MODIFIED BIOFLAVONOID INHIBITS PROLIFERATION OF HUMAN MONONUCLEAR CELLS
Albegova D. Z.1, Pavlova S. I.2/3, Dibirova G. O.12, Dmitrieva N. B.12, Kozlov I. G.1/2
'N.I. PirogovRussian National Research Medical University, Moscow, 2D. RogachevFederal Research and
Clinical Center for Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, 3Russia Chuvash State University
As a result, the development of new areas of medicine formed unified ideology, the so-called sighting or target-directed therapy. In this regard, the search for new targeted drugs capable of selectively correct the key links in the pathogenesis of a disease is becoming increasingly important. One of the promising directions in this field is the development of less toxic and more specific immunosuppressive drugs. Attention of researchers recently given to the study of flavonoids - a large group of polyphenolic compounds present in virtually all higher plants. The aim of our study was to investigate the influence of the modified bioflavonoid on proliferation of human mononuclear cells (MNC), activated with T-and B-cell mitogen and a comparison of this effect with quercetin dihydrate. As a result of the experiment, it was found that the use of both agents in varying degrees, dose-dependently inhibited the proliferation of PHA - anti-CD3-and PWM - activated MNC. Thus, it was shown that modifitsmrovanny unlike bioflavonoid quercetin dihydrate, actively inhibits the proliferation of MNCs and, hence, is more interesting for further study.
Key words: flavonoids, licorice root, mononuclear cell, proliferation
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ БИОФЛАВОНОИД В МОДЕЛИ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ У МЫШЕЙ
Албегова Д. З.1, Павлова С. И.2/3, Кукушкин Г. В.1, Камкина О. В.1
'ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова Минздрава России, Москва, 2ФГУ ФНКЦДетской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачева, Москва, 3ФГБОУ ВПО Чувашский государственный университет им. И. Н. Ульянова, Чебоксары,Россия
Проведено исследование острой токсичности и антиоксидантной активности модифицированного биофлавоноида. При парентеральном введении мышам в дозах от 3,9*10-3 до 15,6*10-3 моль/кг острой токсичности не выявлено, гибель животных отсутствовала, что не позволило установить летальную дозу данного агента (LD50). В связи с чем, изучаемый препарат может быть отнесен согласно ГОСТ 12.1.007-76, к IV классу опасности (малоопасные вещества). В экспериментах in vitro установлены высокая антиоксидантная (68,6 ± 2,6%) и низкая прооксидантная (18,2 ± 2,7%) активности исследуемого вещества. Полученные данные свидетельствует о том, что модифицированный биофлавоноид способен подавлять процессы пероксидации, выступая в роли прямого антиоксиданта, и не обладает способностью прямо индуцировать перекисное окисление липидов клеточных мембран.
Ключевые слова: флавоноиды, мононуклеарные клетки, пролиферация
Флавоноиды представляют собой одно из самых структурно-разнообразных растительной клетки полифенольной структуры. На сегодняшний день они рассматриваются как активные продукты метаболизма растений, играющие важную роль в процессах
фотосинтеза, дыхания, формировании устойчивости к инфекционным агентам. С фармакологической точки зрения соединения класса флавоноидов представляют большой интерес, поскольку демонстрируют потенциально полезные для человека противовирусное [1],
254
Иммунорегуляция
гепатопротекторное [2], противовоспалительное [3, 4, 5], антиоксидантное [6, 7, 8], а также антиканцерогенное и противоопухолевое [9, 10] действия.
В настоящее время проводится активный поиск растительных источников получения препаратов иммуносупрессивного действия для использования в терапии различных заболеваний, которые по сравнению с известными препаратами имеют ряд преимуществ, основным из которых является отсутствии побочных эффектов. С этой точки зрения также актуальными являются различные флавоноиды.
Целью нашего исследования явилось определение острой токсичности модифицированного биофлавоноида (МБФ) и установление его предполагаемого влияния на процессы свободно-радикального окисления.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования являлся модифицированный биофлавоноид. Определение острой токсичности МБФ проводили согласно «Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» [11] на сертифицированных половозрелых животных белых мышах линии Ва1Ь/с (массой 20-23 г), полученных из питомника РАМН (Крюково, Московская область) и прошедших карантин в течение 14 суток. Содержание экспериментальных животных осуществлялось в стандартных условиях вивария на обычном рационе при свободном доступе к воде и пище, в условиях нормального температурного и светового режимов. Животные были разделены на 4 группы по 10 мышей в каждой. Первая группа животных получала внутривенно (в технически максимально возможных дозах) спиртовой раствор МБФ в дозе 3,9*10-3 моль/кг; вторая - в дозе 7,8*10-3 моль/кг; третья - в дозе 15,6*10-3 моль/кг. Контрольная группа получала соответствующие объемы растворителя. Общая продолжительность наблюдения за животными после введения исследуемого препарата составила 14 дней. В первый день мыши находились под непрерывным наблюдением. Оценку общего состояния животных при введении МБФ проводили с учетом изменения поведенческих реакций, нервно-мышечной возбудимости, некоторых вегетативных функций, а также измеряли массу тела до введения изучаемого препарата и после окончания периода наблюдения [11]. Эксперименты проводили при
строгом соблюдении требований Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей» (Страсбург, 1986 г.) и Федерального закона Российской Федерации «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г.
In vitro оценивали процесс свободно-радикального окисления. В качестве основного показателя, определяющего состояние антиоксидантной системы, использовалась общая антиоксидантная активность (ОАА). Антиоксидантную активность МБФ изучали с использованием системы, которая базируется на способности различных объектов подавлять Fe2+/аскорбат-индуцированное окисление ТВИН-80 in vitro с последующим фотоколориметрическим определением продуктов окисления (малонового диальдегида) после предварительного добавления щелочного раствора тиобарбитуровой кислоты (ТБК).
Оптическую плотность (А) измеряли на фотоэлектроколориметре при длине волны 535 нм. Расчет антиоксидантного действия проводили по формуле ОАА% = ((Ак - Ао) *100) / Ак, где Ак - оптическая плотность в контроле; Ао- оптическая плотность в опыте. В качестве параметра оксидантной системы оценивали общую проксидантную активность (ОПА). Суть биохимического метода определения проокси-дантной активности в условиях in vitro заключается в способности исследуемых препаратов, в данном случае МБФ, окислять ТВИН-80, с последующим фотоколориметрическим определением концентрации продуктов окисления (малонового альдегида), ассоциированными тиобарбитуровой кислотой (ТБК).
Оптическую плотность (А) измеряли на фо-тоэлектроколориметре при длине волны 535 нм [12]. Расчет прооксидантного действия проводили по формуле ОПА% = ((Ао - Ак) *100) / Ао, где Ак - оптическая плотность в контроле; Ао - оптическая плотность в опыте. Полученные в результате эксперимента данные обрабатывали статистически методом вариационных рядов с использованием t-критериев Стьюден-та [12]. Результаты представлены в виде среднего значения X и ошибки среднего m. Достоверными считали различия при достигнутом уровне значимости p < 0,01.
Результаты исследования и их обсуждение. При изучении острой токсичности парентеральное введение мышам МБФ в дозах
Таблица 1. Сравнительная оценка массы тела мышей до и через 14 суток после введения МБФ
Испытуемые дозы, моль/кг массы тела Масса животных до введения препарата, г Масса животных на 14-е сутки наблюдения, г Прирост массы тела, г
3,9x10-3 21,05±0,22 24,65±0,35* 3,6±0,20
7,8x10-3 22,01±0,34 25,87±0,43* 3,86±0,31
15,6x10-3 21,23±0,23 24,46±0,21* 3,23±0,25
Примечание: "статистически значимые изменения между массой животных на 14-е сутки наблюдения и массой животных до введения препарата (р<0,01)
от 3,9*10-3 до 15,6*10-3 моль/кг массы тела животного не влияло на их общее состояние и не привело к гибели животных. Симптомы острого отравления отсутствовали. В первые сутки у одной мыши наблюдалось незначительное увеличение дефекации при введении экстракта в дозе 15,6*10-3 моль/кг. В последующем все животные были активны, подвижны, с нормальной координацией движений, стандартной реакцией на внешние раздражители, обычной частотой и глубиной дыхательных движений, нормальной консистенцией фекальных масс, частотой мочеиспускания и окраской мочи, с хорошим аппетитом и нормальным внешним видом. За период наблюдения мыши прибавили в массе (табл. 1).
В течение 14 суток эксперимента гибели животных не отмечено, в связи с чем, установить LD50 не представилось возможным. Это позволяет считать исследуемый агент нетоксичным в испытанном диапазоне и варьировать его дозами в широких пределах. Поскольку доза 15,6*10-3 моль/кг не привела к смерти ни одного животного, можно сделать вывод, что LD50 > 15,6*10-3 моль/кг и согласно ГОСТ
12.1.007-76 можно отнести исследуемый экспериментальный препарат к IV классу опасности (малоопасные вещества) [13].
В опытах in vitro для МБФ выявлена высокая активность в отношении процессов свободно-радикального окисления, что, по-видимому, связано с содержанием флавоноидов и их способностью влиять на изучаемый процесс. При этом исследуемый агент проявил как проокси-дантную, так и антиоксидантную активность, причем последняя была выражена в значительно большей степени. В связи с тем, что МБФ имеет высокие показатели общей антиокси-дантной активности (68,6 ± 2,6%), не исключено, что он обладает способностью улавливать свободные радикалы и за счет этого подавлять процессы пероксидации, выступая в роли прямого антиоксиданта. Показатели общей про-оксидантной активностьи изуча
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.