержание циркулирующих Т-регуляторных клеток (CD4+/CD25hi+/CD127-), Т-хелперных лимфоцитов 2 типа (CD4+/CD294+), соотношение наивных Т-хелперных лимфоцитов (CD4+/
CD45RA+) и Т-клеток памяти (CD4+/CD45RO+). Выраженность экспрессии антигенов оценивалась по параметру средней интенсивности флюоресценции (МЙ).
Результаты. До начала терапии высокое содержание CD20+ лимфоцитов ПК выявлено у 59 (99%) пациентов в диапазоне от 50 до 96% позитивных клеток. Терапия ритуксимабом быстро снижает количество как нормальных, так и злокачественных CD20+ В-клеток в периферической крови, и их число обычно остается низким или не определяется вообще в течение 2-6 месяцев. По нашим данным, количество В-клеток обычно возвращается к нормальному уровню в течение 8-12 месяцев терапии после достижения полной ремиссии. Число пациентов, позитивных по экспрессии CD38-антигена на В-лимфоцитах ПК (более 20% позитивных клеток), составило 40%. У 55% ациен-тов ХЛЛ до начала терапии количество CD25+ В-лимфоцитов превышало уровень 20%.
Установлено, что у пациентов ХЛЛ экспрессия CD25 ^-^-2) на В-клетках вариабельна. По данным литературы, экспрессия CD25 на В-лимфоцитах отражает не только раннюю активацию этих клеток, но и их пролифера-тивный потенциал (3,4). Роль экспрессии рецептора ГЬ-2 на В-лимфоцитах (CD25+/CD19+) в патогенезе ХЛЛ изучена недостаточно. Содержание В-лимфоцитов, экспрессирующих R-IL-2 ^25+^19+) в дебюте ХЛЛ варьировало от 0,06 до 76%. Содержание CD25+/CD19+ клеток более 30% от популяции клеток В-ХЛЛ отмечено у 37% пациентов в дебюте заболевания и у 92% пациентов, вышедших в рецидив после предшествующих курсов терапии. При достижении пациентами ПР на фоне элиминации опухолевого клона выявлено достоверное снижение содержания CD25+B-лимфоцитов до 0,73±0,13%, в то время, как при ПБ отмечено существенное увеличение этого показателя (46,8±5,4%) по сравнению с исходным уровнем (23,5±6,5%). До начала терапии у больных ХЛЛ по сравнению с нормой выявлено выраженное увеличение абсолютного числа Т-лимфоци-тов (5046,7±846,3) за счет Т-цитотоксической (2434,7±471,1), но не Т-хелперной субпопуляции (1995,6±325), снижение содержания N0-лимфоцитов. В результате лечения при ЧР и ПР отмечено восстановление до нормы абсолютного числа CD3+лимфоцитов, CD3+CD8+, NK-клеток (CD3-CD16+CD56+) и NKT-лимфоцитов (CD3+CD16+56+) только у 50-75% пациентов.
Тематический выпуск «(Российский научный форум на Урале»
635
Даже при достижении ПР у 75% пациентов сохранялось выраженное снижение абсолютного количества СШ+СБ4+ лимфоцитов (391,1±0,06) по сравнению с нормальными показателями (895±0,23). При ПБ выявлено смещение дисбаланса в содержании цитотоксической (СБ3+/ СБ8+) и хелперной (СБ3+/СБ4+) субпопуляций Т-лимфоцитов, рост числа NK-клеток. Содержание Т-регуляторных клеток (СБ4+/ СБ25Ы+СБ127-) до лечения было снижено (1,9±0,5%) по сравнению с нормой (3,7±2,1%), при достижении ПР отмечалось их увеличение до 4,8±1,4%, что сопровождалось и увеличением активированных Т-лимфоцитов: СБ3+тА^+ (30,8±6,7% при норме 6,3±0,7%), СБ3+СБ95+ (65,9±5,3%), выраженным преобладанием Т-лимфоцитов памяти (CD4+/CD45RO+) (36,7±3,4%) над наивными Т-лимфоцитами (CD4+/CD45RA+) (2,1±0,6%), причем последние были снижены по сравнению с нормой (32,7±5,2%) примерно в 20 раз. Содержание CD3+CD62L+ лимфоцитов было снижено у пациентов ХЛЛ при ПР (33,1±2,5%) по сравнению с нормальными значениями (64,98±3,8%). Уровень Т-хелперных лимфоцитов 2 типа (CD4+/ СD294+) в пределах CD3+клеток у больных ХЛЛ при достижении ПР составил 5,6±1,3%, что достоверно не отличалось от нормы.
Популяция CD4+/CD25hi+ Т-клеток человека гетерогенна по функциональным свойствам и фенотипическим признакам. Она включает в себя популяции пролиферирующих CD4+/
CD45RO+/CD45RA+CD25low Т-клеток и «регуля-торных» CD4+CD45RO+CD25hi Т-лимфоцитов. Идентификацию этих клеток принято проводить по совокупности параметров экспрессии молекул CD38, CD62L, CD95, HLA-DR (1, 2).
Выводы. Экспрессия R-IL-2 на В-клетках может служить прогностическим критерием прогрессирования или рецидива заболевания у больных ХЛЛ. Выраженное снижение абсолютного содержания Т-хелперной субпопуляции лимфоцитов при ПР происходит за счет наивных Т-лимфоцитов (CD4+/ CD45RA+ и CD3+CD62L+). Усугубление дисбаланса в содержании цитотоксической и хелперной субпопуляций Т-лимфоцитов, рост числа NK-клеток может свидетельствовать о ПБ. Выраженная активация Т-лимфоцитов по экспрессии HLA-DR- и CD95-антигенов отражает интенсивность антигенной нагрузки и повышенную готовность к апоптозу.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Baecher-Allan C., Brown J. A., Freeman G. J., Haf-ler D. A. J. Immunol. 2001, 167 (3), 1245-1253.
2. Johannisson A., Festin R. Cytometry 1995,19 (4), 343-352.
3. Khoudoleeva O., Gretsov E, Barteneva N, Vorobjev I. Pathology and Laboratory Medicine International. 2011, 3, 7-16.
4. Ярилин А. А. Иммуно
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.