РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2015, том 9(18), № 1, с. 118-120
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ДВУХЛОКУСНЫХ ГАПЛОТИПОВ ГЕНА TNFa У БОЛЬНЫХ СИНДРОМОМ РАЗДРАЖЕННОГО КИШЕЧНИКА РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
© 2015 г. Д.С. Сташкевич*, А.Л. Бурмистрова*, Е.Л. Иванова**, А.С. Сарсенбаева**
*ФГБОУ ВПО «Челябинский государственный университет», Челябинск, ул. Братьев Кашириных, 129;
**ГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения РФ», Челябинск, ул. Воровского, 64, Россия
Поступила: 12.10.2014. Принята: 15.01.2015
В работе представлены данные по распределению частот встречаемости двухлокусных гаплотипов ТЫРа у больных СРК. Выявлены 2 гаплотипа с разнонаправленным действием: гаплотип ТЫРа-308*а-863*с повышает вероятность развития синдрома раздраженного кишечника (СРК), а гаплотип ТЫРа-308*д-863*а может выступать протектором развития данной патологии.
Ключевые слова: полиморфизм, ген ТЫРа, синдром раздраженного кишечника
ВВЕДЕНИЕ
Синдром раздраженного кишечника (СРК) в настоящее время рассматривается как взаимодействие важных биологических и психосоциальных факторов. В зависимости от особенностей человека в этиопатогенез СРК в различной степени вовлечены измененная моторика, висцеральная гипералгезия, дестабилизация сигналов взаимодействий в регуляторной оси «головной мозг — кишка», вегетативные и гормональные сдвиги, генетические факторы и факторы окружающей среды, постинфекционные последствия и психосоциальные расстройства [1]. В норме многие органы, в том числе слизистая оболочка кишечника, находятся в состоянии «контролируемого» воспаления, регулируются сложным балансом воспалительных и противовоспалительных цитокинов. При нарушении баланса соотношений развивается состояние хронического воспаления. Среди воспалительных цитокинов важнейшее значение имеют ТЫРа, ТЬ-1, ТЬ-6, ТЬ-8 и ТЬ-12 [3].
Адрес: 454021, Челябинск, ул. Братьев Кашириных, 129, Челябинский государственный университет, биологический факультет, Сташкевич Дарье Сергеевне. E-mail: stashkevich_dary@mail.ru
Ген TNFa располагается на 6 хромосоме и является одним из самых полиморфных генов цитокинов со сложной транскрипционной регуляцией [6]. Его промоторно-энхансерная область содержит от 9 до 13 полиморфных сайтов типа SNPs, наиболее известными среди которых являются транзиции G/A в точках
— 376, —308, — 238, —163; транзиция T/C и C/T в сайтах —1031, —857, и трансверсия C/A —863. Кроме того, транскрибируемая часть гена содержит полиморфизмы типа SNP ( + 70, +467, +488, +851, +943, +1304) и микросателлиты. Общепринятой является точка зрения, что замены в точках —1031, —863,
— 857, —376 —308 повышают экспрессию, а замена в —238, наоборот, снижает продукцию TNFa [5, 6].
В связи с тем, что данный ген локализован в третьем классе генов главного комплекса гистосовместимости между локусами HLA-B и HLA-DR, то вероятно, возникает неравновесное сцепление между полиморфными сайтами TNFa и генами HLA II класса, ассоциированными с аутоиммунными патологиями, это находит отражение в формировании анцест-рального гаплотипа, в частности HLA A*01 — Cw0701 — B*0801 — DRB1*0301 — DQB1*0201, который ассоциирован с высокой продукци-
Гаплотипы TNFa у больных СРК
119
ей TNFa и развитием аутоиммунных заболеваний [2].
Полиморфизмы в гене TNFa активно исследуются в качестве маркеров предрасположенности и вариабельности течения различных мультифакторных заболеваний. Согласно анализу литературы, при анализе вклада полиморфизмов гена TNFa в развитие СРК, внимание уделяется только SNP в точке — 308G/A, как например, в работе Patrick P.J.van der Veek et al. В ходе исследования выявлено увеличение числа носителей высокопродуктивного аллеля — 308*А TNFa среди больных СРК голландской популяции. Кроме того, был установлен маркер варианта «СРК с диареей» — комбинация выскопро-дуктивного генотипа —308 TNFa и низкопродуктивного генотипа —1082 IL-10 [7, 8], однако нет данных об исследовании ассоциации других полиморфных сайтов этого гена, в частности — 863С/А, его гаплотипов и СРК.
Цель: оценить распределение частот встречаемости двухлокусных гаплотипов SNPs - 863C/A, - 308 G/A гена TNFa у больных синдромом раздраженного кишечника русской популяции Челябинской области.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследуемые выборки: 81 больной СРК и 107 практически здоровых лиц русской популяции. Пациенты находились на лечении в гастроэнтерологическом отделении Дорожная клиническая больница МПС на станции Челябинск в период с 2001 по 2007 годы. Для диагностики заболевания использовались Римские критерии III (2007). Средний возраст начала заболевания составил 32,8 ± 1,4 лет, и длительность заболевания в среднем от 3 до 10 лет у половины пациентов.
Набор больных проводился вне зависимости от стадии, клинического варианта течения заболевания и возраста пациентов. Обследования пациентов проводились по утвержденным Медико-экономическим стандартам Министерства Здравоохранения № от 1998 г. В группу сравнения были включены потенциальные доноры костного мозга ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови (средний возраст составил 34,6 ± 0,75 лет). Этническая принадлежность исследуемых лиц определялась согласно рекомендациям Международного Уоркшопа (1980 г., Лос-Анджелес, США).
Определение SNPs в точках —308 и —863 гена TNFa проводилось с помощью полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, который состоял из следующих этапов: ПЦР-амплификация, инкубация ампликонов с эндонуклеазами рестрикции NcoI при 37 °С, TaiI при 65 °С, соответственно, детекция результатов — электрофорез в 8% ПААГе.
Статистическая обработка: расчет частот двулокусных гаплотипов TNFa ( — 308) — TNFa ( — 863) с использованием ЕМ-алгорит-ма и расчет параметров сцепления с помощью программы Arlequin 3.1 [9]. Достоверность различий определялась с помощью точного двухстороннего критерия Фишера, критерия X2 с поправкой Йетса, отношения шансов (OR) с расчетом 95% доверительного интервала (CI).
Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р < 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 < р < 0,10) обсуждали тенденцию к различиям.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Ранее были показаны незначительные изменения в частотах встречаемости генотипов C/A —863 TNFa [4] у больных СРК, не имеющие прогностической значимости для развития предрасположенности/устойчивости к данной патологии. Данная работа является продолжением исследования, в ходе которой установлены следующие результаты, представленные в табл.
Как видно из табл., группа больных СРК характеризовалась повышенной частотой гап-лотипа, содержащего редкий аллель —308*а, ассоциированный с повышенной продукцией TNFa, и частый —863*с, связанный со средним уровнем продукции. Носительство данного гаплотипа повышает вероятность развития СРК в 2 раза (OR = 2,03 95% CI 1,09 ч- 3,75).
В то же время установлено наличие протекторного гаплотипа — 308*g — 863*a (8,02% против 15%, OR = 0,49 95% CI 0,25 ч- 0,98). Данный гаплотип содержит аллель «нормальной продукции» —308*g и аллель —863*а, повышающий транскрипционную активность промоторной области гена TNFa.
Таким образом, в составе гаплотипов находятся высокопродуктивные аллели ( — 308*а, — 863*а), однако их действие на формирование предрасположенности/устойчивости разнонаправлено. Вероятнее всего, данные точковые полиморфизмы имеют различную
120
Д.С. Сташкевич и др.
Таблица 1. Распределение частот двухлокусных гаплотипов у больных СРК и практически здоровых
лиц русской популяции Челябинской области
Гаплотипы TNFa Группа СРК, n = = 162 Группа контроля, n = 214 достоверность
Абс. значение % Станд. ошибка Абс. значение % Станд. ошибка х2 р
-308*g 119 73,5 0,035 160 74,8 0,03 0,08 0,77
-863*c -308*a 28 17,3 0,03 20 9,35 0,02 5,25 0,02
-863*c -308*g 13 8,02 0,21 32 15 0,025 4,22 0,04
-863*a -308*a 2 1,23 0,009 2 0,935 0,007 0,08 0,8
-863*a
силу сцепления с регуляторными факторами, влияющими на экспрессию ТЫБа.
В нашем исследовании не удалось установить ассоциации между носительством аллелей и генотипов БЫР —308 С/Л ТЫБа и развитием СРК [4], можно предположить, что в формировании устойчивости/предрасположенности к СРК данный полиморфизм самостоятельного значения не имеет. Исходя из наших ранее полученных данных [4], ведущее значение в формировании предрасположенности к СРК имеет носительство определенных аллелей БЫР -863 ТЫБа в полученных гаплотипах.
Выводы.
Выявлены 2 гаплотипа с разнонаправленным действием: гаплотип ТЫБа — 308*а — 863*с повышает вероятность развития СРК, а гаплотип ТЫБа —308*д —863*а может выступать протектором развития данной патологии.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Климушева Т.А. РЖГИ 4, 2008, 82-86.
2. Коненков В.И., Голованова О.В., Дортман В.В. Иммунология 2008, 1, 6-10.
3. Родионова О.Н., Бабаева А.Р. Цитокины и воспаление 2011, 10, 3, 45 - 48.
4. Сташкевич Д.С., Бурмистрова А.Л., Иванова Е.Л. Вестник Карагандинского университета. Серия: Биология. Медицина. География 2013, 3, 78 - 83.
5. Asifa G.Z. et al. The Scientific World Journal 2013, Article ID 203492, 5pages http://dx.doi. org/10.1155/2013/203492.
6. Hajeer A.H., Hutchinson I.V. Microscopy research and technique 2000, 50, 216-228.
7. Saito Y.A., Talley N.J. American journal of Gastroenterology 2008, 103, 2100 - 2104.
8. Van der Veek P.P.J. et al. American Journal of Gastroenterology 2005, 100, 2510 - 2516.
9. URL: http:cmpg.unibe.ch/software/arlequin3.
DISTRIBUTION OF TWO-LOCUS TNFa GENE HAPLOTYPES IN PATIENTS WITH IRRITABLE BOWEL SYNDROME RUSSIAN POPULATION OF CHELYABINSK REGION
D.S. Stashkevich*, A.L. Burmistrova*, E.L. Ivanova**, A.S. Sarsenbaeva**
*Chelyabinsk State University, Chelyabinsk, Russia;
** South Ural State Medical University, Ministry of Health, Chelyabinsk, Russia
The data of the distribution of frequencies of two-locus TNFa haplotypes in patients with irritable bowel syndrome (IBS) are shown. Two haplotypes with different effects were established: haplotype TNFa-308* a-863* c increased the likelihood of IBS, and haplotype TNFa-308* g-8
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.