690 HMMynofyapMaKOAoruR
EXPERIMENTAL ESTIMATION OF CORRECTION OF CELLULAR IMMUNITY HEPATOPROTECTIVE DRUG HEPATOBIOL IN LABORATORY ANIMALS C ACUTE TOXIC HEPATITIS
Zabokritskiy N. A.12, Karimova A. A.1, Kolomiets O. V.1
'Ural State Medical University; 2Institute of Immunology and Physoilogy of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences, Ekaterinburg, Russia
The article is devoted to topical issues of pre-clinical study developed a combined experimental sample hepatoprotective drug hepatobiol on indices of cellular immunity and laboratory animals captured by the model of acute hepatic toxicity. The results of comparative tests testified that the manifestation of immune and inflammatory syndrome in less was expressed in the group of animals for which treatment was prescribed the drug hepatobiol. Normalization of all registered indicators observed already by the 30th day. Evaluation study of cell status of laboratory animals when they play the experimental model of acute toxic hepatitis, allow to make conclusion about the presence of the combined probiotic drug hepatobiol more meaningful immunomodulating effect, in comparison with the control drug (ursosan). The obtained data testify that in the groups of laboratory animals receiving the experimental sample of the drug hepatobiol and drug comparison ursosan, experienced a more pronounced increase in all the studied cell immunity factors - increase of phagocytic activity of blood neutrophils in 4,1 and 3,8 times, the absorption capacity of neutrophils in NST-test 7 and 5 times, increasing the number of T- and B-lymphocytes 1,7 and 1.6 times and antibody forming cells (AFC) in 2 times in both groups, respectively. At the early stages of the experiment significantly increased and quantitative representation of populations of T- and B-lympho-cytes, as well as the AFC, indicating the activation of all parts of cellular immunity.
Key words: hepatobiol, probiotic, the combined drug, immunotropic effect, cellular immunity
НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ СПЕКТРА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ АКТИВНОГО ЦЕНТРА ГМ-КСФ
Зурочка А. В.1, Зурочка В. А.1, Добрынина М.А.1, Зуева Е.Б.1, Гольцова И. А.1, Гриценко В. А.2
ФБГУН Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатаеринбург; 2ФБГУН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
Исследования по изучению спектра биологической активности выявили антибактериальную, иммунотропную и репарационную активность у синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ, что позволило сформировать новые подходы к изучению механизмов действия данного соединения на различные ткани и биологические объекты. Было выявлено, что пептид обладает не только прямым бактерицидным действием, но и снижает био-пленкообразование у широкого спектра ГР-отрицательных и Гр-положительных бактерий, оказывает выраженное репарационное действие не только на кожные раны, но и восстанавливает раневые дефекты слизистых, при этом скорость заживления ран увеличивается примерно в 2 раза.
Ключевые слова: синтетический пептид, ГМ-КСФ, антибактериальная, иммунотропная, репарационная активность
Введение. В последние годы появились иммунотропных пептидов различного генеза. данные о плейотропных механизмах действия Наиболее перспективными из них являют-
ся синтетические аналоги активного центра ГМ-КСФ [1, 2, 3, 4]. Так авторами были получены первые данные о наличии у данных препараратов иммунотропной (помимо стимуляции костно-мозгового кроветворения) активности, такой как, например, стимуляции реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) [2], активности созревания грану-лоцитов в культуре стволовых клеток [1, 2]; антибактериальной активности в отношении Грам-отрицательных и Грам-положительных бактерий [3, 4, 5], на модели кожной раны были получены данные о выраженном стимулирующем эффекте репарации кожной раны с восстановлением волосяного покрова и отсутствием образования рубца. Все эти данные были подтверждены гистологически [6]. При исследовании влияния пептида при радиационном поражении в эксперименте было показана высокая эффективность данного препарата на восстановление и функциональную активность гранулоцитарного звена иммунитета [7].
Все это определило формирование новых подходов к дальнейшему исследованию спектра биологической активности перспективного препарата обладающего широким спектром комбинированного воздействия на различные системы организма и бактерии.
Целью настоящего исследования явилось поиск механизмов антибактериального и репарационного действия синтетического пептида активного центра ГМ-КСФ на различных биологических моделях.
Материал и методы. Изучали активность и доза-зависимые эффекты пептида ZP 2 (химическая формула -THR NLE NLE ALA SER HIS TYR LYS GLN HIS CYS PRO). Синтез пептидапроводился твердофазным способом на синтезаторе «Applied Biosystems 430A» по методу in situ c использованием Na-Boc-защищенных производных аминокислот. Для блокирования боковых цепей трифунк-циональных аминокислотных остатков использованы защитные группы бензильного и уретанового типов. Присоединение аминокислотных остатков проводили методом 1-ги-дроксибензотриазоловых эфиров, используя 5 кратные избытки реагентов. По завершении сборки полипептидной цепи пептидил полимер обрабатывали жидким фтористым водородом по Sn1/Sn2 механизмам в присутствии скавенджеров. Продукт высаживали диэти-
ловым эфиром и очищали методом препаративной обращенно-фазовой хроматографии до гомогенного состояния. Конечные продукты охарактеризованы данными аминокислотного и масс-спектрального анализов и аналитической ОФ ВЭЖХ. Аминокислотный состав полученных соединений и их молекулярный вес соответствовали теоретическим, чистота по данным аналитической ОФ ВЭЖХ была не менее 95% [5].
Изучали антибактериальную активность пептида в бульонной культуре бактерий в концентрации от 100 мг/мл до 10 мкг/мл в качестве тест штамов были использованы бактерии семейств Staphlococcus, E.coli, Micrococcus. Было протестировано в каждом семействе по 10 штаммов бактерий. Было исследовано действие различных концетраций пептида на рост и размножение бактерий в бульонной культуре в течение 24 часов. Одновременно были изучены комбинации пептида в различных дозировках и тромбоцитарного катионно-го белка, лизоцима и вещества из супернатан-та клеток CD34+ CD45- в тех же концентрациях на рост и размножение бактерий. В последующем на этих же штаммах микроорганизмов было изучено влияние пептида и его комбинаций с другими веществами на биопленкоо-бразование бактерий [8]. Следующим этапом исследований было изучение доза-зависимых эффектов синтетического пептида ГМ-КСФ на репарацию слизистых после проведения хирургического лечения - радиоволновой экс-цизии цервикальной дисплазии шейки матки. В исследование были включены 47 женщин с дисплазией шейки матки 1, 2 и 3 ст. в возрасте от 21 до 44 лет, которым было показано хирургическое лечение.
Хирургическое лечение проводилось с использованием высокочастотного радиохирургического прибора «Сургитрон» (производство USA). Для лечения всех пациенток был выбран метод петлевой эксцизии объемом в пределах здоровых тканей.
Перед проведением хирургического лечения - радиоволновой эксцизии ШМ- все пациентки прошли обследование: сбор инфекционного, гинекологического и аллергического анамнеза, а также было проведено бактерио-скопическое, онкоцитологическое, кольпоско-пическое, молекулярно-биологическое (ПЦР на ВПЧ, хламидии, уреаплазму, микоплазму) исследование.
692
Иммунофармакология
Для определения эффективности местного применения раствора пептида в послеоперационном периоде и выявления его оптимальной концентрации пациентки были разделены на 5 групп: 1 - контрольная - без применения пептида - 10 чел., 2 - с применением 10 мкг/мл р-ра пептида - 8 чел., 3 - с применением 20 мкг/мл р-ра пептида - 9 чел., 4 - с применением 40 мкг/мл р-ра пептида - 11 чел., 5 - с применением 80 мкг/мл р-ра пептида - 9 чел.
После проведения радиоволновой эксцизии шейки матки по поводу CIN, пациентки использовали раствор пептида в виде вагинального спрея в течение 5 дней по 3 впрыскивания во влагалище 2 раза в день, что составило примерно 1 мл раствора активного вещества соответственно в каждой группе (концентрации указаны выше).
В послеоперационный период женщины находились под наблюдением 22 дня: осмотр проводили на 2-3 день, на 5-7 день, на 1012 день и на 20-22 день.
Критериями эффективности лечения явились динамические изменения клинических симптомов: толщина струпа на послеоперационной ране, скорость его отторжения, площадь эпителизации, количественное и качественное состояние отделяемого из раны.
Результаты и обсуждение. Исследования показали, что пептид в широком диапазоне доз обладает бактерицидной активностью, влияя на рост и размножение бактерий в бульонной культуре. Отмечено, что при различных комбинациях с препаратами, такими как тромбо-цитарный катионный белок, вещество из су-пернатантов клеток CD34+CD45-, лизоцим выявлялось потенцирование действия комбинированных препаратов в отношении как Грам-отрицательных, так и Грам-положительных бактерий, при этом для достижения одинакового эффекта необходимы меньшие концентрации препаратов. Как сам пептид, так и его комбинации с вышеуказанными препаратами снижал биопленкоообразование бактерий, при этом комбинации препаратов была более эффективна, чем каждый препарат в отдельности и антибиопленкообразование усиливалось при меньших дозах препаратов. Учитывая, что все препараты относятся к веществам, полученным с биологических объектов, не исключено, что в организме способны работать их
комбинации, потенцируя и усиливая действие пептида активного центра ГМ-КСФ и, наоборот, пептид способен усиливать действие этих веществ в организме, что расширяет возможности применения данного препарата.
Исследование репарационных свойств пептида показало, что в группах женщин после электроэксцизии с использованием пептида была отмечена быстрая положительная клиническая динамика, которая сопровождалась хорошим космети
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.