БИОЛОГИЯ МОРЯ, 2015, том 41, № 3, с. 211-214
УДК 594.35 ЗООЛОГИЯ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ
RUNCINIDA VALENTINAE CHERNYsHEV, 2006 (OPISTHOBRANCHIA: RUNCINACEA) - НОВЫЙ ДЛЯ ЯПОНСКОГО МОРЯ ВИД ЗАДНЕЖАБЕРНЫХ МОЛЛЮСКОВ1
© 2015 г. А. Ю. Чичвархин1, О. В. Чичвархина1, А. В. Чернышев1,2
'Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского ДВО РАН, Владивосток 690041;
2Дальневосточный федеральный университет, Владивосток 690600 e-mail: anton.chichvarkhin@gmail.com
Статья принята к печати 05.02.2015 г.
Вблизи б. Рудная и в зал. Опричник (Японское море) обнаружен заднежаберный моллюск Runcinida valentinae, ранее известный по двум находкам у о-ва Итуруп (Курильские острова). Приведены новые данные по строению радулы у этого вида. Впервые для рода Runcinida получены фрагменты генов 28S рРНК и COI. Их анализ показал видовую самостоятельность R. valentinae, который морфологически близок R. marisae Chemyshev, 1998 из зал. Петра Великого, а также подтвердил большое значение деталей окраски тела в видовой систематике рунцинид.
Ключевые слова: Runcinaceae, Runcinida, 28S рРНК, COI, />-дистанции.
Runcinida valentinae Chernyshev, 2006 (Opisthobranchia: Runcinacea), a new opisthobranch species for the Sea of Japan. A. Yu. Chichvarkhin1, O. V. Chichvarkhina1, A. V. Chernyshev1- 2 ('A.V. Zhirmunsky Institute of Marine Biology, Far Eastern Branch, Russian Academy of Sciences, Vladivostok 690041; 2Far Eastern Federal University, Vladivostok 690950)
Runcinida valentinae, an opisthobranch mollusk previously known from waters off Iturup Island (Kuril Islands), has been found off Rudnaya Bay and in Oprichnik Bay, Sea of Japan. New data on radula morphology in this species are presented. Partial sequences of nuclear 28S rRNA and mitochondrial COI genes of the genus Runcinida have been obtained for the first time. Their analysis shows the distinctiveness of R. valentinae, which is morphologically close to R. marisae Chernyshev, 1998 from Peter the Great Bay. The strong nucleotide differences between these species confirm importance of body coloration patterns as species-specific traits in runcinid systematics. (Biologiya Morya, 2015, vol. 41, no. 3, pp. 211-214).
Keywords: Runcinaceae, Runcinida, 28S rRNA, COI,^-distances.
В последние 10 лет в российских водах Японского моря найдено несколько новых для нашей фауны видов заднежаберных моллюсков (Чернышев, Чабан, 2005, 2010; Чернышев и др., 2006; Чернышев, 2008). Настоящее сообщение посвящено находке нового для Японского моря вида из отряда Runcinacea (= Runcinida) - небольшой группы, состоящей более чем из 50 видов, обитающих главным образом в тропических и субтропических морях. До сих пор единственной рун-цинидой, найденной в северо-западной части Японского моря, была Runcinida marisae Chernyshev, 1998, описанная из зал. Петра Великого (Чернышев, 1998). В 2012 г. при сборе моллюсков в прибрежных водах у южной оконечности б. Рудная (Приморский край, около пос. Рудная Пристань) мы обнаружили популяцию Runcinida valentinae Chernyshev, 2006 - вида, ранее известного только с литорали о-ва Итуруп (Чернышев, 2006). Поскольку R. marisae и R. valentinae являются морфологически очень близкими видами, которые различаются небольшими деталями окраски тела, нельзя было исключить, что R. valentinae - это всего лишь островная форма R. marisae. Для подтверждения видовой самостоятельности R. valentinae предпринято сравнение фрагментов генов 28S рРНК и COI обоих видов.
Материал и методика. Экземпляры Runcinida valentinae были собраны в б. Рудная и ее окрестностях в 2012-2014 г. (рис. 1). Живых моллюсков фотографировали фотокамерой Nikon D300 с объективом Nikon Nikkor 60/f2.8. После предварительного напыления платиной радулу моллюска изучали в сканирующем электронном микроскопе (СЭМ) EVO 40 (Zeiss). Для выделения ДНК использовали 8 экз. R. valentinae из б. Рудная, 1 экз. с о-ва Итуруп (охотоморское прибрежье, б. Консервная, сборщик А.В. Чернышев, 2011 г.), 1 экз. R. marisae из зал. Восток (сборщик А.В. Чернышев, 2011 г.) и 1 экз. Metaruncina nhatrangensis Chernyshev, 2005 из зал. Ванфонг, Вьетнам (сборщик А.В. Чернышев, 2010 г.). Геномную ДНК выделяли путем лизиса тканей протеиназой К и дальнейшей очисткой на спин-колонках набором DNeasy (Qiagen, Valencia, USA) согласно указаниям производителя. Амплификацию "фолмеровского" фрагмента гена первой субъединицы ци-тохромоксидазы (COI) проводили при помощи праймеров LC01490 и HCO2198 (Folmer et al., 1994). Для амплификации фрагмента гена 28S рРНК использовали пары праймеров С1/ С2г и С2/ LSU-rev1 (Bellocq et al., 2001; Sonnenberg et al., 2007), где C2r является обратно-комплементарной последовательностью С2. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили в 20 мкл реакционной смеси, состоящей из 50 мкМ KCl, 10 мкМ Tris, 2 мкМ MgCl2, 0.2 мкМ дНТФ, 0.2 мкМ каждого из праймеров, 1 ед. Taq-полимеразы и 1 мкл матрицы ДНК. Условия реакции были следующими: первичная денатурация
1 Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (проект № 14-50-00034).
Рис. 1. Места обнаружения Runcinida valentinae (кружки) и R. marisae (треугольники). В левом верхнем углу карта б. Рудная и ее окрестностей.
при 95°С в течение 3 мин, затем 30 циклов по схеме: денатурация при 94°С - 30 с, отжиг при 50°С - 30 с, элонгация при 68-72°C - 1 мин; заключительная элонгация при 72°С - 7 мин. В планшет для ПЦР GeneAmp 96-well PCR reaction plate (Applied Biosystems, № 4306737) помещали 3 мкл продукта и очищали путем преципитации, добавляя 15 мкл 96% этанола, инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре и центрифугировали при 1110 g и 4°С в течение 1 ч; затем планшет переворачивали вверх дном, сливали супернатант и центрифугировали в положении "вверх дном" при 100 g в течение 1 мин. Осадок дважды промывали в 30 мкл 70% этанола при комнатной температуре, центрифугировали при 1110 g и 4°С в течение 1 ч, затем 1 мин при 100 g, установив планшет вверх дном. В завершение осадок высушивали при 50°С в течение 5 мин. Очищенные и высушенные продукты ПЦР секвениро-вали в том же планшете согласно оригинальному протоколу BigDye 3.1, подразумевая, что объем образца ДНК равен нулю, т.е. заменив его водой. Продукты секвенирующей реакции анализировали путем электрофореза при помощи генетического анализатора ABI3130. Последовательности выверяли и редактировали вручную, используя программное обеспечение BioEdit (Hall, 1999). Р-дистанции рассчитывали при помощи программного пакета MEGA6 (Tamura et al., 2013), при этом из анализа исключали неизвестные позиции, а позиции с гэпами в фрагменте гена 28S рРНК исключали при каждом из попарных сравнений. Полученные сиквенсы депонировали в GenBank/ NCBI (табл. 1).
Результаты и обсуждение. Длина тела изученных особей Runcinida valentinae варьировала от 1.5 до 6.0 мм. Внешняя морфология и окраска полностью соответствовали морфологии и окраске особей, найденных у о-ва Итуруп (Чернышев, 2006). Характерная особенность этого вида - оранжевое пятно в передней трети темно-коричневого нотума; пятно чаще неправильной треугольной или пятиугольной формы, реже - ромби-
ческое, вытянутое в поперечном направлении (рис. 2А, Б); у Runcinida marisae такого пятна нет (рис. 2Д). Ранее радула у R. valentinae была изучена только на световом уровне. Исследования с помощью СЭМ позволили существенно уточнить первоописание, показав, что рахи-дальный зуб рассечен по режущему краю на две лопасти, каждая из которых с 16-18 заостренными зубчиками; иногда имеется слабо выраженный центральный зубчик (рис. 2В, Г). Латеральные зубы гладкие. В мужском ко-пулятивном аппарате семенной "пузырек" немного расширен и заполнен зрелыми сперматозоидами.
В районе б. Рудная R. valentinae обнаружена только на банке Сенькина Шапка, где он обитает на глубинах 15-20 м. Наиболее плотные скопления (до 24 экз/м2) отмечены на глубине 18 м на крупновалунном с примесью гальки грунте, фрагментарно покрытом тонким слоем песка и ила. За пределами банки Сенькина Шапка по одной особи R. valentinae обнаружено на скальном грунте близ южной оконечности зал. Опричник на глу-
Таблица 1. Список образцов исследованных Runcinidae и номера последовательностей генов COI и 28S рРНК из базы данных GenBank/NCBI (новые последовательности выделены жирным шрифтом)
Вид COI 28S
Runcinida valentinae, б. Рудная KP313665 KP313661
R. valentinae, о-в Итуруп KP313666 KP313662
R. marisae, зал. Восток KP313667 KP313663
Runcina africana DQ974680 DQ927240
R. coronata AY345018 Нет данных
Metaruncina nhatrangiensis, KP313668 KP313664
Вьетнам
RUNCINIDA VALENTINAE
213
Рис. 2. Runcinida valentinae из б. Рудная (А-Г) и R. marisae из зал. Петра Великого (Д). А - вид сверху (длина тела 5 мм); Б - в естественной среде обитания, глубина 19 м (длина тела 5 мм); В, Г - радула (СЭМ); Д - вид сверху (длина тела 4 мм). Масштаб: В - 100 мкм, Г - 2 мкм.
бине 16 м и в семи километрах к югу от б. Рудная (мыс Черные Скалы) на глубине 25 м. В местах скопления R. valentinae отмечены форониды и многочисленные особи мшанки Microporina articulata (Fabricius, 1821), однако R. valentinae на них не встречался, несмотря на то, что колонии этой мшанки часто используются как укрытия другими заднежаберными: Flabellina athadona (Bergh, 1875), F. cf. nobilis (VerriU, 1880) и Janolus fuscus O'Donoghue, 1924. Не отмечен R. valentinae и на многочисленных красных водорослях.
Таким образом, в исследованном районе моллюск R. valentinae обитает на глубинах, подверженных незначительному волновому воздействию, в то время как в типовом местонахождении (о-в Итуруп, б. Консервная) он дважды (в 2005 и 2011 гг.) был найден в нижнем горизонте литорали среди известковой водоросли Bossiella sp. (Чернышев, 2006; неопубликованные данные). Среди
известковых водорослей семейства Corallinaceae в среднем и нижнем горизонтах литорали обитает и R. marisae (Чернышев, 1998). Чем питаются оба вида рунцинид (как и рунциниды вообще), пока неясно. В литературе есть указание, что объектом питания Metaruncina setoensis (Baba, 1954) служат нитчатые красные водоросли (без уточнения их таксон
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.