CARBOHYDRATE-BINDING PROPERTIES OF C-REACTIVE PROTEIN Chikalovets I. V.1, Kotov A. S.2, Chernikov O. V.1, Molchanova V. I.1, Lukyanov P. A.1
'G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry FEB RAS;
2Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
The interaction of C-reactive protein (CRP) from ischemic heart disease, sepsis and cancer patients with some plasma glycoproteins was studied. Found that glycosylated forms of CRP interact differently with fibronectin, laminin, fetuin, asialofetuin and immunoglobulin G, demonstrating carbohydrate specificity for terminal galactose residues and mucin-type carbohydrate chains. This binding was inhibited by mono- and disaccharides, confirming the functional role of CRP as a lectin. Thus, it appears that structural changes in CRP molecule during various pathological processes play an important role in its carbohydrate-binding properties and are essential for its activity in vivo.
Key words: C-reactive protein, glycosylation, lectin, carbohydrate-protein interaction
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА НЕОНАТАЛЬНОЙ СМЕРТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ С ЭКСТРЕМАЛЬНО НИЗКОЙ МАССОЙ ТЕЛА
Чистякова Г. Н.
ФГБУ «Научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Екатеринбург, Россия
С целью определения наиболее информативных клинико-лабораторных показателей риска летального исхода новорожденных с экстремально низкой массой тела, проведено исследование в пуповинной крови сывороточных и внутриклеточных цитокинов, белков острой фазы у 102 новорожденных родившихся на 22-31 неделе беременности, из них 23 ребенка умерших в период наблюдения (основная группа) и 79 младенцев, выписанных из стационара живыми (группа сравнения). Установлено, что летальный исход детей с ЭНМТ связан с повышением уровня снижением содержания ^-4 в сыворотке
пуповинной крови. Вышеназванные сдвиги у детей основной группы сопровождались повышением уровня гаптоглобина и прокальцитонина, развитием генерализованной инфекции и тяжелой неврологической патологии. Таким образом, определение уровня ^-4 и гаптоглобина в пуповинной крови может служить дополнительным критерием в оценке выживаемости новорожденных с ЭНМТ в период выхаживания в условиях стационара.
Ключевые слова: новорожденные, экстремально низкая масса тела, цитокины
Актуальность. Дети с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ), вес которых при рождении менее 1000 г, составляют около 0,5% от всех живорожденных. Доля выживших детей повышается с увеличением гестационного возраста: Среди детей 22 недель гестации выживают до 2%, 23 недель - до13%, 24 недель -до 35%, 25 недель - до 56%. В литературе имеется большое количество работ, направленных на исследование уровня цитокинов и белков
острой фазы у глубоконедоношенных новорожденных при различной перинатальной патологии и летальном исходе [1, 2, 3], однако, для доказательности их клинической значимости необходимы дальнейшие исследования.
Цель исследования: определить наиболее информативные иммунологические показатели для оценки риска летального исхода новорожденных с экстремально низкой массой тела в неонатальном периоде.
Материал и методы. Дизайн исследования: проспективное, когортное, сравнительное. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом, от всех родителей получено письменное информированное согласие на использование биологического материала новорожденных в научных целях.
Проведено обследование 102 новорожденных с экстремально низкой массой тела, родившихся на сроке беременности 22-31 неделе гестации. Для выявления факторов риска летального исхода, дети были подразделены на две группы: основная группа - дети, умершие в неонатальном периоде (n=23), группа сравнения - дети, выписанные живыми из стационара (n=79). Критерий включения в группы: масса тела детей при рождении менее 1000 г. Критерии исключения: масса тела детей при рождении более 1000 г, врожденные пороки развития, генетическая патология, гемолитическая болезнь.
Оценку спонтанной и индуцированной продукции внутриклеточных цитокинов CD3+ IFN-Y+, CD3+IL-4+ в пуповинной крови проводили методом проточной цитофлуориме-трии на анализаторе «FACSCalibur» фирмы «Becton Dickinson» (США) с использованием моноклональных антител того же производителя, конъюгированных с флюоросцеини-зотиоцинатом (FITC) и фикоэритрином (PE).
Содержание цитокинов (IL-4, IFN-y) и белков острой фазы (С-реактивного белка - CRP, лактоферрина, ферритина) в сыворотке пуповинной крови определяли методом иммуно-ферментного анализа (ИФА), концентрацию гаптоглобина и церулоплазмина - методом турбодиметрии, в соответствии с рекомендациями фирм-изготовителей реагентов. Уровень прокальцитонина (ПКТ) в сыворотке крови оценивали полуколичественным им-мунохроматографическим методом. Статистическую обработку результатов исследования определяли с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel 7.0 для Windows 98, «Statistica 6.0». При нормальном распределении признака данные приводились в виде средней величины и стандартного отклонения. Для оценки достоверности различий между группами использовали критерий Стьюдента. При распределение, отличающееся от нормального, проводили интерквартильный анализ с вычислением медианы (Ме), нижнего и верхнего квартилей (LQ - UQ). Для оценки достоверности различий между количественными признаками использовали непараметрический U -критерий Манна-Уитни, между качественными признаками - хи-квадрат. Статистически значимыми считали различия при уровне значимости p<0,05.
Таблица. Содержание цитокинов и белков острой фазы в пуповинной крови новорожденных с ЭНМТ
Показатели Основная группа(n=23) Группа сравнения(n=79) р
МЕ (LQ - UQ) МЕ (LQ - UQ)
CD3+/IFNY+ Спонтанный,% 4,14 (3,18-8,03) 2,54 (1,61-4,41) >0,05
Стимулированный,% 8,06 (6,67-9,54) 4,87 (3,16-8,87) >0,05
Сывороточный, пг/мл 11,08 (7,25-11,25) 5,5 (2,59-11,74) <0,01
CD3+/IL-4+ Спонтанный,% 2,08 (2,0-5,32) 1,99 (0,68-4,02) >0,05
Стимулированный,% 3,2 (3,10-5,7,08) 2,94 (1,68-4,89) >0,05
Сывороточный, пг/мл 0,59 (0,04-2,79) 2,14 (1,96-2,66) <0,01
CD3+IFNY+ /CD3+IL-4+ Спонтанный, у.е. 1,67 (1,53-2,18) 1,53 (1,26-2,78) >0,05
Стимулированный, у.е. 1,6 (1,46-2,1) 2,09 (1,3-3,16) >0,05
Лактоферрин, нг/мл 9,62 (4,05-59,07) 41,99 (12,57-132,4) >0,05
Гаптоглобин, мг/дл 3,53 (2,81-6,19) 0,74 (0,52-2,92) <0,001
Ферритин, нг/мл 78,79 (11,10-111,5) 26,66 (18,94-64,57) >0,05
Церуллоплазмин, мг/дл 10,06 (7,71-18,45) 13.12 (8,16-6,79) >0,05
СРБ, мг/л 0,32 (0,19-0,47) 0,3 (0,2-0,35) >0,05
Примечание: Р - уровень значимости различий между группами детей РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2014, том 8 (17), №3
Результаты. Гестационный возраст при рождении у новорожденных основной группы был статистически значимо ниже - 25,95±1,74 против 27,23±1,79 недель в группе выживших детей (р<0,01). При анализе антропометрических данных, у недоношенных с ЭНМТ, умерших в период наблюдения, выявлена более низкая масса и длина тела (663,9±180,85 г против 832,78±119,31 г и 29,59±4,19 см против 32,49±2,84 см, р<0,001). При клинической оценке состояния новорожденных диагноз асфиксии тяжелой степени чаще выставлялся детям основной группы, чем новорожденным группы сравнения (82,7% и 48,1% случаев, р<0,01). Средняя оценка по шкале Апгар на первой минуте жизни у новорожденных основной группы составляла 1,91±1,09 баллов, у младенцев группы сравнения - 3,65±1,27 (р<0,001), на пятой минуте жизни - 4,96±0,54 и 5,55±0,71 (р<0,001) соответственно. Анализ структуры заболеваемости в период выхаживания новорожденных в стационаре показал, что у глубоконедоношенных младенцев с летальным исходом доминировало развитие септического процесса (45,5% против 6,3% случаев, р<0,001) и внутрижелудочковых кровоизлияний III степени с гемотампонадой. Практически в 100% случаев патологоанато-мический диагноз был сочетанным и включал указанную патологию.
Несмотря на проводимые реанимационные мероприятия и интенсивную терапию, в 65,2% (15 детей) случаев летальный исход у новорожденных с ЭНМТ регистрировался в первую неделю жизни и в 34,8% (8 детей) в позднем неонатальном периоде.
Согласно представлениям о системном воспалительном ответе и цитокиновой концепции патогенеза сепсиса, в основе про-грессирования сепсиса с множественными органными и системными дисфункциями лежит дисбаланс системного воспалительного и системного противовоспалительного ответов. В проведенном исследовании соотношение IFN-y- и IL-4-продуцирующих Т-лимфоцитов в пуповинной крови выживших новорожденных и младенцев с летальным исходом было смещено в сторону Th-1 зависимого иммунного ответа, однако статистически значимых различий между группами выявлено не было (табл.).
Тем не менее, у новорожденных основной группы содержание сывороточного IFN-y до-
стоверно превышало аналогичные параметры выживших детей, а концентрация IL-4 была статистически значимо ниже, что свидетельствует о несостоятельности системы цитокиновой регуляции в индукции синтеза регуляторных цитокинов (IL-4) и про-воспалительной направленности иммунных реакций. Как известно, смещение баланса цитокинов в направлении Th-1 зависимого иммунного ответа в свою очередь индуцирует продукцию белков острой фазы и других медиаторов воспалительного процесса. Мы не получили статистически значимых различий в уровне С-реактивного протеина, лактоферрина, ферритина и це-рулоплазмина в пуповинной крови между обеими группами новорожденных. Однако содержание гаптоглобина у детей основной группы было статистически значимо выше. По результатам прокальцитонинового теста выраженную системную воспалительную реакцию - ПКТ>10 нг/мл, вследствие развития генерализованной инфекции диагностировали в 43,5% случаев у детей основной группы и в 7,6% случаев у новорожденных группы сравнения (р<0,001), высокую вероятность (10 нг/мл<ПКТ>2 нг/мл) - в 39,1% и 10,1% наблюдений (р<0,003), среднюю вероятность (ПКТ от 0,5 до 2 нг/мл) - в 4,3% и 25,3% случаев (р=0,056) и низкий риск про-грессирования в тяжелую инфекцию (ПКТ<
0.5.нг/мл) - у 13,04% и 56
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.