РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2009, ТОМ 3(12), № 1, с. 72-83
= ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ =
ПРОДУКЦИЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ЖЕЛУДКА У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПРИ ИНФЕКЦИИ
HELICOBACTER PYLORI
© 2009 г. Е.А. Варюшина, И.П. Козлова*, А.Ю. Котов, А.С. Симбирцев
ФГУП «Гос.НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия;
Медицинская академия последипломного образования, кафедра педиатрии № 2,
Санкт-Петербург, Россия
Поступила: 16.12.08 г. Принята: 02.02.09 г.
Инфекция Helicobacter pylori (H.pylori) является основной причиной хронического гастрита, язвы и рака желудка. Цель исследования — изучение продукции провоспали-тельных цитокинов в слизистой оболочке желудка (СОЖ) у детей с хроническими гастро-дуоденальными заболеваниями при инфекции H.pylori. Диагностику H.pylori проводили с использованием комплекса методов (бактериологическая, серологическая диагностика и определение уреазной активности). Продукция ИЛ-lß и ИЛ-8 изучена методом имму-ногистохимии в биоптатах СОЖ. Исследовали активность миелопероксидазы (МПО) и эндогенной Н2О2 в СОЖ. Инфекция H.pylori была подтверждена у 20 детей из 33 (60,6%) (НР( + ) группа). Гистологическое исследование и реакция на МПО показали выраженную инфильтрацию СОЖ нейтрофилами. Активность МПО и продукция эндогенной Н2О2 обнаружены во всех исследованных образцах независимо от наличия инфекции, тяжести поражения СОЖ или наличия СадА. Продукция ИЛ-lß и ИЛ-8 была выявлена в лейкоцитах, инфильтрирующих собственную пластинку СОЖ. Продукция ИЛ-lß и ИЛ-8 была значительно повышена в СОЖ в группе НР( + ) детей, что отражает активность местного воспалительного процесса, вызванного инфекцией. Продукция ИЛ-lß и ИЛ-8 в СОЖ увеличивалась по мере повышения степени тяжести морфологических повреждений СОЖ в группе НР( + ) детей. Выявлено повышение продукции ИЛ-lß и ИЛ-8 в клетках СОЖ у НР( + ) детей при инфицировании СадА( + ) штаммами H.pylori. Показатели функций ней-трофилов периферической крови значительно не различались в группах НР( + ) и НР(-) детей, что совпадало с данными, полученными в СОЖ. Уровни спонтанной продукции ИЛ-8 клетками периферической крови были повышены у НР( + ) детей. Таким образом, метод иммуногистохимии применим для изучения местной продукции цитокинов при заболеваниях ЖКТ. Продукция провоспалительных цитокинов в СОЖ может являться диагностическим маркером воспалительного процесса при инфекции H.pylori у детей.
Ключевые слова: цитокины, интерлейкин-1 бета, интерлейкин-8, Helicobacter pylori, воспаление, нейтрофилы
ВВЕДЕНИЕ
Инфекция Helicobacter pylori (H.pylori) является одной из основных причин развития хронического гастрита, атрофии слизистой оболочки желудка (СОЖ), язвы и рака желудка [l]. Хроническое воспаление при инфекции H.pylori характеризует массивная инфильтрация СОЖ лейкоцитами — нейтрофилами, лимфоцитами и макрофагами [2]. Иммунный ответ на инфекцию H.pylori протекает с преобладанием Т-хелперов l типа и ассоции-
Адрес: l97ll0 Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7 Гос.НИИ ОЧБ. E-mail: e.varyushina@yahoo.com
рован с повышенным уровнем провоспалительных цитокинов интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-с (ИФН-с) [3, 4]. Продукция интерлейкина-13 ИЛ-13, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8 и фактора некроза опухоли-а (ФНО-а) в СОЖ повышена у пациентов с инфекцией Н.ру1оп [4, 5, 6, 8]. Стимуляция макрофагов или клеток кишечного эпителия липополисахаридом (ЛПС) Н.ру1оп приводит к продукции цитокинов, в частности, ИЛ-8, за счет активации нуклеарного фактора ЫБ-кВ [7]. Изменения в продукции провоспалительных цитокинов могут отражать тяжесть поражения СОЖ. Так, при более выраженном воспалении наблюдаются более высокие локальные уровни
ИЛ-13, ИЛ-6, ИЛ-8 [ 5, 6]. Более высокой ток-сикогенностью обладают штаммы H.pylori, несущие ген, который кодирует цитотоксин-ассоциированный белок (cytotoxin-assotiated gene, CagA). При инфицировании СадА( + ) штаммами H.pylori наблюдается повышенная локальная продукция ИЛ-13 и ИЛ-8 [8].
Усиление продукции ИЛ-8 и других цито-кинов в СОЖ приводит к накоплению и активации нейтрофилов в очаге воспаления. Активность миелопероксидазы (МПО) служит маркером инфильтрации тканей лейкоцитами, главным образом, нейтрофилами. Продукция эндогенной Н2О2 нейтрофилами в очаге воспаления отражает функциональную активацию этих клеток. Активированные нейтрофилы не только обладают микроби-цидным действием, но их накопление может приводить к поражениям СОЖ. В связи с этим, следует изучить данные показатели как маркеры местного воспалительного ответа в СОЖ и оценить их значение при инфекции H.pylori.
Поражение СОЖ H.pylori происходит обычно на ранних этапах жизни человека, поэтому у детей длительность инфицирования H.pylori меньше, чем у взрослых. Иммунный и воспалительный ответ на инфекцию отличаются у детей по сравнению с взрослыми. Провоспалительные цитокины могут являться важными факторами развития и прогноза течения H.pylori-ассоциированных гастро-дуоденальных заболеваний у детей. Данные, касающиеся особенностей продукции про-воспалительных цитокинов в СОЖ, полученные у детей, немногочисленны и противоречивы [9, 10, 11]. По одним данным, у детей, так же как и у взрослых, наблюдают преобладание иммунного ответа на H.pylori с участием Т-хелперов 1 типа [9]. По данным других авторов, цитокиновый ответ в СОЖ на H.pylori у детей может быть значительно ниже по сравнению с взрослыми пациентами [11]. Поэтому необходимо дальнейшее изучение особенностей продукции этих факторов под влиянием инфекции H.pylori. Исследование местного цитокинового статуса у детей в СОЖ в более ранних работах сводилось, главным образом, к детекции мРНК в биопсийном материале или измерению белковых уровней в супер-натантах клеточных линий, гомогенатах био-птатов СОЖ или желудочном соке методом иммуноферментного анализа (ИФА). Исследование местного цитокинового статуса у детей в СОЖ с использованием иммуногистохи-
мического метода, точно отражая ситуацию in vivo, позволяет точно идентифицировать, локализовать и подсчитать клетки, продуцирующие цитокины. Картина лейкоцитарной инфильтрации СОЖ у детей, инфицированных H.pylori, также может быть изменена по сравнению с взрослыми пациентами, есть данные о снижении количества лейкоцитов в СОЖ [12]. Многообразие проявлений инфекции H.pylori у детей — от латентного носительства до формирования эрозивно-язвенных повреждений гастродуоденальной слизистой — можно объяснить различной степенью инвазии и геномной гетерогенностью штаммов НР. Однако в доступной нам литературе не удалось найти данные об изучении различий в продукции провоспалительных цитокинов в зависимости от форм заболевания и токсико-генности штамма возбудителя у детей.
В данной работе проведено иммуногисто-химическое исследование продукции ИЛ-13 и ИЛ-8 лейкоцитами собственной пластинки СОЖ у детей, инфицированных или не инфицированных H.pylori. Прослежена связь между продукцией цитокинов, наличием инфекции, формами гастродуоденальной патологии и токсикогенностью штаммов H.pylori. Также проведена оценка лейкоцитарной инфильтрации и изучение продукции эндогенной Н2О2 нейтрофилами СОЖ у этих детей, которое ранее не проводилось. Проведены исследования влияния инфекции H.pylori на системные параметры врожденного иммунитета — функции пролиморфноядерных лейкоцитов и продукцию ИЛ-8.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Общая характеристика обследования детей
Обследование детей проведено на базе консультативно-диагностического центра для детей № 2 СПбГУЗ «Городская поликлиника № 23» и дневного гастроэнтерологического стационара детской поликлинике № 77 Приморского района г. Санкт-Петербурга. В данное исследование включено 33 ребенка. Критерии включения были следующими: возраст от 7 до 16 лет, длительность анамнеза болезни более 1 года, наличие хронической гастродуоденальной патологии (клинически и по данным ФЭГДС). Пациенты исключались из обследования в случаях приема в течение последнего месяца антибиотиков, препара-
тов висмута, блокаторов протонной помпы, противопаразитарных средств, иммунокор-ригирующих препаратов, регулярный прием противовоспалительных препаратов, перенесенные в анамнезе за последние 2 месяца на острые респираторные заболевания и кишечные инфекции, наличие сопутствующих тяжелых заболеваний.
Средний возраст обследованных детей составил l2,6 ± 0,2 года. Длительность анамнеза заболевания составила в среднем 2,5 года. У всех детей проведено общеклиническое обследование: фиброгастродуоденоскопия (ФГДС) с биопсией слизистой оболочки желудка (СОЖ) из антрального отдела, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, гастроимпедансометрия, осмотры врачей-специалистов. Выраженность проявлений основных синдромов — болевого, диспеп-тического и астеновегетативного, оценивали по 3-бальной шкале. Проводили стандартные лабораторные методы исследования крови, мочи и кала. Для проведения ФЭГДС с биопсией использовали фиброскоп и набор биоп-сионных щипцов фирмы «Olympus» GIF Р-20. Оценка эндоскопической картины слизистой проводилась в соответствии с «Сиднейской системой». При обследовании дифференцировали различные формы гастродуоденальной патологии: поверхностные изменения СОЖ, эрозивно-язвенные изменения СОЖ. В ходе исследования брали 4 — 5 биоптатов СОЖ из антрального отдела. Для иммунологических и серологических исследований осуществлялось взятие венозной крови утром натощак. В качестве антикоагулянта использовали гепарин («Московский эндокринный завод», Россия).
В соответствии с целью и задачами исследования, дети были разделены на две группы. Первую группу составили дети, у которых была подтверждена инфекция H.pylori — НР( + ) группа, во вторую группу вошли дети, имеющие гастродуоденальную патологию, не связанную с инфекцией H.pylori (НР(-) группа). В работе проводили сравнение показателей системного и местного иммунного статуса между НР( + ) и НР(-) группами детей, а также проводили анализ показателей внутри группы НР( + ) детей.
Диагностика инфекции H.pylori
Диагностику H.pylori проводили с использованием комплекса инв
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.