РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2009, ТОМ 3(12), № 3-4, с. 326-332
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЯ ХЕМОТАКСИСА НЕЙТРОФИЛОВ У БОЛЬНЫХ АТОПИЧЕСКОЙ И СМЕШАННОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
© 2009 г. А.В. Зурочка*, Е.Е. Дворчик, П.П. Городечный*, В.А. Зурочка*
Клиника ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, Челябинск, Россия;
* Самостоятельный курс клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава,
Челябинск, Россия
Поступила: 04.10.2008. Принята: 04.08.2009
Нами было проведено исследование хемотаксиса нейтрофилов у больных атопической и смешанной бронхиальной астмой по сравнению с условно-здоровыми лицами. Изменений в спонтанной миграционной активности нейтрофилов и хемотаксическом ответе на стандартный хемоаттрактант выявлено не было. У больных атопической бронхиальной астмой при ответе на причиннозначимый аллерген выявлен феномен хемотаксической деактивации без изменения метаболических свойств, а у больных смешанной бронхиальной астмой при ответе на St. aureus выявлен феномен хемотаксической деактивации с усилением метаболической активности. Отсутствие данного феномена при ответе на аллерген у больных смешанной бронхиальной астмой, возможно, свидетельствует о перераспределении роли аллергена и микроорганизма в формировании данной патологии в сторону инфекционного агента.
Ключевые слова: хемотаксис нейтрофилов, хемоаттрактант, бронхиальная астма
ВВЕДЕНИЕ
Направленная миграция является важнейшим проявлением реактивности нейтрофилов, основной смысл которой заключается в достижении объекта, вызвавшего активацию клетки (очаг тканевой деструкции, инфекционного воспаления). Активированный ней-трофил, пришедший в очаг, решает эффек-торные задачи одним из двух способов: либо с помощью фагоцитоза, либо путем секреции биологически активных продуктов [1] . Сложность клеточных и гуморальных механизмов, которые обеспечивают хемотаксис, делает его одной из самых уязвимых форм реактивности нейтрофила [2]. Характер изменений фагоцитарной и хемотаксической активности нейтрофилов подробно изучен при многих гнойно-воспалительных процессах, при острой патологии и травматической болезни [1, 3 — 5]. Не менее важна роль фагоцитов при
Адрес: 454138 г. Челябинск, ул. Ворошилова, 23-38. E-mail: Elena_dvorchik@mail.ru
аллергопатологии, в частности широко распространенной, угрожающей жизни больного патологии — бронхиальной астме (БА). Однако в формировании данного заболевания часто важную патогенетическую роль играет инфекционное звено, что, с одной стороны, может поддерживать активность аллергического воспаления, а, с другой стороны, аллергическое заболевание при длительном течении (или лечении) приводит к изменениям иммунного статуса по типу вторичного иммунодефицита, клиническим проявлением которого являются рецидивирующие хронические воспалительные заболевания. С точки зрения клинико-лабораторной оценки, такие поражения иммунной системы являются наиболее сложными для верификации иммунологического диагноза и требуют индивидуальной тактики ведения больного и иммунокоррек-ции этих состояний, где важную роль играют именно фагоциты, обеспечивающие первую линию защиты от инфекции и играющие немаловажную роль в поддержании аллергического воспаления в различных органах и системах. Инфекционная зависимость у боль-
ных БА представляет собой такое состояние, при котором возникновение и/или течение заболевания зависит от воздействия различных инфекционных агентов; первые клинические проявления или обострения течения БА связаны с воздействием инфекционных факторов, улучшение состояния возникает после снижения патогенного влияния инфекции. В настоящее время очевидна необходимость диагностики активной и скрытой инфекции у таких больных, так как это тесно связано с выбором адекватной терапии, что определяет актуальность и служит обоснованием цели настоящего исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Нами было проведено обследование 56 практически здоровых лиц и 135 больных атопической и смешанной (сочетание атопи-ческого и инфекционно-зависимого клинико-патогенетического варианта) БА интермитти-рующего и легкого персистирующего течения в фазы обострения или ремиссии. На момент обследования из 58 больных атопической БА 24 человек находились в стадии обострения, а 34 — в стадии клинической ремиссии. Среди 66 больных смешанной БА 32 человек находились в стадии обострения и 34 человек в стадии ремиссии.
Изучение фагоцитоза нейтрофилов периферической крови проводили на модели поглощения частиц латекса [6]. С помощью иммерсионной микроскопии учитывали активность фагоцитоза, интенсивность фагоцитоза и фагоцитарное число. Исследование внутриклеточного кислородзависимого метаболизма проводили, используя НСТ-тест, основанный на учете интенсивности восстановления клетками нитрасинего тетразолия в его нерастворимую форму — диформазан в результате респираторного взрыва в активированных фагоцитах. Постановку метода осуществляли в модификации А.Н. Маянского и М.Е. Виксмана [7]. Лизосомальный аппарат клеток проводили путем прижизненного исследования интенсивности люминисценции лизосом в цитоплазме фагоцитов, окрашенных акридиновым оранжевым [6].
Для изучения хемотаксиса нейтрофилов периферической крови человека использовали метод, предложенный Nelson R.D. et al. [8], основанный на оценке миграционной активности лейкоцитов под агарозным гелем в модификации Эберта Л.Я. и др. [9]. Для
формирования лунок агарозный гель заливали в чашки Петри через отверстие в стандартном штампе, установленном на покровном стекле. В средние лунки агарозного геля вносили взвесь нейтрофилов в концентрации 1 — 5 х 107/мл в питательной среде 199. В крайние лунки вносили хемоаттрактанты (взвесь суточной культуры бактерий St. aureus штамм «Cowan 209», естественный цитокиновый комплекс «Лейкинферон», стандартный хе-моаттрактант С5а-фрагмент комплемента, специфический аллерген и питательная среда 199 (контроль), в центральную лунку — питательную среду 199. Чашки Петри в эксикаторе, воздух в котором обогащен углекислым газом до 5%, инкубировали в термостате при температуре 37 °С в течение 3 часов, затем заливали 47% формалином на 30 минут для фиксации клеток к стеклу. После фиксации агар осторожно удаляли из чашек, стекла промывали в проточной водопроводной воде и подсушивали на воздухе при комнатной температуре. Миграционная активность нейтрофилов учитывалась методом световой микроскопии при увеличении 8 х 7 с использованием окулярного микрометра. Измеряли две зоны миграции клеток: в сторону хемоаттрактан-та (А) и в сторону питательной среды 199 (В) и выражали их в условных миллиметрах (усл.мм.). Индекс хемотаксиса выражали в условных единицах (у.е.), как отношение зоны А к зоне В. Спонтанную миграцию оценивали как среднее арифметическое 4-х зон миграции в контрольной лунке, выражали в усл.мм. Для определения изменений хемотаксиса нейтро-филов у больных атопической и смешанной БА, прежде всего, нами было проведено исследование спонтанной миграционной активности этих клеток, которой обладают даже нестимулированные фагоциты, характеризующей способность клетки к механическим и сократительным изменениям в принципе, обеспечивающим собственно движение.
Хемотаксис отражает способность клетки активно перемещаться в направлении стимулирующих факторов — хемоаттрактантов, наличие градиента которых нейтрофил должен распознать и интерпретировать, прежде чем начать движение по направлению против градиента хемотаксического фактора. Для определения наличия у больных атопической и смешанной БА изменений механизмов распознавания и интерпретации сигнала по сравнению с группой практически здоровых лиц мы определили индекс хемотаксиса к стан-
дартному хемоаттрактанту — С5а фрагменту комплемента [10].
В связи с тем, что St. aureus является наиболее частым контаминантом верхних дыхательных путей [11 — 14], мы предположили возможность наличия у больных смешанной БА персистенции инфекционного агента со сходными антигенными детерминантами, что побудило нас определить индекс хемотаксиса у больных атопической и смешанной БА к взвеси суточной культуры St. aureus штамм «Cowan 209» по сравнению с практически здоровыми лицами.
Так как in vivo нейтрофил находится в микроокружении большого количества клеток, выделяющих огромный каскад различных цитокинов, влияющих в том числе и на хемо-таксические свойства этих клеток, мы сочли необходимым определить индекс хемотаксиса нейтрофилов к естественному цитокиновому комплексу. Для исследования мы применили многокомпонентный препарат «Лейкинфе-рон», содержащий цитокины в сбалансированном соотношении. Он представляет собой комплекс цитокинов первой фазы иммунного ответа, обеспечивающих координацию макрофагов, Т-хелперных лимфоцитов и нейтро-фильных фагоцитов. В состав препарата входят интерферон-альфа, интерлейкин-1, интерлей-кин-6, интерлейкин-12, фактор некроза опухоли, факторы ингибиции миграции лейкоцитов и макрофагов в их естественном соотношении, которое не нарушается в процессе очистки.
Также мы попытались изучить влияние аллергена на хемотаксическую активность ней-трофила, как одного из возможных механизмов поддержания аллергического воспаления. Для этого мы определили индекс хемотаксиса у больных атопической и смешанной БА к причинно-значимому аллергену по результатам кожных проб.
Кроме того, в зонах хемотаксического ответа ко всем перечисленным выше хемоаттрак-тантам была произведена оценка эстеразной активности стимулированных клеток методом одновременного азосочетания по Пирсу [15] в модификации лаборатории неспецифического иммунитета института иммунологии МЗ СССР (1986).
Статистическая обработка проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0», достоверность различий оценивалась по U-критерию Манн-Уитни.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При изучении показателей лейкоцитарной формулы крови обращает на себя внимание, что во всех группах больных БА наблюдалось высокое абсолютное и относительное количество гранулоцитов, за счет преимущественного преобладания сегментоядерных нейтро-филов. В связи с этим мы сочли необходимым изучить
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.