== ИННОВАЦИОННАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ ЮНЦ РАН
ОСОБЕННОСТИ ПРЕАНАЛИТИЧЕСКОГО ЭТАПА ПРОТЕОМНЫХ И ГЕНОМНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ОНКОУРОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
© 2010 г. М.Б. Чибичян, А.В. Ильяш, Е.Н. Черкасова, Т.Н. Белова
В настоящее время протеомика активно развивается во многих странах мира и занимает ведущие позиции в научных программах современной прикладной и фундаментальной биологии и медицины. С развитием этой науки связывают большие надежды по внедрению новых подходов в диагностике различных заболеваний и выяснению закономерностей функционирования клеток [1]. Сегодня протеомика - область интенсивных исследований, включающих идентификацию биомаркерных молекул при различных заболеваниях, в том числе онкологических, кардиологических, ревматологических, гепатологических и др. [2, 3].
На современном этапе развития медицины приоритетной задачей онкологии является повышение эффективности лечения злокачественных новообразований путем поиска и разработки принципиально новых методических подходов к ранней диагностике, усовершенствованию традиционных способов терапии неоплазий [4]. Стандартные операционные процедуры в области диагностики рака предстательной железы обязательно включают морфологическое исследование биоптатов ткани простаты для подтверждения опухолевой метаплазии, наличия облигатного предрака, степени дифференцировки и прорастания в смежные органы. Но, к сожалению, заключения о стадии рака предстательной железы, основанные на исследовании биоптатов, далеко не всегда соответствуют истине. Абсолютно адекватно оценить раковый процесс в предстательной железе позволяет только патоморфологический анализ самой предстательной железы на этапе радикальной простатэктомии [5]. Поэтому актуальным является поиск ранних биомаркеров процесса онкотрансфор-мации. Достижения последних лет обогатили науку детальными знаниями о молекулярных процессах, лежащих в основе канцерогенеза, опухолевой инвазии, ангиогенеза и метастазирования, а также о явлениях, вовлеченных в супрессию опухоли, контроль роста, апоптоз и иммунный ответ [6, 7].
Выявление информативных предикторов и маркеров рака предстательной железы остается центральной проблемой современной онкоурологии. Канцерогенез представляет собой многоступенчатый процесс накопления в клетке генетических дефек-
тов, обусловливающих ее постоянную митогенную стимуляцию, нечувствительность к антиростовым и проапоптотическим сигналам, неограниченный пролиферативный потенциал, ангиогенез, инвазию и метастазирование [7, 8].
Достижения в понимании механизмов канцерогенеза делают перспективными исследования по выявлению потенциальных маркеров, которые отражают нарушения протеомного профиля, генетические и эпигенетические изменения, ассоциированные со злокачественным процессом [9-12]. Для идентификации опухолевых маркеров широко применяются протеомные методы сравнительного анализа белковых профилей нормальных и опухолевых тканей [7, 13-15]. Такой подход позволяет идентифицировать белковые маркеры, ассоциированные с опухолевой трансформацией. Для разработки потенциальных молекулярных маркеров с диагностической целью необходимо выявление белков, содержание которых существенно повышено в опухоли и биологических жидкостях, что позволило бы осуществлять их детекцию на ранних этапах опухолевого процесса. Традиционные методы выявления рака предполагают проведение биопсии (то есть забора микропорции ткани) - инвазивной процедуры, по сложности и болезненности приближающейся к хирургической операции. Несмотря на интенсивные поиски, открытые и используемые в настоящее время он-комаркеры не обладают необходимой для клинической практики чувствительностью и специфичностью, что сохраняет необходимость использования патоморфологических методов, неприемлемых для широких скрининговых исследований.
Прорыв в исследовании молекулярных основ онкогенеза в предстательной железе связывают с развитием онкопротеомики [15-19]. В литературе представлены данные о поиске белковых биомаркеров рака предстательной железы в моче как более доступной биологической жидкости для анализа, без применения травмирующих процедур [20].
Использование современных технологий ставит перед исследователями задачи разработки лабораторного регламента забора, первичной обработки, хранения биологических образцов и информации о пациентах. В связи с этим целью нашей работы
является разработка лабораторного регламента, позволяющего стандартизировать преаналитичес-кий этап обработки биологического материала для протеомных и геномных исследований онкоуроло-гических больных.
Согласно требованиям Международного комитета по биоэтике и Межправительственного комитета ЮНЕСКО по биоэтике по этическим соображениям, необходимо, чтобы сбор, обработка, использование и хранение протеомных и генетических данных человека осуществлялись на основе прозрачных и приемлемых с этической точки зрения процедур. В связи с этим для сбора протеомичес-ких и генетических данных человека или биологических образцов с помощью инвазивных или неин-вазивных процедур, а также для их последующей обработки, использования и хранения необходимо получить предварительное, свободное, осознанное и ясно выраженное согласие. Работа проведена с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с "Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан" [21], получено разрешение этического комитета ЮНЦ РАН.
Лабораторный регламент разделен на три этапа: преаналитический, аналитический и постаналитический. Аналитический и постаналитический этапы полностью проходят в лаборатории, преана-литический этап имеет основательную внелабора-торную составляющую для данного исследования, особенно тщательно соблюдается последовательность мероприятий по обеспечению качества биологического материала, которые зависят от действий врача, медицинской сестры, пациента и лабораторного сотрудника, ответственного за последовательность всего регламента пробоподготовки биологических жидкостей к исследованию.
Понятие "качество" применительно к исследовательской лаборатории - это правильно и своевременно собранный биологический материал с необходимой информацией для его интерпретации. Только при хорошей организации и качественном проведении всех этапов лабораторного исследования - преаналитического, аналитического и постаналитического - можно рассчитывать, что каждый полученный лабораторный результат, представленный в авторизованном отчете, может быть использован для принятия дальнейших решений.
Контроль качества лабораторных исследований -это создание и регулярное осуществление системы мероприятий для выявления и предотвращения недопустимых погрешностей, которые могут проявиться в процессе выполнения лабораторных исследований. Система контроля качества основана на принципах стандартизации всех этапов лабораторного исследования и анализе результатов внут-рилабораторного контроля качества.
ЭТАПЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Все этапы неравнозначны по затратам времени на их выполнение. В лаборатории большая часть времени отводится на проведение постаналитического этапа, 15-20% времени проходит вне лаборатории (преаналитический этап).
Преаналитический этап в исследовании включает: отбор пациентов по определенным критериям, подготовку пациента, забор биологического материала, маркировку, транспортировку биологического материала в лабораторию.
Основной задачей на преаналитическом этапе исследования является получение объективных данных о состоянии отдельно взятого пациента, выделенной группы, соблюдение стандартных условий взятия биологического материала и предотвращение деградации биологически активного вещества в образцах.
Факторы, влияющие на результаты исследования
Для получения достоверных результатов любого из существующих на сегодня методов лабораторных исследований учитывается ряд факторов, оказывающих негативное влияние на результаты. К этим факторам относятся: состояние пациента, предшествующее взятию у него биологического материала; соблюдение очередности забора биологического материала; условия взятия биологического материала; транспортировка биологических жидкостей; проведение пробоподготовки и хранение биологического материала до исследования.
Критерии включения пациентов в группы исследования
Согласно разработанному протоколу комплексного клинико-лабораторного обследования пациентов с онкоурологическими заболеваниями, включающему помимо общепринятых методов исследования развернутое клинико-инструментальное обследование больных, протеомное и геномное исследование крови, секрета простаты и мочи, нами были сформированы три группы: основная, группа сравнения и контрольная.
1. Группа основная - больные без предшествующей терапии с аденокарциномой простаты без сопутствующей патологии предстательной железы (доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ), абактериальный хронический простатит (ХАП)) и с сопутствующей патологией предстательной железы (ДГПЖ, хронический простатит) в возрасте 50-75 лет.
2. Группа сравнения - больные с диагнозом ДГПЖ без сопутствующей патологии и сопутствующим ХАП в возрасте 50-75 лет.
3. Группа контрольная - условно здоровые лица в возрасте 25-50 лет.
Критерии исключения пациентов из исследования:
1) больные с бактериальным хроническим простатитом (ХАП/СХТБ категории II),
2) больные с сифилисом,
3) больные с вирусом иммунодефицита человека,
4) больные с гепатитом,
5) больные с хронической патологией мочевыво-дящей системы (пиелонефрит, цистит, уретрит),
6) больные с хроническими кожными заболеваниями, активная форма,
7) больные с хроническими воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта (гастрит, колит), активная форма,
8) больные с хроническими воспалительными заболеваниями дыхательной системы (бронхит, пневмония), активная форма,
9) больные с сахарным диабетом,
10) больные с аутоиммунными заболеваниями (ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, псориаз, системная красная волчанка).
Объекты исследования
В качестве объектов исследования нами выбраны: сыворотка и плазма крови, средняя порция утренней мочи, секрет простаты.
После прин
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.