Цизина Е.А., соискатель Ульяновского государственного педагогического университета им. И.Н. Ульянова
СОДЕРЖАНИЕ CD20+-ЛИМФОЦИТОВ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ЖЕНЩИН С БАКТЕРИАЛЬНЫМ ВАГИНОЗОМ
Cодержание В-лимфоцитов (СD20+-клетки), уровень ^ A, ^ M, ^ G определяли в периферической крови у женщин с бактериальным вагинозом. Результаты выявили общую для всех обследованных тенденцию к повышению трансформации лимфоцитов в бластные формы у женщин с нарушениями вагинального микробиоценоза. Изучение аффинности Е-рецепторов Т-лимфоцитов показало, что количество всех фракций Еа-РОК снижено, однако статистически достоверные различия выявлены лишь для средне- и высокоаффинных Еа-РОК, что также свидетельствует о снижении профессиональной активности лимфоцитов.
Ключевые слова: бактериальный вагиноз, лимфоцит, аффинность, гуморальное звено, уровень ^.
IN PERIFERIC BLOOD OF WOMEN SUFFERING FROM BACTERIAL VAGINOSIS
The content of B-lymphocytes (СD20+-cells), the level of Ig A, Ig M, Ig G detected in peripheral blood of women with bacterial vaginosis. The results revealed a total for all of the surveyed tended to increase the transformation of lymphocytes in the blast form in women with vaginal disorders microbiocenosis. The study of the affinity of E-receptors of T-lymphocytes showed that the number of all fractions of the Ea-ROCK reduced, however, a statistically significant differences are revealed only for medium- and high affinity Ea-ROCK, which also indicates a decrease in professional activity of lymphocytes.
Keywords: bacterial vaginosis, lymphocyte, affinity, humoral link, the level of Ig.
Известно, что Т-лимфоциты являются основными клетками-эффекторами и регуляторами иммунного ответа. Они участвуют в поддержании хронического воспаления в стенке сосудов, совместно с эндотелиальными клетками запускают цитокиновый каскад, являясь как продуцентами цитокинов, так и их мишенями [1, 2].
Обследовано 132 женщины с диагнозом бактериальным вагинозом (БВ) 40 практически здоровых женщин, репрезентативных по возрасту. У больных исследовали мембранные маркеры субпопуляций лимфоцитов (CD20+ лимфоциты) с помощью моноклональных антилим-фоцитарных антител к дифференцировочным антигенам поверхности клеток в реакции непрямой иммунофлюоресценции в модификации на поли-Д-лизине («Sigma», Германия). Использовали диагностикумы института иммунологии МЗ (Россия) ЛТ-1 (пан-Т-клеточная популяция функционально зрелых Т-лимфоцитов, экспрессирующих мембранассоциированные детерминанты СD-3 антигенов), ЛТ-4 (субпопуляции хелперно/индукторных Т-клеток, экс-прессирующих антигены СD-4) и ЛТ-8 (субпопуляции супрессорно/цитотоксических Т-клеток, экспрессирующих антигены СD-8). Проводили исследование функциональной активности иммуноцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов in vitro по А.Г. Артемо-вой [3], учет проводили с помощью шкалы окуляра-микрометра. Величину индекса миграции (ИМ) определяли по формуле:
Им _ уровень миграции в опыте
уровень миграции в контроле Процент миграции_ ИМ-100%
Исследование уровня циркулирующих иммунных комплексов проводили по методу Ю.А. Гриневич [4], основанному на осаждении ЦИК в растворе полиэтиленгликоля (ПЭГ) с молекулярной массой 6000. Раствор ПЭГ осаждает иммунные комплексы и изменяет при
CONTENT OF CD20+-LYMPHOCYTES AND IMMUNOGLOBULINS
108
этом плотность среды, что регистрируется фотоколориметрическим методом. Результаты выражали в условных единицах оптической плотности по формуле:
ЦИК, усл. ед./100 мл = (ОДопыт - ОДконтроль ) х 100.
Содержание лейкоцитов и лейкограмму определяли общепринятым методом с использованием клавишного механического счетчика лейкоцитарной крови СЛ-1 (ЗАО «ЛОиП», г. Санкт-Петербург, 1999). Общее число лейкоцитов определяли меланжерным способом с последующим подсчетом клеток в камере Горяева. Для исследования лейкоцитарной формулы применяли способ окраски мазков периферической крови по методу Романовского-Гимзы. Количество лейкоцитов вычисляли по формуле:
^ _ а•250•20 _ 100 ,
где Х - число лейкоцитов в 1 мкл крови; а - число лейкоцитов в 100 больших квадратах камеры Горяева.
По способности лимфоцитов под влиянием неспецифической стимуляции митогеном переходить в лимфобласты оценивают функциональную активность всего пула Т-лимфоцитов [5].
Для оценки цитопатогенного действия лимфоцитов использовали первично трипсинизи-рованную культуру ткани [6]. Для сравнения полученных результатов ЦП действия лимфоцитов вычисляли цитотоксический индекс (ЦИ):
тттт а
ЦИ _ —, где в
а - процент жизнеспособных клеток после инкубации с лимфоцитами;
в - процент неповрежденных клеток в контрольных пробах.
Для оценки показателей гуморального звена иммунной системы у женщин с бактериальным вагинозом определяли содержание В-лимфоцитов (СБ20+-клетки), а также уровень ]£ А, ^ М, ]£ в. Результаты исследования содержания лимфоцитов с маркерами СБ20 периферической крови больных с бактериальным вагинозом представлены в таблице 1.
Таблица 1
Содержание СБ20+- лимфоцитов и сывороточных иммуноглобулинов в крови у обследованных женщин.
Обследованные женщины:
Показатели Здоровые с БВ
СБ20+-лимфоциты (109/л) 0,3 ±0,1 0,25±0,07
18 А (г/л) 2,21 ±0,08 1,41±0,05*
^ М (г/л) 1,9±0,4 1,7±0,2
18 О (г/л) 13±1 8,3±0,8*
Примечание: * - показатель достоверности между женщинами с БВ и здоровыми (р<0,05)
Из таблицы видно, что абсолютное количество СБ20-лимфоцитов у женщин с БВ было незначительно снижено по отношению к здоровым женщинам и составило 0,25±0,07-109/л (р>0,05) (рис. 1). Уровень сывороточных ]£ М у этой группы обследованных недостоверно изменялось по отношению к группе сравнения (р>0,05). У женщин с БВ наблюдалось также
109
выраженное снижение содержания - до 1,27±0,05 г/л при 2,21±0,08 г/л (р<0,05) в группе сравнения (рис. 2). Следовательно, уровень ^ в был снижен в 1,6 раза (р<0,05), ^ А -в 1,7 раза (р<0,05).
Здоровые
0,22 0,24 0,26 0,28
Рис. 1. Изменение количества СП20-лимфоцитов у женщин с БВ
Данные показатели свидетельствуют о снижении специфического иммунного ответа и местного иммунитета на слизистых оболочках, что может способствовать развитию и поддержанию хронической урогенитальной инфекции.
г/л
14т/ 12 10 8 6 4 2 0
Бактериальный вагиноз
□ 18 А
— и^ м
Здоровые
в
* — достоверность различий со здоровыми (р<0,05) Рис. 2. Изменение содержания иммуноглобулинов у обследованных
Наибольшим изменениям у обследованных женщин подвергался уровень ]£ Е. Из представленных данных на рисунке 3 видно, что при бактериальном вагинозе наблюдалось увеличение уровня ^ Е до 194±37 МЕ/мл (в контроле - 85±11 МЕ/л; р<0,01).
110
МЕ/мл
, □ С бактериальным
ттттттттттт
85
вагинозом 94.38*
ЕЗ Здоровые
0 50 100 150 200
* — достоверность различий со здоровыми (р<0,05) Рис. 3. Показатели иммуноглобулинов Е у обследованных пациенток
Связывание антигена и антитела с образованием иммунного комплекса является одним из механизмов, направленных на элиминацию антигена из организма. Циркулирующие иммунные комплексы способны присоединять компоненты комплемента и образовывать комплексы, которые, оседая в тканях, вызывают повреждения различной степени тяжести вследствие активации системы комплемента [2]. Вместе с тем они могут отражать наличие антигенной стимуляции, эндотоксикоза и напряжения гуморального иммунитета [7].
Определение уровня ЦИК у женщин с БВ не выявило его изменения по сравнению со здоровыми - 95±15 Ед., 96±7 Ед, соответственно (р>0,05) (рис. 4).
Можно полагать, что у обследованных не только снижен синтез специфических антител, но и нарушены такие их свойства как авидность. В результате не происходит связывания патогенов и их клиренс из организма, что приводит к хронизации инфекционного процесса.
Е
\ / \
/ & /
/ Ш / \
/ % V/ /
Бактериальный вагиноз
Здоровые
Рис. 4. Изменения концентрации ЦИК у женщин с бактериальным вагинозом
Обращает на себя внимание факт изменения активности лимфоцитов, выявляемый в РТМЛ при увеличении интенсивности роста выделенных культур. Достоверное повышение показателей РТМЛ (значительное усиление торможения миграции лейкоцитов) обнаружены только при умеренном и обильном росте выделенных микроорганизмов. Следовательно, показано изменение активности лимфоцитов, выявляемое в РТМЛ при увеличении интенсивности роста вагинальной микрофлоры.
111
Результаты исследований РБТЛ выявили общую для всех обследованных тенденцию к повышению трансформации лимфоцитов в бластные формы у женщин с нарушениями вагинального микробиоценоза.
Изучение аффинности Е-рецепторов Т-лимфоцитов показало, что количество всех фракций Еа-РОК было снижено, однако статистически достоверным оно было лишь у средне-и высокоаффинных Еа-РОК, что также свидетельствует о снижении профессиональной активности лимфоцитов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Сепиашвили Р.И. Естественные киллеры и биогенные амины: паракринная регуляция в иммунной системе/ Р.И. Сепиашвили, И.П. Баламасова // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2005. - № 91. - С. 927-941.
2. Хаитов Р.М. Физиология иммунной системы / Р.М. Хаитов // М.: ВИНИТИ РАН. -2001. - 224 с.
3. Артемова А.Г. Реакция торможения миграции лейкоцитов в капиллярах // В справочнике «Медицинские лабораторные технологии» / Под ред. А.И. Карпищенко // СПб.: 1999. -Т. 2. - С. 302-303.
4. Гриневич Ю.А. Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови // В справочнике «Медицинские лабораторные технологии» / Под ред. А.И. Карпищенко. - СПб.: 1999. - Т. 2. - С. 307.
5. Чернушенко Е. Ф. Реакция бластной трансформации лимфоцитов / В справочнике «Медицинские лабораторные технологии» / Под ред. А.И. Карпищенко // СПб.: 1999. - Т. 2. - С. 303.
6. Федосеева В.Н. Руководство по аллергологии и клинической иммунологии // Львов. -1997. - 303 с.
7. Мелкова И.Б. Иммунологические особенности течения острой, подострой и хронической форм хламидийной инфекции / И.Б. Мелкова, Л.Ф. Цернецова, А.Э. Кошуба // Медицинская иммунология. - 2006. - Т. 6. - № 3-5. - С. 3 17-319.
112
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.