ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ АНТИТЕЛ И РЕАКЦИИ ГЗТ IN VIVO У ПАЦИЕНТОВ С КОЛОРЕКТАЛЬНЫМ РАКОМ НА ФОНЕ ЛЕЧЕНИЯ КСЕНОГЕННОЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ
ВАКЦИНОЙ
Селедцова Г. В.1, Шишков А. А.1, Гончаров А. Г.2, Селедцов В. И.2
'ФГБУ «Научный исследовательский институт клинической иммунологии» СО РАМН,
Новосибирск; 2ФГАОУ ВПО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта» (БФУ им. И. Канта), Калининград, Россия
Больным с диссеминированной формой колоректального рака проводилось иммуно-терапевтическое лечение с использованием ксеногенной противоопухолевой вакцины. До лечения и после индуцирующего курса вакцинотерапии (через 3 месяца) оценивалась клеточная реактивность в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) in vivo и гуморальная реактивность по наличию различных видов АТ в сыворотке крови. Показано увеличение реакции ГЗТ на АГ карциномы и меланомы в процессе лечения. У большинства пациентов обнаруживаются АТ к иммунизирующим АГ ксеногенного (LLC, B16), аллогенного происхождения (Colo320Hsr и Caco-2). Повышения титра аутоантител в процессе лечения не зафиксировано.
Ключевые слова: ксеногенная вакцина, колоректальный рак, реакция ГЗТ, антитела
В настоящее время активная специфическая иммунoтерапия является быстро развивающимся и одним из наибoлее перспективных направлений в лечении и профилактике oнкoлoгических заболеваний.
Существуют и прoдoлжают разрабатываться мнoгoчисленные пoдхoды к созданию прoтивooпухoлевых вакцин [Berzofsky J.A., et al., 2004], вторые прoхoдят клинические испытания в медицинских центрах мнoгих стран. В экспериментальных работах было пoказанo, что испoльзoвание чуже-рoдных (ксенoгенных) oпухoлевых клеток значительнo пoвышает иммунoгеннoсть вакцины и oбеспечивает фoрмирoвание у вакцинируемых живoтных специфического как клетoчнoгo, так и гумoральнoгo oтвета к опу-хoлеассoциирoванным антигенам (ОАА) собственных oпухoлей [Wei Y.Q.et al., 2000; Graf N.et al., 2003]. Ранее в ФГБУ «НИИКИ» СО РАМН была разрабoтана технoлoгия вакцинации онкологических больных ОАА мышиных oпухoлевых клеток, пилoтные клинические испытания кoтoрoй у пациентов с меланoмoй кoжи прoдемoнстрирoвали безoпаснoсть
и эффективиссть данисгс метсда терапии [Фельде М.А., 2006, Seledtsov V. I., 2006, 2007].
В настоящее исследование включены больные диссеминированной формой кслс-ректальнсгс рака, которым проводилось лечение в течение нескольких лет с использованием ксеногенной противоопухолевой вакцины. Работа проводилась с соблюдением принци-псв дсбрсвсльнссти и кснфиденциальнссти в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан» (Указ Президента РФ от 24.l2.93 № 2288), было получено разрешение локального этического комитета ФГБУ «НИИКИ» СО РАМН № 67 от 20 января 20l2 г.
Характеристика реакции ГЗТ in vivo у пациентов с колоректальным раком на фоне лечения ксеногенной противоопухолевой вакциной. Клеточная реактивность была оценена в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) in vivo до лечения и после индуцирующего курса вакцинотерапии (через 3 месяца), для чего в область предплечья пациента внутрикожно вводились мембранные компоненты вакцинальных опухолевых
924
Вакцины
клеток и клеток селезенки мышей в качестве контроля, реактивность оценивалась через 24 часа путем измерения диаметра (мм) очага гиперемии в месте инъекции. Оценка индивидуальной кожной чувствительности была проведена у 37 пациентов (17 женщин и 20 мужчин). Реакции на антигенные компоненты вакцины у пациентов до лечения практически не было (как правило, размер пятна < 10 мм), после индуцирующего курса ксеновакцинации диаметр области гиперемии на белковый лизат клеток карциномы и меланомы мыши увеличился в два раза и составлял в среднем 21 ±2,1 мм (от 4 до 45 мм). Кожная реакция на белковый лизат спленоцитов мыши, представляющий из себя контрольные, неопухолевые ксено-антигены была слабой и после проведения индуцирующего курса не достигла нижней границы значений, считающихся значимыми (9 ± 2,0 мм).
Характеристика гуморального звена иммунитета на фоне ксеновакцинотераппи у пациентов с колоректальным раком. Обследованную группу составили 30 пациентов: 17 женщин и 13 мужчины, уровни антител были оценены методом ИФА до начала проведения лечения и после индуцирующего курса ксеновакцинотерапии. В ходе проведенного исследования был зарегистрирован исходно высокий уровень АТ к АГ карциномы мыши (436±17) и ксеногенным АГ селезенки (324±27) в группе обследованных пациентов до лечения и достоверный прирост титра антител к ксеногенным АГ карциномы
после курса иммунотерапии (638± 31 титр). Аналогичная динамика увеличения титра АТ обнаружена к антигенам меланомы мыши (от 166±26 до 284,6±36 титр) (p<0,048) после индуцирующего курса ксеновакцинотерапии по сравнению с данным показателем до лечения. На основе полученных результатов можно сделать вывод о том, что исходно высокий уровень IgG антител к антигенам карциномы, вероятно, связан как с предсуществующими естественными антителами к галактозильным эпитопам, представленным на поверхности клеток мыши, так и с возможным формированием в организме пациента АТ широкой специфичности, перекрестно реагирующих на любые ОАА, в том числе и ксеногенного происхождения. После проведения курса иммунотерапии мы наблюдаем дополнительное повышение титров IgG антител у пациентов с колоректальным раком к опухолеассоции-рованным антигенам карциномы мыши, что, вероятно, свидетельствует об индукции гуморального иммунного ответа к ОАА карциномы на фоне ксеновакцинотерапии. Далее, методом Вестернблот анализа у пациентов дои на фоне лечения было определено наличие АТ к антигенам различного молекулярного веса (18 кДа - 125 кДа) карциномы мыши (LLC) и аденокарциномы толстой кишки человека (Со1о320Н^г и Сасо-2). Практически у 100% пациентов с клиническим улучшением обнаруживаются минимально определяемые АТ к аденокарциноме аллогенного происхождения (Со1о320Шг и Сасо-2) и у 83%
Таблица. Изменение показателей сывороточных антител к аллогенным антигенам после курса иммунотерапии (%, пациентов в группе, п=37)
Опухолевый антиген (клеточная линия) Группы пациентов Пациенты с наличием АТ Доля пациентов с увеличением уровня АТ Доля пациентов с уменьшением уровня АТ
Со1о 320 hsr с эффектом от лечения 100% 50% 0%
без эффекта от лечения 83% 16% 0%
Сасо - 2 с эффектом от лечения 100% 16% 0%
без эффекта от лечения 66% 0% 0%
ЬЬС с эффектом от лечения 83% 33% 14%
без эффекта от лечения 66% 0% 0%
к иммунизирующему АГ (LLC). У части пациентов с клиническим улучшением наблюдается прирост АТ на все используемые в тесте АГ (на Colo320Hsr- у 50%, на Caco-2- у 16%, на LLC- у 33%). У пациентов с прогрессирующим течением процесса АТ обнаруживаются не у всех, в зависимости от АГ- от 66 до 83%, причем в процессе лечения показатели в данной группе не изменялись (табл.).
Учитывая, что целью ксеновакцинотера-пии является индукция в организме больного иммунологических реакций, направленных на распознавание опухолевых клеток как «чужеродных» и инициирование процессов отторжения, уничтожения последних, а так же, поскольку опухолевые клетки на своей поверхности несут не только опухолеас-социированные, но и тканеспецифичные антигены, не исключается вероятность стимулирования и патологических аутоиммунных реакций, [SrinivasanR., W^-сЬок J. D.,2004]. В связи с чем, нами были оценены показатели аутоиммунной реактивности у пациентов до и после индуцирующего курса иммунотерапии.
В качестве теста на аутореактивность, нами был измерен уровень АТ к клеткам (тиреоциты), компонентам клеток (ДНК, микросомальная фракция тиреоцитов), белкам и липидам (ревматоидный фактор, кардиолипин) которые первыми появляются в кровотоке при аутоагрессии. Показано,
что как до, так и после индуцирующего курса лечения, данные показатели не отличались от показателей нормы.
Таким образом, ксеновакцинотерапия индуцирует значимые изменения в Т-клеточной системе иммунитета, изменения в гуморальной системе иммунитета носят вторичный характер и, очевидно, их вклад не является определяющим в динамике течения онкологического процесса. Важно заметить, что ксено-вакцинация не индуцирует развитие аутоиммунных патологических реакций.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Фельде М. А., Самарин Д. М., Ница Н. А., Шишков А. А., Кащенко Э. А., Селедцов В. И., Селед-цова Г. В., Козлов В. А. Медицинская иммунология 2006, (1), 67-72.
2. Berzofsky J. A., Terabe M., Oh S. K., Belyakov I. M., Ahlers J. D., Janik J. E., Morris J. C. Journal of Clinical Investigation 2004, 113, 1515-1525.
3. Graf N., Adam C., Mocikat R. Int. J. Cancer 2003, 105,217-220.
4. Seledtsov V. I., Niza N. A., Surovtseva M. A., Shish-kov A. A., Samarin D. M., Seledtsova G. V. Biomed. Pharmacother. 2007, (61), 125-130.
5. Seledtsov V. I., Shishkov A. A., Surovtseva M. A., Samarin D. M., Seledtsova G. V., Niza N. A., Seledtsov D. V. Eur. J. Dermatol. 2006, 16 (6), 655-661
6. Srinivasan R., Wolchok J. D. Journal of Translational Medicine 2004, 2, 1-12.
7. Wei Y. Q., Wang Q. R., Zhao X., et al. Nat. Med. 2000, 6,1160-1166.
CHANGES IN THE LEVEL OF ANTIBODIES AND DTH RESPONSES IN VIVO IN PATIENTS WITH COLORECTAL CANCER DURING TREATMENT WITH XENOGENIC ANTI-TUMOR VACCINE
Seledtsova G.1, Shishkov А.1, Goncharov A.2, Seledtsov V.2
'Federal State Institution Scientific Research Institute of Clinical Immunology SB RAMS, Novosibirsk;
2Baltic Federal University. I. Kant, Kaliningrad, Russia
Patients with disseminated form of colorectal cancer immunotherapeutic treatment was conducted using xenogenic tumor vaccine. Before treatment and after a course of vaccine inducing (3 months) was evaluated in cell reactivity of delayed-type hypersensitivity (DTH) in vivo and humoral reactivity to presence of different species of antibody in serum. Shows an increase in DTH response to AG carcinoma and melanoma during treatment. Most patients have antibodies to xenogenic immunizing AG (LLC, B16) and allogenic AG (Colo320Hsr and Caco-2). Increasing titers of autoantibodies in the treatment process is not fixed.
Key words: xenogenic va
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.