НЕЙРОХИМИЯ, 2014, том 31, № 2, с. 147-153
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
УДК 615.21+612.014:616.89-008.441.13-092.9
СООТНОШЕНИЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ СЕЛАНКА И УРОВНЯ СЕРОТОНИНА В ОТДЕЛЬНЫХ СТРУКТУРАХ МОЗГА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ АЛКОГОЛЬНОЙ АБСТИНЕНЦИИ У КРЫС
© 2014 г. А. В. Надорова*, Л. Г. Колик, П. М. Клодт, В. Б. Наркевич, П. Л. Наплёкова, М. М. Козловская, В. С. Кудрин
ФГБУ "НИИфармакологии имени В.В. Закусова"РАМН
Изучено влияние пептидного анксиолитика селанка (0.3 мг/кг) на поведенческие параметры синдрома отмены алкоголя в опытах in vivo и нейрохимические показатели серотонинергической системы в структурах мозга в опытах ex vivo у беспородных крыс со сформировавшимся предпочтением к 10% раствору этанола. Установлено, что селанк при однократном введении купирует тревожную реакцию в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт" через 48 ч после отмены этанола, увеличивая время нахождения в открытых рукавах и число выходов в открытые рукава. С использованием метода ВЭЖХ показано, что селанк препятствует повышению уровня серотонина во фронтальной коре, гипоталамусе и миндалине, что может быть связано с уменьшением синтеза серотонина. Полученные данные свидетельствуют об анксиолитической активности селанка в условиях алкогольной абстиненции, что позволяет расширить сферу его использования в клинической практике.
Ключевые слова: селанк, синдром отмены этанола, серотонин, тревожность, крысы.
Б01: 10.7868/81027813314020083
ВВЕДЕНИЕ
Известно, что алкогольная депривация в условиях хронического потребления этанола вызывает повышенную тревогу как у человека [1], так и у животных [2], однако, механизмы, определяющие формирование тревожного поведения, остаются неизученными до настоящего времени.
Бензодиазепиновые транквилизаторы на протяжении многих десятилетий успешно используются для купирования проявлений тревоги при алкогольной абстиненции, однако их хроническое применение приводит к развитию толерантности и лекарственной зависимости, что делает актуальным поиск эффективных и безопасных препаратов среди обратных агонистов бензоди-азепиновых рецепторов [3]. Использование соединений, воздействующих на М-метил-Э-ас-партат (ММЭЛ) рецепторы сопряжено с риском развития нейротоксических эффектов и малой эффективностью при тревожной реакции, индуцированной отменой этанола [4]. Представлялись перспективными результаты доклинических исследований антагониста каннабиноидных рецепторов (СВ1) римонабанта, снижающего выраженность анксиогенной реакции и восстанавливающего нарушенный нейрохимический баланс
*Адресат для корреспонденции: 125315, Москва, Балтийская ул., 8, тел. (495) 601-22-38, e-mail: av-nadorova@mail.ru.
при отмене этанола у крыс [5], а также подавляющего влечение и ослабляющего подкрепляющие свойства этанола [6]. Однако нежелательное побочное действие римонабанта на ЦНС стало причиной прекращения его дальнейшего изучения в качестве препарата для лечения алкогольной зависимости [6]. Кроме того, многочисленные работы указывают на вовлеченность серотонинер-гических механизмов в формировании индуцированной отменой этанола тревоги [2, 7, 8].
Отечественный препарат селанк, синтетический аналог тафтсина, обладает анксиолитическим эффектом и по спектру психотропной активности принципиально отличается от бензодиазепиновых транквилизаторов отсутствием седативного и мио-релаксантного эффектов. В клинических исследованиях отмечены положительные результаты при назначении селанка больным со сравнительно простыми по структуре тревожными и тревожно-астеническими состояниями [9]. Предполагается, что механизм центрального действия селанка может быть связан с изменением функционального состояния серотонинергической системы [10, 11]. В опытах ex vivo при предварительном системном введении селанк снижает активность серотони-нергической системы в отдельных структурах мозга в условиях повышения уровня и метаболизма серотонина, вызванного 5-ОТФ [12]. Однако комплексного исследования активности селанка на
147
4*
моделях экспериментального хронического алкоголизма ранее не проводилось.
Целью настоящей работы является изучение влияния селанка на поведенческие показатели и нейрохимические параметры серотонинергиче-ской системы, на модели алкогольной деприва-ции у крыс со сформировавшимся предпочтением этанола.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объекты. Опыты выполнены на беспородных крысах-самцах (питомник РАМН "Столбовая") в возрасте 8-ми месяцев со средней массой тела 450—500 г (n = 65). Животных содержали в индивидуальных клетках в стандартных условиях вивария ФГБУ "НИИ фармакологии имени В.В. Закусова" РАМН (температура воздуха 21— 23°C, относительная влажность воздуха 40—60%) при регулируемом 12 ч/12 ч световом режиме (свет/темнота) с предоставлением брикетированного корма ad libitum в соответствии с приказом МЗ РФ № 267 от 09.06.2003 "Об учреждении правил лабораторной практики".
Для формирования алкогольной зависимости использовали стандартную методику принудительной алкоголизации, основанную на использовании в качестве единственного источника жидкости 10% раствора этанола [13], сочетающийся с тремя периодами алкогольной деприва-ции (через 16-ю, 20-ю и 24-ю недели после начала эксперимента) [14]. Раз в неделю оценивали динамику изменения массы тела животных и объем потребляемого этанола (в г/кг). Для поведенческих и нейрохимических экспериментов отбирались крысы со сформировавшейся устойчивой алкогольной мотивацией (более 4.5 г/кг в пересчете на этанол), степень развития которой оценивали по показателю среднесуточного потребления этанола в условиях свободного выбора между 10% этанолом и водой и алкоголь-деприва-ционному эффекту через 48 ч после лишения доступа к этанолу, показателем которого является объем потребляемого этанола в первые 90 мин при предоставлении животным выбора между водой и 10% раствором этанола [15].
Материалы. В работе использовались следующие вещества: селанк (Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, субстанция, ИМГ РАН) растворяли в воде для инъекций и вводили однократно в дозе 0.3 мг/кг, внутрибрюшинно (в/б); растворитель использовали в качестве контроля. Все вещества вводили из расчета 0.1 мл/100 г массы тела животных.
Методы. Оценку тревожности в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт" (ПКЛ) проводили в соответствии с общепринятой методикой [16]. Животных помещали на центральную
площадку и в течение последующих 300 с фиксировали основные пространственно-временные параметры (время нахождения в открытых рукавах, число заходов в открытые рукава, число заходов в закрытые рукава) и этологические (количество кивков в открытых рукавах ПКЛ). Увеличение времени нахождения в открытых рукавах и числа заходов в открытые рукава при отсутствии изменений двигательной активности (общее число заходов в открытые и закрытые рукава), а также увеличение направленной исследовательской активности, оцениваемой по увеличению числа наклонов головы, рассматривали как проявление анксиолитического эффекта. Показатели "время в открытых рукавах" и "число заходов в открытые рукава" сравнивали в процентах (%), которые рассчитывали по формуле:
время в открытых рукавах в % = (время в открытых рукавах в с/300 с) х 100%; число выходов в открытые рукава в % = (число выходов в открытые рукава/общее число заходов в открытые и закрытые рукава) х 100%; число заходов в закрытые рукава в % = (число заходов в закрытые рукава/общее число заходов в открытые и закрытые рукава) х 100%.
Эксперимент проводили по следующей схеме: группа 1 "контроль" — крысы, не имевшие доступа к алкоголю в течение 8-ми месяцев — вода для инъекций за 30 мин до тестирования в тесте ПКЛ;
группа 2 "алкогольная депривация" — крысы, потреблявшие этанол, через 48 ч после лишения доступа к этанолу — вода для инъекций за 30 мин до тестирования в ПКЛ;
группа 3 "алкогольная депривация + селанк" — крысы, потреблявшие этанол, через 48 ч после лишения доступа к этанолу — селанк за 30 мин до тестирования в тесте ПКЛ.
В каждой группе использовали по 9 животных. Нейрохимический анализ содержания серото-нина и его метаболита в разных структурах головного мозга у крыс проводили в двух экспериментах. Эксперимент 1. Опыты выполнены на ин-тактных крысах, не имевших контакта с этанолом, через 30 мин после введения воды для инъекций (группа "контроль") и селанка (группа "селанк"); число животных в каждой группе — 7. Эксперимент 2. Крыс, продолжающих потребление этанола в условиях выбора между раствором этанола и водой, через 30 мин после введения воды для инъекций (группа 1 "потребление этанола" и селанка (группа 2 "потребление этанола + + селанк"), а также крыс на фоне 48-часовой алкогольной депривации через 30 мин после введения воды для инъекций (группа 3 "алкогольная депривация") и селанка (группа 4 "алкогольная депривация + селанк") декапитировали и извлекали головной мозг; число животных в каждой группе — 6. Структуры мозга (фронтальная кора,
Таблица 1. Влияние селанка в дозе 0.3 мг/кг на поведение крыс с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт". Ме (25q; 75q)
Показатель ПКЛ Контроль Алкогольная депривация Алкогольная депривация + селанк Критерий Краскела—Уоллиса
Время пребывания в открытых рукавах ПКЛ, % 14.3 (11.0; 34.7) 2.0 (0.0; 7.7)х 23.0 (16.7; 33.3)** p = 0.0064
Выходы в открытые рукава (ВО) ПКЛ, % 33.3 (16.7; 44.4) 14.3 (0.0; 28.6) 37.5 (30.8; 41.7) p = 0.0472
Заходы в закрытые рукава (ЗЗ) ПКЛ, % 66.7 (55.6; 83.3) 85.7 (71.4; 100.0) 62.5 (58.3; 69.2) p = 0.0472
Общая двигательная активность (ВО + ЗЗ) 9.0 (9.0; 10.0) 7.0 (3.0; 9.0) 9.0 (8.0; 13.0) p = 0.0900
Число кивков на открытых рукавах ПКЛ 9.0 (5.0; 16.0) 3.0 (0.0; 5.0)х 10.0 (9.0; 12.0)* p = 0.0050
Примечание. *р < 0.05; **р < 0.01 статистически значимые отличия по отношению к группе "алкогольная депривация"; х р < 0.05 статистически значимые отличия по отношению к контрольной группе согласно непараметрическому тесту множественных сравнений средних рядов для всех групп; число животных в каждой группе п = 9.
гиппокамп, гипоталамус, стр
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.