научный журнал по биологии Биологические мембраны: Журнал мембранной и клеточной биологии ISSN: 0233-4755

Архив научных статейиз журнала «Биологические мембраны: Журнал мембранной и клеточной биологии»

  • ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ БИОЧИПЫ ДЛЯ ПАРАЛЛЕЛЬНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ АНТИГЕНОВ И МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ КЛЕТОК

    АТАУЛЛАХАНОВ Ф.И., БУТЫЛИН А.А., ВОРОБЬЕВ А.И., КУЗНЕЦОВА С.А., ОВЧИНИНА Н.Г., ШИШКИН А.В., ШМЫРЕВ И.И. — 2008 г.

    Описано исследование лимфоцитов с помощью экспериментальных биочипов, позволяющих определять на поверхности клеток 26 различных CD-антигенов, а также антигены HLA-DR и IgM. Биочипы представляют собой прозрачные пластиковые подложки, на которые нанесены пятна антител (IgG), специфичных для данных антигенов. Диаметр каждого пятна составляет 1.5 мм. С помощью этих биочипов исследованы нормальные и опухолевые лимфоциты. Показана возможность использования биочипов для определения процентного содержания в суспензиях клеток, экспрессирующих различные поверхностные антигены. Полученные при этом результаты совпадают с данными проточной цитофлуориметрии. Использование прозрачной подложки позволяет применять к связавшимся на биочипе клеткам стандартные методы окраски и проводить их морфологическое исследование.

  • ИОНОФОРНАЯ АКТИВНОСТЬ УКОРОЧЕННОГО АНАЛОГА ГРАМИЦИДИНА А В ФОСФОЛИПИДНЫХ БИСЛОЯХ И МЕМБРАНАХ МИТОХОНДРИЙ И ЭРИТРОЦИТОВ

    АНТОНЕНКО Ю.Н., ДУЦЕВА Е.А., КОТОВА Е.А. — 2008 г.

    Изучена ионофорная активность укороченного с N-конца аналога грамицидина А, называемого мини-грамицидином, и его ковалентного димера на плоских бислойных липидных мембранах (БЛМ) как при больших концентрациях пептидов (измерение интегрального тока), так и на уровне одиночных каналов. Показано, что интегральный ток, индуцированный через БЛМ мини-грамицидином, подвергается сенсибилизированной фотоинактивации, т.е. подавляется при освещении БЛМ в присутствии фотосенсибилизатора, генерирующего синглетный кислород, подобно току, индуцированному грамицидином А, причем фоточувствительность убывает в ряду: мини-грамицидин димер, мини-грамицидин мономер, грамицидин А. Анализ кинетических кривых фотосенсибилизированной инактивации, вызванной одиночными вспышками света, при различных уровнях интегрального тока, наряду с измерениями одиночных каналов, позволил сделать вывод о существовании нескольких проводящих форм мини-грамицидина и его ковалентного димера, соотношение между которыми, по-видимому, определяется толщиной фосфолипидной мембраны. Изучение действия пептидов на природные мембраны (митохондрий и эритроцитов) показало, что ионофорная активность мини-грамицидина и его ковалентного димера существенно зависит от вида мембраны.

  • ИССЛЕДОВАНИЕ РАННИХ ФОТОАКТИВНЫХ ФОРМ ПРЕДШЕСТВЕННИКА ХЛОРОФИЛЛА В ЛИСТЬЯХ РАСТЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ПРИ 20°C

    ДУБРОВСКИЙ В.Т., ЛИТВИН Ф.Ф. — 2008 г.

    С использованием флуоресцентной спектроскопии прослежено накопление нескольких форм пигмента-предшественника на ранних стадиях их образования при 20°C. Торможение фотореакции во время измерения спектров флуоресценции при 20°С достигалось понижением интенсивности возбуждающего света. Высокий выход начальной флуоресценции коротковолновой формы 638 нм в зародышевых листьях резко падает по мере накопления пигмента-предшественника. Выход флуоресценции основной формы с максимумом около 653–655 нм уменьшается менее резко. При понижении температуры до –196°C обнаружено сильное возгорание флуоресценции, особенно выраженное (в 10 раз) у основной формы предшественника хлорофилла. Изменения спектров флуоресценции в процессе фотопревращения свидетельствуют о том, что на ранних стадиях протекает только первая из двух последовательных реакций фотовосстановления предшественника in vivo. Сложный характер кинетических кривых флуоресценции в ходе фотореакции обусловлен сочетанием эффектов изменения концентрации и квантовых выходов превращающихся форм пигмента.

  • КЛЕТОЧНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ K+-КАНАЛ HERG, ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ КАРДИОТОКСИЧНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ. ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ

    КАБАНОВА Н.В., КОЛЕСНИКОВ С.С., ЛЕБЕДЕВА О.В., РОГАЧЕВСКАЯ О.А., РОМАНОВ Р.А., САФАРОВА Э.Р., ШУТОВ А.А. — 2008 г.

    Кардиотоксичность многих лекарственных препаратов обусловлена блокированием К+-каналов типа hERG и, как следствие, пролонгированием фазы реполяризации потенциала действия сердечных клеток и возникновением аритмий. Одна из важных задач доклинических исследований – раннее выявление ингибирующих эффектов потенциальных лекарственных средств на активность К+-каналов, функционирующих в кардиомиоцитах. Цель представленной работы состояла в получении клеточной линии, стабильно и на достаточно высоком уровне экспрессирующей рекомбинантные hERG-каналы, что необходимо для использования этой линии клеток в качестве тест-системы.

  • КУЛЬТУРА КЛЕТОК И КАРИОТИП САХАЛИНСКОГО ОСЕТРА ACIPENSER MIKADOI

    ВИШНЯКОВА Х.С., ЕГОРОВ Е.Е., ЗЕЛЕНИНА Д.А., КОВАЛЕВА О.А., МАДАН Г.В., МИКОДИНА Е.В., МЮГЕ Н.С. — 2008 г.

    Культура клеток сахалинского осетра Acipenser mikadoi, представляющего собой редкий исчезающий вид, была получена из фрагмента грудного плавника с захватом прилежащих мягких тканей. На начальном этапе роста культура состояла из клеток разных типов, среди которых можно было выделить как типичные фибробласты, так и клетки эпителиального происхождения, миофибробласты и др. После примерно пяти пересевов в культуре стали преобладать клетки фибробластной морфологии. Эти клетки росли с постоянной скоростью более года, пройдя за это время около 80 удвоений популяции. В отсутствие сыворотки клетки переходили в пролиферативный покой (G0-покой). При длительном пребывании без замены среды клетки сливались, образуя мышечные волокна длиной несколько сантиметров. Эти волокна могли ветвиться и со временем приобретали поперечную исчерченность. Примерно через 40 дней после возникновения волокна подвергались обратной инволюции: теряли форму, откреплялись от субстрата и погибали. Индукция адипогенной дифференцировки приводила к прекращению пролиферации и появлению в незначительной части клеток липофильных включений. Количество этих включений было ограничено, клетки с включениями имели разнообразную морфологию и не были похожи на адипоциты. Индукция остеогенной дифференцировки приводила к появлению клеток, продуцирующих минерализованный внеклеточный матрикс и к образованию костных узелков. Хромосомный анализ выявил типичный для ряда видов осетров набор хромосом. Вариабельность количества хромосом оказалась очень высокой (в среднем 247 ± 33 при моде в 248 хромосом). С помощью GC- и АТ-специфичных флуорохромов обнаружено, что теломерные и центромерные районы всех хромосом обогащены GC-повторами. Обнаружена гетерогенность по распределению AT- и GC-богатых последовательностей между хромосомами. Длинные хромосомы преимущественно окрашиваются AT-специфичным флуорохромом, а мелкие сильнее флуоресцируют при обработке 7-аминоактиномицином D. Несколько мелких хромосом отличаются особенно яркой флуоресценцией при окрашивании этим флуорохромом. Работа представляет собой первый опыт получения культуры клеток сахалинского осетра и анализа его кариотипа.

  • ЛОКАЛИЗАЦИЯ АНТИТЕЛ К ТОПОИЗОМЕРАЗЕ II В НОРМЕ И ПРИ ИСКУССТВЕННОЙ КОНДЕНСАЦИИ И ДЕКОНДЕНСАЦИИ ХРОМОСОМ

    КУЛЬНЕВА Е.И., МУРАШЕВА М.И., ЧЕНЦОВ Ю.С. — 2008 г.

    Иммунофлуоресцентным методом изучена локализация ДНК-топоизомеразы II (Topo II ) в интерфазном ядре и в хромосомaх in situ на разных стадиях митоза в норме, а также при воздействии конденсирующего и деконденсирующего растворов. В исходных митотических хромосомах культуры клеток М-HeLa in situ после фиксации и пермеабилизации Topo II распределяется равномерно по хроматидам. В клетках, подвергнутых воздействию деконденсирующих растворов (10 мМ трис; 0.1 и 0.3 мМ CaCl2 в 10 мМ трис, 15% DMEM; 75 мМ КСl), в профазе, прометафазе и метафазе Topo II распределяется равномерно по хроматидам с максимальной концентрацией в прицентромерном районе. В анафазе и телофазе Topo II распределяется равномерно по хроматидам. Topo II не выявлена в хромосомах клеток, обработанных конденсирующими растворами, содержащими 0.7, 1.0, 2.0 и 3.0 мМ CaCl2 в 10 мМ трис, на стадиях профазы, метафазы и анафазы. В этих же условиях в поздней телофазе во вновь образующихся ядрах выявляется окраска антителами к Topo II . При последовательном воздействии на клетки сначала конденсирующего раствора, а затем деконденсирующего Topo II распределяется по хромосомам так же, как при действии деконденсирующих растворов: равномерно по хроматидам в анафазе и телофазе, а в профазе, прометафазе и метафазе равномерно по хроматидам с максимальной концентрацией в прицентромерном районе. Возможно, что при воздействии конденсирующих растворов хромосомы не окрашиваются за счет “маскировки” сайтов связывания антител к Topo II . Таким образом на невыделенных хромосомах Topo II распределяется равномерно по хроматидам; такая локализация сохраняется при гипотонической обработке, но концентрация Topo II выше в центромерных участках.

  • ЛЮТЕИН-5,6-ЭПОКСИДНЫЙ ЦИКЛ – НОВЫЙ КСАНТОФИЛЛОВЫЙ ЦИКЛ В ХЛОРОПЛАСТАХ РАСТЕНИЙ

    ЛАДЫГИН В.Г. — 2008 г.

    Проанализированы опубликованные данные и приведена общая характеристика недавно обнаруженного у высших растений лютеин-5,6-эпоксидного цикла. Рассмотрена локализация этого цикла в мембранах хлоропластов и его функционирование в зависимости от интенсивности света в сравнении с широко распространенным и хорошо изученным виолаксантиновым циклом. Предполагается, что в этих циклах могут участвовать либо одни и те же ферменты – виолаксантиновая деэпоксидаза и зеаксантиновая эпоксидаза, либо виолаксантиновая деэпоксидаза и различные зеаксантиновые эпоксидазы – обычная и измененная в результате мутации.

  • МАСЛО СЕМЯН АМАРАНТА: ВЛИЯНИЕ НА ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ АКТИВИРОВАННЫХ АДРЕНАЛИНОМ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ КРЫС

    ЕЛИСЕЕВА О.П., МАХОТИНА О.А., СИРОТА Т.В., ХУНДЕРЯКОВА Н.В. — 2008 г.

    Исследовали изменения параметров дыхания митохондрий (МХ) печени крыс после трехнедельного кормления их маслом семян амаранта (Amaranthus cruentus L.). Сравнивали параметры дыхания МХ контрольной группы (не получавшей масло) и после курса кормления как в обычных условиях эксперимента, так и после введения адреналина (350 мкг/кг веса интраперитонеально за 30 мин до декапитации), модулирующего состояние энергетического метаболизма МХ печени. Показано, что у животных, не принимавших масло, адреналин на 32% увеличивал скорость фосфорилирующего дыхания и на 22% уменьшал время фосфорилирования при окислении сукцината; также на 23% возрастала скорость фосфорилирующего дыхания при окислении -кетоглутарата (КГЛ), используемого совместно c малонатом, ингибитором сукцинатдегидрогеназы (СДГ). Адреналин не влиял на дыхание МХ при окислении сукцината с добавкой глутамата и КГЛ в отсутствие малоната. Масло амаранта вызывало выраженную активацию дыхания МХ при окислении всех перечисленных субстратов как в сопряженных, так и в разобщенных МХ. Однако продолжительность (время) фосфорилирования не отличалась от продолжительности в контроле (при окислении сукцината) или увеличивалась (при окислении КГЛ ± малонат). Введение адреналина животным не влияло на активированное маслом дыхание МХ, окисляющих указанные субстраты, однако время фосфорилирования во всех группах животных было снижено. Са2+-емкость МХ на фоне приема масла амаранта не изменилась. Таким образом, показано, что масло семян амаранта активирует дыхание МХ печени крыс. Животные, принимавшие масло, были устойчивы к действию адреналина, т.е. масло амаранта предотвращало возможную гиперактивацию функций МХ.

  • НЕЙРОПЕПТИД КАРНОЗИН УВЕЛИЧИВАЕТ УСТОЙЧИВОСТЬ ЛИПОПРОТЕИНОВ И ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОКОМПЕТЕНТНОЙ СИСТЕМЫ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ДИСЦИРКУЛЯТОРНОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИЕЙ

    БЕЛЯЕВ М.С., БОЛДЫРЕВ А.А., ГНЕЗДИЦКИЙ В.В., МАКСИМОВА М.Ю., ТРУНОВА О.А., ФЕДОРОВА Т.Н. — 2008 г.

    Обнаружено, что использование карнозина в суточной дозе 2 г в качестве дополнительного средства при лечении дисциркуляторной энцефалопатии (ДЭ) усиливает устойчивость липопротеинов плазмы крови к Fe2+-индуцированному окислению, а также стабилизирует эритроциты по отношению к кислотному гемолизу и интенсифицирует дыхательный взрыв лейкоцитов. Одновременно в присутствии карнозина наблюдалось снижение латентного периода вызванных потенциалов Р300 и возрастание доли вызванных потенциалов с высокой амплитудой. Полученные данные свидетельствуют об увеличении эффективности базовой терапии пациентов с ДЭ при использовании карнозина.

  • О ВЫЖИВАНИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ АЛКАЛОЗА И ДЕФИЦИТА АУТОКРИННЫХ ФАКТОРОВ

    ГРЕЧИХИНА М.В., ДЬЯЧКОВА Л.Г., ЛУЦАН Н.И., ЛУЦЕНКО Г.В. — 2008 г.

    Все больше данных свидетельствует о том, что выживание клеток млекопитающих находится под контролем факторов роста и аутокринных факторов выживания (АФ). Ранее мы предложили экспериментальную модель, позволяющую создавать дефицит АФ в культуре клеток и изучать последствия такого дефицита для выживания и метаболизма культивируемых клеток. В представленной работе исследовали влияние дефицита АФ на выживание, внутриклеточное содержание ATP, продукцию лактата и трансмембранный потенциал митохондрий клеток интерлейкин 2-зависимой линии CTLL-2 в условиях алкалоза (pH 8.3). Показано, что в отсутствие дефицита АФ в культуре алкалоз не влияет на выживание клеток CTLL-2. Главным способом защиты этих клеток от цитотоксического действия алкалоза является интенсификация анаэробного гликолиза, сопровождающаяся увеличением продукции лактата. В условиях дефицита АФ алкалоз приводил к значительному снижению гликолиза в культуре клеток CTLL-2, вследствие чего в них резко снижалась продукция лактата и трансмембранный потенциал митохондрий. Эти нарушения энергетического метаболизма вызывали истощение внутриклеточного содержания ATP, что приводило к гибели клеток CTLL-2 преимущественно по пути некроза.

  • ОБЛЕГЧЕННОЕ ПРОНИКНОВЕНИЕ МЕТИЛВИОЛОГЕНА В ХЛОРОПЛАСТЫ IN SITU ПРИ ГЕНЕРАЦИИ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ИМПУЛЬСА НА ВОЗБУДИМОЙ МЕМБРАНЕ РАСТИТЕЛЬНОЙ КЛЕТКИ

    БУЛЫЧЕВ А.А., КРУПЕНИНА Н.А. — 2008 г.

    Генерация потенциала действия (ПД) на плазмалемме водоросли Chara corallina существенно влияет на фотопроцессы в хлоропластах. В физиологических условиях ПД обратимо подавляет фотосинтетический перенос электронов, причем этот эффект выражен в разной степени для участков, формирующих щелочные и кислые зоны в окружении клетки. Вызванные генерацией ПД изменения квантового выхода фотопереноса электронов усиливаются и становятся необратимыми в присутствии акцептора метилвиологена (MV2+). Инкубация клеток Chara в покое в среде с добавлением MV2+ не сказывалась на кинетике фотоокисления хлорофилла реакционного центра фотосистемы I (ФСI) P700, свидетельствуя о том, что в покоящейся клетке MV2+ не достигает участков взаимодействия с ФСI из-за наличия непроницаемых мембранных барьеров. Вместе с тем генерация ПД в присутствии MV2+ необратимо модифицировала сигналы фотоокисления P700, измеряемые по разности изменений поглощения в области 810 и 870 нм ( A810), что указывает на облегченное проникновение MV2+ в хлоропласты in situ во время или после генерации ПД. Фотоиндуцированные изменения мембранного потенциала клетки, подобно сигналам A810, не зависели от присутствия в среде MV2+ до приложения первого возбуждающего стимула. Однако генерация ПД в присутствии MV2+ необратимо модифицировала электрические фотоответы клетки в связи с переключением нециклического потока электронов на восстановление MV2+. Сделан вывод, что влияние ПД на фотосинтез хлоропластов in situ является комплексным и включает изменения проницаемости для MV2+ в системе мембранных барьеров “плазмалемма–оболочка хлоропласта”.

  • ОБНАРУЖЕНИЕ ИУК-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА НА ВАКУОЛЯРНОЙ МЕМБРАНЕ

    НУРМИНСКИЙ В.Н., ОЗОЛИНА Н.В., САЛЯЕВ Р.К., СИТНЕВА Л.А. — 2008 г.

  • ОЦЕНКА ПЛОЩАДИ, ПРИХОДЯЩЕЙСЯ НА ОДНУ МОЛЕКУЛУ ДЕТЕРГЕНТА НА ГРАНИЦЕ РАЗДЕЛА ФАЗ В СМЕШАННЫХ ЛИПИД-ДЕТЕРГЕНТНЫХ АГРЕГАТАХ

    БАРСУКОВ Л.И., ХРАМЦОВ Ю.В. — 2008 г.

    С целью теоретического анализа строения смешанных липид-детергентных и белок-детергентных агрегатов, а также изучения межмолекулярных взаимодействий в этих агрегатах разработан новый подход к оценке площади, приходящейся на одну молекулу детергента на границе раздела фаз, ad, основанный на рассмотрении взаимосвязи между геометрическими параметрами упаковки детергентных и липидных молекул и составом смешанных агрегатов. Описание структурных переходов между агрегатами различного типа проведено на основе концепции параметра молекулярной упаковки, , обобщенного для случая двухкомпонентной липид-детергентной системы (Goltsov A.N., Barsukov L.I. // J. Biol. Phys. 2000. V. 26. P. 27–41). Показано, что в рамках этой концепции эффективный параметр упаковки кр, определяется соотношением детергент/липид, необходимым для полной солюбилизации смешанных агрегатов, R , площадью, приходящейся на одну молекулу детергента на границе раздела фаз, ad, а также рядом других параметров молекулярной упаковки, зависящих от строения детергента и липида. Рассчитанные с помощью предлагаемого подхода значения ad достаточно хорошо совпадают с имеющимися в литературе экспериментальными данными. Показано, что этот подход позволяет эффективно оценивать влияние на величину ad состава среды, температуры и строения детергента в широком диапазоне температур и соотношений детергент/липид. Проанализированы условия, при которых происходит насыщение липидного бислоя детергентом на начальных этапах солюбилизации. Установлена взаимосвязь между R и соотношением детергент/липид, необходимым для насыщения липидного бислоя детергентом, R ; предложен способ оценки этого параметра с использованием имеющихся в литературе значений R .

  • СОХРАНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН ЯДЕРНЫХ КЛЕТОК КРОВИ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ –80°С

    ЗАЙЦЕВА О.О., СВЕДЕНЦОВ Е.П., СОЛОМИНА О.Н., ТУМАНОВА Т.В., УТЕМОВ С.В., ХУДЯКОВ А.Н., ШЕРСТНЕВ Ф.С. — 2008 г.

    Структурно-функциональные изменения в цитоплазматических мембранах и мембранах органелл играют важную роль в повреждении клеток под действием отрицательных температур. Эти изменения могут быть обратимыми, если используется комплекс мер для защиты биологических мембран от повреждений. На примере ядерных клеток крови, как представителей высокодифференцированных клеток, показана возможность сохранения полноценности их мембран при замораживании и длительном хранении в условиях низких температур (–80°C). Наряду с классическим линейным охлаждением клеточной суспензии использован и нетрадиционный подход – экспоненциальный режим охлаждения. Применение разработанного авторами малотоксичного криопротекторного раствора и экспоненциальной программы охлаждения позволяет сохранить через 180 сут (срок наблюдения) холодового анабиоза (–80°C) 91.0 ± 5.1% эозинорезистентных лейкоцитов и 76.7 ± 14.7% нейтрофилов, способных к фагоцитозу. Предложенная криотехнология, включающая использование малотоксичного криопротекторного раствора, экспоненциальной программы замораживания и быстрого отогрева, является доступной, низкозатратной и может быть применена для хранения других клеток животного происхождения.

  • СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИНАМИКИ, ДИФФУЗИИ И ПРОНИЦАЕМОСТИ ПО ОТНОШЕНИЮ К ЛИГАНДАМ ДЛЯ БИОМЕМБРАН С РАЗЛИЧНЫМ ЛИПИДНЫМ СОСТАВОМ

    АНТОНОВ М.Ю., КИРПИЧНИКОВ М.П., ЛЕВЦОВА О.В., НИКОЛАЕВ И.Н., ТЕРЁШКИНА К.Б., ТУРЛЕЙ Е.В., ШАЙТАН К.В. — 2008 г.

    Методом молекулярной динамики проведено сравнительное изучение липидных бислоев различного состава. Использован метод управляемой молекулярной динамики для оценки кинетических параметров и проникновения малых молекул разной химической природы через биомембраны. В рамках единого протокола молекулярного моделирования обсуждается соответствие результатов численного эксперимента с данными по структуре биомембран, коэффициентам латеральной диффузии и сравнительной проницаемости мембран для различных лигандов.

  • ТРАНСПОРТ КАЛИЯ ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ ГРАНУЛЯРНЫХ КЛЕТОК МОЗЖЕЧКА КРЫС: ВЛИЯНИЕ ПАРЦИАЛЬНОГО ДАВЛЕНИЯ КИСЛОРОДА

    БОГДАНОВ Н.Б., БОГДАНОВА А.Ю., БОЛДЫРЕВ А.А., ГАССМАНН М., ПЕТРУШАНКО И.Ю. — 2008 г.

    Изучена зависимость активного и пассивного токов К+ через мембрану свежевыделенных гранулярных клеток мозжечка крыс от содержания кислорода в среде. Показано, что транспортная активность Na+, K+--азы имеет максимум в области, соответствующей парциальному давлению кислорода в мозжечке крыс в условиях нормоксии. Ингибирование внутриклеточной продукции NO блокатором NO-синтазы (NOS) L-NAME подавляет как активный, так и пассивный транспорт калия, но этот эффект наблюдается только при низком парциальном давлении кислорода. Внесение в среду блокатора гуанилатциклазы (ГЦ), 1H-[1,2,4]оксадиазоло[4,3- ]квиноксалин-1-один (ODQ), лишает Na+, K+--азу чувствительности к изменениям парциального давления кислорода, что позволяет предполагать, что активация Na+, K+--азы в условиях гипоксии опосредована повышением уровня сGMP. Присутствие активатора протеинкиназы G (PKG) Rp-8-CTP не повышает активности Na+, K+--азы при любом уровне кислорода в среде инкубации; это позволяет предполагать, что эффект сGMP на фермент реализуется с помощью иных сигнальных механизмов. Обнаружены различия в чувствительности изоформ Na+,K+--азы к гипоксии: при нормоксии уабаин-резистентная компонента насоса обеспечивает наибольший вклад в активный транспорт ионов, тогда как в условиях жесткой гипоксии активность чувствительной к уабаину компоненты насоса становится преобладающей.

  • УАБАИН-ЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ И УАБАИН-РЕЗИСТЕНТНАЯ ИЗОФОРМЫ NA+,K+--АЗЫ ГРАНУЛЯРНЫХ КЛЕТОК МОЗЖЕЧКА РЕГУЛИРУЮТ АКТИВНОСТЬ МАР-КИНАЗЫ

    АККУРАТОВ Е.Е., БОЛДЫРЕВ А.А., БУЛЫГИНА Е.Р., КАРПОВА Л.В. — 2008 г.

    Инкубация гранулярных клеток мозжечка с уабаином в концентрации 0.1 мкМ в течение 180 мин приводит к росту внутриклеточного уровня ионизированного кальция и активных форм кислорода (АФК), что, в свою очередь, вызывает активацию МАР-киназы (МАРК). Инкубация с уабаином в более высокой концентрации приводит к дальнейшей активации МАР-киназы. Антагонисты NMDA-рецепторов МК-801 и D-AP5 ослабляют эффект уабаина. Сделан вывод, что как уабаин-чувствительные, так и уабаин-резистентная изоформы Na+,K+--азы вместе с NMDA-рецепторами вовлечены во внутриклеточные сигнальные пути, управляющие процессами пролиферации нейронов.

  • УЛЬТРАСТРУКТУРА ГАЛОБАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ В ОБЛАСТИ ВЫХОДА ИЗ НЕЕ ЖГУТИКОВ

    МЕТЛИНА А.Л., НОВИКОВА Т.М., СПЕРАНСКИЙ В.В. — 2008 г.

    На основе серийных и единичных срезов клеток Halobacterium salinarum подробно изучено ранее описанное нами у этого представителя архей внутриклеточное образование. Оно располагается под мембраной вблизи полюсов клеток по обе стороны от дискообразной пластинчатой структуры (ДПС), обнаруженной нами в составе аппарата подвижности Hb. salinarum. Однако имеет отличное от ДПС строение. Морфологические характеристики этой структуры полностью соответствуют имеющимся в литературе описаниям “полярной органеллы” (ПО) бактерий. Структура подвергается цитохимическому окрашиванию при выявлении АТР-азной активности, подобно ПО. Проведено сравнение ПО бактерий и подобной структуры галоархей.

  • УЧАСТИЕ КАЛЬЦИЙ-НЕЗАВИСИМОЙ ФОСФОЛИПАЗЫ A2 В РЕГУЛЯЦИИ CA2+-СИГНАЛА, ВЫЗВАННОГО ИНГИБИТОРОМ КАЛЬМОДУЛИНА В ТИМОЦИТАХ КРЫСЫ

    ЕФРЕМОВА А.С., ЗИНЧЕНКО В.П. — 2008 г.

    Ранее показано, что ингибитор кальмодулина калмидазолий в микромолярных концентрациях кратковременно активирует неселективный Ca2+-канал в плазматической мембране клеток асцитной карциномы Эрлиха [Зинченко В.П. и др. Биофизика. 2005. T. 50. № 6. С. 1055–1069]. В настоящей работе с целью обнаружения Ca2+-каналов данного типа в других клетках и выявления общих механизмов их регуляции изучено действие калмидазолия на тимоциты крысы. Показано, что калмидазолий вызывает двухфазное повышение содержания Ca2+ в цитозоле тимоцитов. Обе фазы обусловлены входом Ca2+ снаружи и отражают активность неселективных Ca2+-каналов, проницаемых для Mn2+ и Ni2+. Скорость и амплитуда быстрой фазы уменьшаются, а медленной фазы возрастают в присутствии специфических ингибиторов Ca2+-независимой фосфолипазы A2 – броменоллактона и пальмитоилтрифторметилкетона. Скорость и амплитуда быстрой фазы подавляется также арахидоновой кислотой, ингибитором липоксигеназы нордигидрогуаретиковой кислотой и не подавляется ингибитором Ca2+-зависимой фосфолипазы A2 – бромфенацилбромидом, ингибитором циклооксигеназы индометацином, специфическим ингибитором SOC-каналов гадолинием, ингибитором фосфолипазы С U73122. Скорость быстрой фазы слабо зависит от температуры. Скорость медленной фазы сильно зависит от температуры и растет при повышении температуры с Q10 = 2. Амплитуда быстрой фазы Ca2+-сигнала возрастает при понижении температуры за счет увеличения времени максимальной активности канала. Полученные данные указывают, что Ca2+-независимая фосфолипаза A2 (iPLA2) является промежуточным звеном в пути активации калмидазолий-индуцированного неселективного Ca2+-канала. Предполагается, что продукты iPLA2 (лизофосфолипид и арахидоновая кислота) действуют как активатор и ингибитор канала соответственно. Они имеют различное сродство к нему, что объясняет механизм двухфазного повышения концентрации Ca2+ в цитозоле тимоцитов и увеличение времени нахождения канала в активном состоянии при понижении температуры.

  • УЧАСТИЕ ПЕПТИДИЛ-ПРОЛИЛ-ЦИС/ТРАНС-ИЗОМЕРАЗ В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ ПРОЦЕССЕ

    АБДЕЕВА И.А., ИГНАТОВ А.Н., КРОМИНА К.А. — 2008 г.

    Пептидил-пролил-цис/транс-изомеразы (peptidyl-prolyl-cis/trans-isomerases, PPI-азы) – суперсемейство белков, которые обладают шаперонной активностью и катализируют цис/транс-изомеризацию пептидной связи, предшествующей остатку пролина, придавая активную конформацию пептидам. Они присутствуют в клетках и про-, и эукариот и имеют высококонсервативную структуру. PPI-азы играют важную роль в патологическом процессе, поскольку белки, определяющие вирулентность микроорганизма, для выполнения своей роли, нуждаются в модификации пространственной структуры после переноса в клетку хозяина. На основании анализа опубликованных данных предложена гипотеза об участии бактериальных PPI-аз и РРI-аз эукариот-хозяев в эволюции белков-эффекторов секреторных систем патогена.