РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2009, ТОМ 3(12), № 2
= ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА У ЛИЦ С ЛАТЕНТНОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ
© 2009 г. Г.В. Порядин*, Ю.В. Шарпань*, А.М. Оршанко*, Ж.М. Салмаси*, А.Н. Ка-
зимирский*, Т.В. Латышева**
*Российский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития, Москва, Россия;
**ГНЦ «Институт Иммунологии» ФМБА России, Москва, Россия
Поступила: 03.03.2008. Принята: 12.05.2009
У 15 пациентов с латентной сенсибилизацией и 25 здоровых лиц были изучены особенности процентного распределения субпопуляций лимфоцитов с 15 тестированными идентификационными и активационными СО-маркерами (СО3, СО4, СО8, СШ6, С020, СО23, СО25, СО54, СО56, СО71, СО72, СО74, СО95, мембраносвязанными 1дМ, 1дС). Установлено, что при латентной сенсибилизации с положительными результатами кожных проб в наибольшей степени коррелирует аномальное (выше верхней нормативной границы) возрастание СО54+- и СО95 + -клеток. Полученные данные позволяют рекомендовать определение относительного содержания СО54+- и СО95+-лимфоцитов для иммунологического подтверждения/исключения вероятности наличия латентной сенсибилизации у лиц с аллергическими (с реагиновым механизмом) заболеваниями в периоде ремиссии.
Ключевые слова: латентная сенсибилизация, СО-антигены лимфоцитов
введение
В современной аллергологии важное значение придается поиску методов, обеспечивающих своевременное выявление отклонений, создающих фон для развития и/или усугубления проявлений атопии [1, 2]. Одним из факторов, имеющих очевидную связь с риском последующей клинической манифестации атопических заболеваний, является латентная сенсибилизация (ЛС). Суть феномена ЛС состоит в выявлении положительных результатов при постановке кожных проб на те или иные аллергены, в то время как при опросе пациент отрицает наличие каких-либо клинических проявлений (ринита, крапивницы, приступов удушья и др) на эти аллергены [3, 4]. На практике ЛС обнаруживается случайно при использовании широкого спектра диагностических антигенов, применяемых для уточнения причины уже отмечавшихся аллергических реакций. Негативная значимость ЛС состоит в том, что со временем она часто трансформируется в клинически манифестную форму атопии и таким образом способствует расширению спектра аллергенов, провоцирующих типичные рино-, бронхо-,
Адрес: 117997 Москва, ул. Островитянова 1, РГМУ. Е-таП: orschanko@mail.ru
легочные или кожные аллергические (ассоциированные с реагиновыми антителами) реакции, т.е. приводит к усугублению течения атопических болезней [5].
С учетом неблагоприятных последствий, провоцируемых ЛС, представляется актуальным уточнение ее диагностических критериев, опирающихся на оценку фенотипического спектра лимфоцитов. Можно предположить, что выявление каких-либо иммунологических критериев, позволяющих надежно диагностировать ЛС, могло бы не только уточнить природу этого состояния, но и существенно облегчило бы на практике выявление лиц с ЛС, устранив существенный недостаток применяемой сегодня диагностики ЛС, основанный только на оценке результатов кожных проб. Здесь следует пояснить, что при постановке кожных проб даже при использовании очень большого числа диагностических антигенов нет никакой гарантии выявления лиц с ЛС, поскольку отрицательные кожные реакции отнюдь не исключают вероятность положительных результатов на другие антигены, которые попросту не применялись с диагностической целью у данного пациента. Иными словами, заключение об отсутствии ЛС на основе результатов кожных проб по своей сути всегда является некорректным, поскольку при постановке кожных проб никогда не
используются все существующие в природе аллергены (это попросту технически невозможно). Все это означает, что кожные пробы могут лишь подтвердить существование ЛС у той части больных, у которых случайным образом примененный диагностический аллерген действительно оказался причиной ЛС, но те же кожные пробы никогда не смогут исключить наличия ЛС у лиц с их отрицательными результатами, т.к. нет никакой уверенности в том, что были использованы «нужные» диагностические антигены.
Анализ доступных сообщений об особенностях иммунного статуса у лиц с ЛС не позволяет сегодня составить четкого представления по этому вопросу. Более того, накопленный материал пока больше констатирует сходство, а не различие в определявшихся иммунологических параметрах между здоровыми людьми и пациентами с подтвержденной (по данным кожных проб) ЛС. Например, сравнительный анализ состояния клеток лимфоид-ной системы у больных с ЛС и здоровых лиц не выявил различий в количестве аллерген-специфических Т-лимфоцитов-памяти
(СВ4+СБ45+КО) [6] и в экспрессии рецепторов для хемокинов ССИ4, СХСИ1, L-selectin (CD62L) на Т-лимфоцитах памяти. То же можно отметить в отношении секреции цитоки-нов Т-лимфоцитами после стимуляции аллергеном, которая была практически одинаковой в группах с наличием и отсутствием ЛС [7]. Эти данные указывают на то, что перечисленные иммунологические показатели в принципе не подходят для использования в качестве диагностикумов, с помощью которых можно было бы подтверждать/исключать наличие ЛС. Однако можно заметить, что в лабораторном арсенале иммунологии существует еще множество параметров, которые пока не проходили проверки на предмет оценки их полезности для идентификации лиц с ЛС. Так, все еще не получена характеристика фено-типического состава лимфоцитов на основе оценки их CD-антигенов, характеризующих активационные процессы в иммунной системе и количественные соотношения клеток с разными (Т-, В-, NK-) идентификационными маркерами. Данный факт послужил побудительным мотивом для выполнения собственных исследований, целью которых был поиск связанных с фенотипическим составом лимфоцитов иммунологических параметров, достоверно изменяющихся у лиц с подтвержденной (по данным кожных проб) ЛС.
материалы и методы
В настоящее исследование были включены 15 пациентов в возрасте от 14 до 47 лет с диагнозом «латентная сенсибилизация» и 24 здоровых донора (контрольная группа) 18 — 42 лет. Пациенты с ЛС были отобраны специалистами отделения иммунопатологии взрослых (зав. — д.м.н., профессор, Латышева Т.В.) ГНЦ «Института иммунологии ФМБА России» из числа больных, проходивших обследование и лечение по поводу различных аллергических и хронических инфекционно-аллергических заболеваний. По данным анамнеза отмечавшиеся в прошлом манифестные проявления аллергии у 4 из 15 (т.е. у 26,7%) пациентов с ЛС выражались в виде хронической рецидивирующей крапивницы и/или отеков Квинке и ассоциировались с погрешностями в диете и приемом антибиотиков. У 2 (13,3%) больных имел место хронический рецидивирующий бронхит, аллергическая природа которого подтверждалась положительными кожными пробами на домашнюю пыль, перо и шерсть животных. 6 (40%) больных страдали хроническим рецидивирующим фурункулезом и еще 3 (20%) — себорей, рецидивы которых провоцировались отклонениями в диете и/или приемом лекарственных средств.
В период проведения анализов, предусматривавших оценку иммунного статуса, все включенные в исследование пациенты с ЛС отрицали наличие каких-либо проявлений аллергии (т.е. были в состоянии ремиссии по критерию активности проявления диагностированного в прошлом того или иного аллергического заболевания) и, соответственно, не получали медикаментозную терапию.
Заключение о наличии ЛС основывали на результатах кожных скарификационных проб (КСП). КСП назначали для уточнения причин имевших место аллергических реакций (самостоятельных или сопровождавших хронические заболевания), послуживших мотивом для обращения за лечебной помощью. У всех 15 отобранных для исследований больных КСП выявили наличие ЛС к пыльцевым аллергенам, тогда как ни один из этих пациентов не отмечал наличия (ни в настоящем, ни в прошлом) каких-либо аллергических реакций (в виде конъюнктивита, ринита, крапивницы или бронхоспастических реакций) в ситуациях вероятного контакта с этими аллергенами.
При исследовании иммунного статуса использовали методы иммунофенотипирова-
ния мембранных антигенов лимфоцитов периферической крови с использованием моноклональных антител производства НПЦ «МедБиоСпектр» (Россия). При количественной оценке субпопуляций лимфоцитов использовали идентификационные маркеры Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8), NK-клеток (СD16, CD56), В-лимфоцитов (CD20, CD72, мембраносвязанные 1дМ, 1дС). Активацион-ные процессы в иммунной системе изучали путем количественной оценки лимфоцитов, несущих следующие антигены: CD25, CD71, HLA-DR, CD95, CD54, CD23. С помощью флюоресцентной микроскопии в выделенной из проб крови фракции лимфоцитов определяли абсолютное и процентное число клеток, позитивных в отношении указанных маркеров.
Сравнивали перечисленные иммунологические показатели, рассчитанные среди пациентов с ЛС и в группе здоровых доноров. При статистическом анализе полученных данных для оценки различий между средними
значениями количественных показателей использовали параметрический критерий Стьюдента ^-тест). Различия расценивали как достоверные при критических значениях ^ соответствовавших 95% доверительному интервалу (р<0,05). Для облегчения компьютерных рассчетов применяли программу «Биостат».
результаты
Исследование распределения субпопуляций иммунокомпетентных клеток (ИКК) с изучавшимися идентификационными CD-маркерами в периферической крови больных с латентной сенсибилизацией выявило снижение у них относительного содержания Т- и NK-лимфоцитов при сохранении нормальных показателей субпопуляционного состава В-лимфоцитов (таб. 1). В наибольшей степени такие отклонения были выражены
Таблица 1. Характеристика количественного состава основных субпопуляций лимфоцитов у пациентов с латентной сенсибилизацией
Пациенты с латентной сенсибилизацией
Маркеры лимфоцитов (идентификационные антигены) Здоровые доноры (контроль) Доля лимфоцитов с опрелявшимся маркером М±т,% (тт-тах, %) Доля лимфоцитов с опрелявшимся маркером М±т,% % лиц со значениями определявшегося маркера > max уровня, зарегистрированного у здоровых доноров % лиц
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.