БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕМБРАНЫ, 2008, том 25, № 6, с. 458-462
УДК 612.112.2:577.17
НЕЙРОПЕПТИД КАРНОЗИН УВЕЛИЧИВАЕТ УСТОЙЧИВОСТЬ ЛИПОПРОТЕИНОВ И ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОКОМПЕТЕНТНОЙ СИСТЕМЫ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ДИСЦИРКУЛЯТОРНОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИЕЙ
© 2008 г. Т. Н. Федорова, М. С. Беляев, О. А. Трунова, В. В. Гнездицкий, М. Ю. Максимова, А. А. Болдырев
Научный центр неврологии РАМН, 125367 Москва, Волоколамское шоссе, 80; электронная почта: tnf51@bk.ru Поступила в редакцию 17.06.2008 г.
Обнаружено, что использование карнозина в суточной дозе 2 г в качестве дополнительного средства при лечении дисциркуляторной энцефалопатии (ДЭ) усиливает устойчивость липопротеинов плазмы крови к Ре2+-индуцированному окислению, а также стабилизирует эритроциты по отношению к кислотному гемолизу и интенсифицирует дыхательный взрыв лейкоцитов. Одновременно в присутствии карнозина наблюдалось снижение латентного периода вызванных потенциалов Р300 и возрастание доли вызванных потенциалов с высокой амплитудой. Полученные данные свидетельствуют об увеличении эффективности базовой терапии пациентов с ДЭ при использовании карнозина.
Специфический компонент возбудимых тканей позвоночных животных карнозин ф-аланил-£-ги-стидин), описанный в 1900 г. Гулевичем и Амира-джиби [1], обнаруживает способность защищать мозг от окислительного стресса и его последствий в различных экспериментальных моделях [2]. Он уменьшает экзайтотоксичность КМБЛ-рецепто-ров, предотвращает индукцию нейрональной смерти при действии неблагоприятных факторов, смягчает неврологическую симптоматику и уменьшает смертность животных после экспериментальной ишемии головного мозга [3].
Результаты разнообразных экспериментальных и клинико-биохимических исследований показывают, что карнозин способен защищать головной мозг от окислительного стресса в условиях нарушенного кровоснабжения. В настоящее время существует необходимость поиска новых нейро-протекторов, направленных на защиту мозга от свободнорадикального гипоксического/ишемиче-ского повреждения [4, 5].
Все эти свойства привлекают внимание к кар-нозину как к препарату, облегчающему состояние пациентов при неврологических заболеваниях. Появление на фармацевтическом рынке биодобавок, содержащих карнозин, стимулировало его исследования на пациентах и позволило установить его положительное действие при болезни Паркин-сона [6].
В настоящей работе мы оценили устойчивость и функциональную активность структурных и форменных элементов крови у больных с хроническими сосудистыми заболеваниями головного моз-
га, которые получали карнозин в качестве препарата дополнительной терапии.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
В работе измеряли устойчивость липопротеинов плазмы крови к Ре2+-индуцированному окислению [6], кислотный гемолиз эритроцитов [7] и дыхательный взрыв лейкоцитов [8] у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) при базовой терапии и при введении карнозина в стандартную схему лечения. Полученные данные сопоставляли с изменением когнитивных функций мозга, определяемых по анализу вызванных потенциалов Р300 [9] до и после лечения. При окислении липопротеинов измеряли стационарный уровень гидроперекисей липидов, лаг-период и скорость окисления, а также максимальную окисляемость образцов, индуцированную внесением в среду 2.5 мМ Ре804. Гемолиз эритроцитов вызывали внесением в 2 мл среды 50 мкл 0.Ш соляной кислоты и регистрировали изменения оптической плотности на спектрофотометре интерес 3300 фирмы "АтегеИат" (США) при 660 нм, рассчитывая латентный период и скорость гемолиза. Дыхательный взрыв лейкоцитов, выделенных по стандартному протоколу [8], характеризовали хемилюминесцентным способом, измеряя скорость возгорания хемилюминес-ценции (ХЛ) в ответ на добавление в пробу опсони-зированного зимозана, время достижения максимума ХЛ и его величину, а также светосумму ХЛ к 10 мин измерения. Хемилюминесцентные измерения были выполнены на хемилюминометре ЬКБ-1251 (Швеция).
Диагностику и лечение осуществляли в Отделении острых нарушений мозгового кровообращения Научного центра неврологии РАМН. Исследование было выполнено двойным слепым плацебо контролируемым методом при информированном согласии пациентов в соответствии с протоколом, утвержденным Этическим комитетом Научного центра неврологии РАМН. Под наблюдением находилось 42 пациента (мужчины и женщины) с хронической ДЭ в возрасте от 32 до 79 лет. В группу, получавшую базовую сосудистую терапию, вошли 20 пациентов, в группы, получавшие дополнительно карнозин (в суточной дозе 0.75 г или 2.0 г), входило по 11 пациентов. Длительность исследования составила 21 день. Результаты были сопоставлены с данными, полученными при аналогичном исследовании крови здоровых доноров.
Для оценки когнитивных функций головного мозга регистрировали вызванные потенциалы Р300 на приборе "нейроМВП 4" ("Нейрософт", Россия), анализируя сенсорный компонент и его амплитуду, а также латентность и амплитуду когнитивной составляющей пика P3 [9].
В качестве источника карнозина использовали биоактивную добавку "Севитин" (ОАО "Медтех-ника", Россия) - таблетки, покрытые кислотоустойчивой оболочкой, содержащие 0.25 г карно-зина.
Приведенные результаты представлены в виде M ± SEM. Математическую обработку данных проводили с использованием программы "Statistica 6.0". Для оценки достоверности обнаруженных изменений применяли следующие статистические критерии: тест Уилкоксона (сравнение параметров, измеренных до и после лечения) и тесты Стьюдента или Манна-Уитни (сопоставление двух независимых групп данных).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Характеристика окисляемости липопротеинов плазмы крови всех исследованных групп пациентов приведена на рисунке. Видно, что уровень ли-пидных гидроперекисей в исследуемых образцах пациентов с ДЭ не отличается достоверно от уровня у здоровых доноров и не изменяется при различных способах лечения (рисунок а). Остается неизменным и параметр, характеризующий окисляе-мость образцов (рисунок б). В то же время лаг-период возгорания ХЛ и скорость окисления претерпевают значительные изменения. Лаг-период развития Ее2+-индуцированного роста ХЛ для липопротеинов, выделенных из крови пациентов с ДЭ, существенно снижен (почти на 50%) и не изменяется при базовом лечении. Введение в схему лекарственной терапии карнозина увеличивает длительность лаг-периода, причем этот эффект демонстрирует отчетливую дозовую зависимость
(рисунок в). Скорость Ее2+-ндуцированного окисления изменяется противоположным образом -она имеет существенно большую величину до лечения, не изменяется при базовой терапии и значительно снижается в результате введения карнозина в схему лекарственной терапии (рисунок г). При этом большие дозы карнозина обеспечивают более выраженный эффект.
Ни латентный период, ни скорость кислотного гемолиза эритроцитов, выделенных из крови пациентов, получавших базовую терапию, не изменялись в процессе лечения. Карнозин в суточной дозе 0.75 г также не изменял этих параметров. Однако карнозин в суточной дозе 2 г достоверно увеличивал длительность латентного периода (с 134 ± ± 4 до 151 ± 6, р = 0.03).
Исследование дыхательного взрыва лейкоцитов, индуцированного внесением в пробу опсони-зированного зимозана, обнаружило, что ни скорость возгорания ХЛ, ни другие параметры дыхательного взрыва не претерпевали достоверных изменений в результате стандартной терапии, только время достижения максимума дыхательного взрыва несколько удлинялось (на 11%, р < 0.05). Не оказывало влияния на исследуемые параметры и введение в протокол лечения карнозина в дозе 0.75 г в сутки. Увеличение суточной дозы карнозина до 2 г приводило к существенной модификации дыхательного взрыва: скорость развития ХЛ возрастала на 46% (р < 0.05), максимальная величина ХЛ увеличивалась на 68% (р < 0.05), а светосумма увеличивалась на 49% (р < 0.05) (таблица). Время достижения максимума ХЛ также было несколько большим (на 12%).
Оценка когнитивных функций мозга, проводимая при анализе вызванных потенциалов Р300, показала, что у пациентов, получавших базовую терапию, отсутствует динамика параметров Р300. Не меняло ситуации и дополнительное включение в схему лечения карнозина в суточной дозе 0.75 г. В то же время в картине вызванных потенциалов Р300 у пациентов, получавших карнозин в суточной дозе 2.0 г, отчетливо уменьшалась латент-ность пиков когнитивного комплекса: до лечения она составляла 378 ± 21 мс, а после лечения - 345 ± ± 12 мс (р < 0.05). Амплитуда пиков Р300 у пациентов обеих групп до и после лечения при этом существенно не изменялась. Однако число ответов с низкой амплитудой в группе пациентов, не получавших карнозин, составляло 60%, а в группе пациентов, получавших карнозин, только 27% (р < < 0.05), что подтверждает положительное влияние карнозина на когнитивные функции мозга.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ДЭ характеризуется хроническим течением. Для оценки устойчивости структурных элементов
0
Гидропепекиси липидов, % к норме
а
100 г
80 60 40 20
Количество окисляемого материала, % к норме •
180
140
120
100
80
60
40
20
0
До Базовая +0.75 г +2.0 ] лечения терапия карнозин
До Базовая +0.75 г +2.0 г лечения терапия карнозин
Относительная величина лаг-периода, Скорость окисления, % к норме % к норме
80
60
40
20
0
&
II
До Базовая +0.75 г +2.0 ] лечения терапия карнозин
250 200 150 100 50 0
&
До Базовая +0.75 г +2.0 ] лечения терапия карнозин
Устойчивость липопротеинов плазмы крови пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией при разных способах лечения (в % от величин, полученных у здоровых доноров). а - гидроперекиси липидов; б - окисляемость биологического материала; в - латентный период окисления; г - скорость окисления. * - Достоверность различий до и после лечения (тест Уилкоксона), & - Достоверность различий в зависимости от дозы карнозина (тест Манна - Уитни)
*
крови мы измеряли резистентность липопротеинов плазмы крови к Ре2+-индуцированному окислению и скорость кислотного гемолиза эритроцитов, а также способность лейкоцитов к реализации дыхательного взрыва, вызванного опсонизирован-ным зимозаном. Эти парам
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.