Эпидемиология
Щербаков И.Т., доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник Белкин З.П., кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник Андина С. С., кандидат биологических наук, научный сотрудник Козлов Л.В., доктор биологических наук, профессор, зав. лабораторией (Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека)
МЫШИНАЯ МОДЕЛЬ КОМПЛЕМЕНТ ЗАВИСИМОЙ АНАФИЛАКСИИ
Введение
Ранее был описан феномен быстрой гибели мышей после парентерального введения сыворотки крови норки [1]. Поскольку было показано, что летальный фактор сыворотки термолабилен, имеет белковую природу, возникло предположение, что он представляет собой систему комплемента норки. Предположение было доказано обнаружением в сыворотке норки необычно высокой активности как классического, так и альтернативного пути комплемента. Кроме того, в сыворотке норки было обнаружено присутствие антител к эритроцитам мыши, необходимых для их лизиса под действием комплемента норки по классическому и альтернативному путям. Однако удаление этих антител, приводящее к отмене гемолиза, не сказывается на токсичности сыворотки норки в отношении мыши в опытах in vivo. Частичная декомплементизация сыворотки норки с помощью зимозана полностью отменяет гибель животных [2].
Дальнейшим доказательством участия комплемента в гибели мышей от сыворотки норки было обнаружение защитного действия от гибели ингибиторов комплемента в концентрациях, сопоставимых с их константами ингибирования [3]. Это явление было положено в основу способа определения ингибирующего действия веществ на комплемент in vivo на модельных животных [4].
Однако не было ясно, какова непосредственная причина гибели животных, обусловленной действием комплемента. Это мог быть гемолиз, лизис других клеток организма или явления анафилактического шока. Для выяснения механизма летального действия на мышей комплемента норки было проведено гистологическое исследование органов погибших животных.
Методика
В работе использовали серых мышей линии СВА. Реактивы квалификации не ниже ч.д.а отечественного производства. Сыворотку крови получали от 10 норок обоего пола массой 1-1,5 кг стандартной коричневой породы из зверосовхоза «Салтыковский». Кровь брали из сердца после забоя животных внутримышечной инъекцией дитилина. Сыворотки норок до исследования хранили при — 20°С.
Гистологически и гистохимически изучали внутренние органы мышей, которым в пара-орбитальный синус вводили сыворотку норок в количестве 0,07 мл на одно животное.
Органы животных вырезали сразу же после их гибели, которая наступала в первые 15-20 минут после введения им сыворотки норок, и фиксировали в 10% забуференном рас-
творе формалина, рН которого находился в пределах 7,0-7,2. В формалине фиксировали: головной мозг, сердце, легкие, печень, селезенку, почки, желудок, тонкую и толстую кишки. После фиксации из органов вырезали кусочки, толщиной не более 1,5 мм, которые заливали в парафин. Гистологические срезы, толщиной 5-7 мкм, окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, а также основным коричневым по Шубичу (с целью идентификации лаброци-тов — тучных клеток). Всего гистологическому и гистохимическому изучению подвергнуто 126 препаратов от 7 мышей.
Результаты и их обсуждение
У всех обследованных животных в головном мозге развивалась картина ишемической энцефалопатии с эозинофилией цитоплазмы нейтроцитов, перицеллюлярным и периваску-лярным отеком серого вещества. В сердце субэндокардиальные геморрагии сочетались с контрактильными изменениями в миоцитах и их фрагментацией. В почках развивался острый некротический процесс канальцевого эпителия (некротический нефроз). В легких обнаруживался выраженный интерстициальный и альвеолярный отек с распространенными кровоизлияниями в паренхиму легких, а также стенозом дыхательных путей и десквамацией их эпителиального пласта. В печени жировая дистрофия гепатоцитов сопровождалась их цен-тролобулярными некрозами. В селезенке периартериальные Т-зоны имели нечеткие контуры и содержали мало Т-лимфоцитов. Красная пульпа селезенки была резко полнокровной с большим количеством макрофагов в ней. В желудке выявлялся поверхностный гастрит с массивными геморрагиями в межъямочную собственную пластинку, с умеренным содержанием в последней эозинофильных гранулоцитов. В тонкой кишке у всех экспериментальных мышей обнаруживался геморрагический энтерит с десквамацией и некрозом каемчатых эпи-телиоцитов кишечных ворсинок. В толстой кишке выявлялся катарально-геморрагический колит с умеренной эозинофилией собственной пластинки.
В изучаемых органах у опытных животных при окраске основным коричневым лаброци-ты не обнаруживались вследствие их тотальной дегрануляции.
Известны основные патологоанатомические признаки шока, независимо от причины, вызывающей его [5]:
1. жидкое состояние крови в сосудах;
2. диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови с геморрагическим синдромом;
3. шунтирование кровотока;
4. депонирование крови в микроциркуляторном русле;
5. циркуляторно-гипоксическое повреждение органов.
Тем не менее, следует отметить, что в патологоанатомической картине различного по этиологии и патогенезу шока имеются некоторые отличия. Так анафилактический шок отличается главным образом поражением легких и стенозом дыхательных путей.
Таким образом, выявленные патологические изменения в изученных органах опытных животных характерны для анафилактического шока и внутривенное введение линейным мышам сыворотки норки может быть использовано в качестве лабораторной биологической модели для изучения сывороточной болезни и поиска новых десенсибилизирующих лекарственных средств и специфических ингибиторов комплемента.
Резюме
Причины быстрой гибели мышей после парентерального введения сыворотки крови норки, обладающей высокой активностью комплемента, исследованы выявлением гистологических изменений в органах экспериментальных животных. Показано, что патологические изменения в изученных органах характерны для анафилактического шока. Предложенная ранее экспериментальная модель патологического воздействия комплемента на организм является моделью комплемент опосредованной анафилаксии.
Ключевые слова: сыворотка крови норки, комплемент, мышь, модель, анафилаксия.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Белкин З.П. Феномен гибели мышей после парентерального введения сыворотки норки. Бюл. эксперим. биол. и мед., 1994, №9, С.290-291.
2. Белкин З.П., Козлов Л.В., Андина С.С., Мишин А.А., Гузова В.А. Дьяков В.Л. Капля комплемента норок убивает мышь. Вопросы медицинской химии, 2002, том.48, № 4, С.373-377.
3. Козлов Л.В., Белкин З.П., Бичучер А.М., Баталова Т.Н., Дьяков В.Л. Сравнение действия ингибиторов комплемента в опытах in vitro и in vivo: иммуноферментный метод изучения ингибирования субкомпонента dq и ингибирование действия комплемента на модельных животных. Биомедицинская химия, 2003, том.49, № 3, С.264-290.
4. Козлов Л.В., Белкин З.П., Андина С.С., Каплун А.П. Способ определения ингибирую-щего действия веществ на комплемент in vivo на модельных животных. Патент РФ № 2202836. Бюл. изобр., 2003, № 11. 20.04.2003.
5. Патологическая анатомия /Ред. В.В. Серов, М.А. Пальцев. М. «Медицина». 1998. С. 106-108.
THE MOUSE MODEL OF COMPLEMENT DEPENDENT ANAPHYLAXIS
I.T. Shcherbakov, Z.P. Belkin, S.S. Andina, L.V. Kozlov
Gabrichevsky Moscow Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Ministry of Public Health of Russian Federation, ul. Admirala Makarova, 10; Moscow, 125212 Russia;
tel.: (095) 452-38-01; e-mail: lvkozlov@mtu-net.ru
The immediate causes of fast death of mice at the intravenous administration of mink serum having high complement activity have been investigated by revealing of histologic changes in internals of experimental animals. The pathological changes found for the investigated organs were characteristic for anaphylactic shock. The experimental model of pathological effect of complement on an organism is hence a model of complement dependent anaphylaxis.
Key words: mink serum, complement, mouse, model, anaphylaxis.
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.