РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2009, ТОМ 3(12), № 2
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
СОСТОЯНИЕ ПУЛА РАСТВОРИМЫХ ФОРМ МЕМБРАННЫХ АНТИГЕНОВ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗАХ
© 2009 г. В.В. Новиков, Е.А. Гостюжова*, А.В. Караулов**, О.С. Самойлова*, А.А. Бабаев, С.А. Волкова*, Н.Е. Гришунина, Д.В. Новиков, .В. Кокушков , А.Ю. Барышников ,
Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия; *
Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А. Семашко, Нижний Новгород, Россия;
**
Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, Москва, Россия;
***Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва, Россия
Поступила: 6.03.2009. Принята: 12.05.2009
У больных острыми лейкозами в стадии первичной атаки провели сравнительное изучение сывороточного содержания растворимых CD18, CD25, CD50 антигенов, растворимых молекул HLA I класса и молекул HLA-DR, суммарных и олигомерных фракций растворимых CD38, CD54, CD95 антигенов, сывороточного уровня растворимых комплексов, состоящих из молекул HLA I класса и CD8 антигена (HLAI-CD8), а также растворимых комплексов CD18-CD50, CD18-CD54. При остром лимфолейкозе обнаружено повышение сывороточного уровня растворимых антигенов CD8, CD18, CD25, CD50, растворимых молекул HLA I класса и молекул HLA-DR. Сывороточный уровень олигомерного CD38 антигена повышался в большей степени, чем суммарная фракция. Содержание суммарного CD95 антигена, наоборот увеличивалось в большей степени, чем олигомерного. Сывороточный уровень олигомерного и суммарного растворимого CD54 антигена повышался в одинаковой степени. Кроме того, при ОЛЛ обнаружено более чем десятикратное повышение сывороточного содержания растворимых комплексов CD18-CD50 при нормальном сывороточном уровне растворимых комплексов CD18-CD54 и HLAI-CD8. У больных острыми нелимфоидными лейкозами в стадии первичной атаки выявлено повышение сывороточного содержания растворимого CD25 антигена, молекул HLA I класса и растворимого комплекса, состоящего из молекул HLA I класса и СD8 антигена. Обнаружено прогностическое значение повышенного уровня олигомерного CD38 антигена, сопровождающегося последующим выходом больных в ремиссию.
Ключевые слова: острые лимфолейкозы, острые нелимфоидные лейкозы, растворимые CD18, CD25, CD50 антигены, растворимые молекулы HLA I класса, молекулы HLA-DR, суммарные и олигомерные фракции растворимых CD38, CD54, CD95 антигенов, растворимые комплексы HLAI-CD8, CD18-CD50, CD18-CD54
ВВЕДЕНИЕ
Известно, что существует пул растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы, состоящий из нескольких десятков антигенов белковой природы, находящихся в разном структурно-функциональном состоянии. Каждый из растворимых диффе-ренцировочных антигенов или растворимых молекул гистосовместимости может быть представлен несколькими изоформами, образующимися за счет шеддинга или альтерна-
Адрес:
тивного сплайсинга. Они осуществляют множественные функции, модулируя иммунные реакции путем связывания с лигандами своих мембранных гомологов на поверхности клеток и являются межклеточными белковыми коммуникаторами. Образованный клеткой-продуцентом растворимый белок может взаимодействовать с лигандом на другой клетке, выступая в качестве трансмиттера, активирующего или подавляющего ее функцию вплоть до апоптоза. Растворимые формы мембранных антигенов выступают в роли аутокрин-ных факторов, связываясь с мембранным лигандом на этой же клетке, запуская внутриклеточные сигнальные пути либо мешая
взаимодействию клетки-продуцента растворимого антигена с клеткой-партнером. Растворимые формы мембранных антигенов могут образовывать олигомеры, состоящие из субъединиц, принадлежащих данному антигену, или растворимые комплексы (ассоциа-ты), построенные из пар «рецептор-лиганд». Структурно-функциональное состояние этих белков оказывает влияние на их иммуномо-дулирующие свойства. Мономерные и оли-гомерные формы могут выполнять разные функции [1, 2].
Изменение концентрации растворимых форм мембранных антигенов в околоклеточном пространстве и биологических жидкостях выступает в качестве фактора, воздействующего на состояние глобальной иммунологической сети. Повышение их концентрации при гиперактивации иммунной системы является механизмом ограничения иммунного ответа, работающего по принципу обратной связи. Растворимые формы мембранных антигенов при онкологических заболеваниях участвуют в формировании механизмов ухода опухоли от иммунного надзора. Характер изменения их концентрации может нести прогностическую информацию при иммуноопосредованных заболеваниях разного генеза, в том числе при онкогематологических заболеваниях [2, 3].
Сывороточная концентрация ряда растворимых дифференцировочных антигенов и молекул гистосовместимости повышается при острых лейкозах. У больных острыми лейкозами ранее продемонстрировано изменение суммарного сывороточного содержания растворимых молекул HLA I класса, суммарных фракций растворимых CD8, CD25, CD38, CD54, CD95 и других антигенов [3 — 9]. Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение сывороточного содержания суммарных и олигомерных фракций растворимых CD38, CD54, CD95 антигенов, сывороточного уровня растворимых комплексов, состоящих из молекул HLA I класса и CD8 антигена (HLAI-CD8), а также комплексов CD18-CD50, CD18-CD54 у больных острыми лейкозами.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для исследования послужили образцы сыворотки периферической крови 20 пациентов с острым нелимфобластным лейкозом (ОНЛЛ) и 6 пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), проходивших лечение в гематологическом отделении
Нижегородской областной клинической больницы им. Н.А. Семашко. На момент исследования все обследуемые находились в стадии первичной атаки. В качестве контроля использовали образцы сыворотки крови 40 здоровых волонтеров.
Оценивали сывороточное содержание суммарной и олигомерной фракции растворимых антигенов CD38 (sCD38), CD54 (sCD54), CD95 (sCD95), растворимых молекул HLA I класса (sHLA-I), HLA-DR (sHLA-DR), растворимых антигенов CD8 (sCD8), CD18 (sCD18), CD25 (sCD25), CD50 (sCD50), растворимого комплекса, состоящего из молекул HLA I класса и CD8 антигена (HLAI-CD8), а также растворимых комплексов, состоящих из молекул CD18 и CD54 (CD18-CD54), CD18 и CD50 (CD18-CD50). Определение уровня растворимых форм мембранных антигенов проводили двухсайтовым иммуноферментным методом с использованием моноклональных антител серии ИКО и поликлональных антител, специфичных к мембранным антигенам моно-нуклеарных клеток крови человека [10—13]. Результаты выражали в условных единицах (U/ml).
Статистический анализ проводили с использованием пакета программ Microsoft Excel и Biostat, применяя критерии Манна-Уитни и Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ
При остром лимфолейкозе (ОЛЛ) обнаружено трехкратное повышение сывороточного содержания sCD25 антигена в сравнении с нормой (p < 0,05) (таб. 1). Кроме того, в 2,0 раза увеличивалось сывороточное содержание суммарной фракции растворимого CD38 антигена. Концентрация олигомерной формы sCD38 антигена повышалась в 6,6 раза (p < 0,05).
У пациентов с ОНЛЛ наблюдалась лишь тенденция к повышению сывороточного уровня sCD25 антигена (p > 0,05). Уровень суммарного sCD38 антигена также оставался в пределах нормы. Однако были получены данные о статистически достоверном повышении в 2,1 раза относительно нормы сывороточного содержания олигомерной формы sCD38 антигена. У пациентов, достигших наступления ремиссии (n = 10), уровень олигомерной формы sCD38 превышал норму в 3,6 раза (p < 0,05), в то время как при неблагоприятном исходе заболевания (n = 9) содержание
Таблица 1. Сывороточное содержание суммарных и олигомерных фракций растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы (U/ml)
Антиген ОЛЛ ОНЛЛ Доноры
sCD25 1275+427* 654+173* 406 + 6
sCD38 оли-гомер 1673+905* 531 + 152* 253+40
sCD38 суммарный 411 + 131* 233+22 208 + 8
sCD95 суммарный 1918 + 861* 311+60 370 + 16
sCD95 оли-гомер 343 + 38* 329+72 245 + 16
sHLA-DR 367+129* 144 + 36 99 + 8
'статистически значимые отличия: p < 0,05 по сравнению с нормой
этого антигена в сыворотке крови находилось в пределах нормы (рис.).
Сывороточное содержание суммарной фракции растворимого CD95 антигена при первичном ОЛЛ превышало норму в 5,2 раза. При этом уровень олигомерной фракции повышался в меньшей степени (в 1,4 раза), однако повышение было статистически достоверным (р < 0,05). У больных первичным ОНЛЛ значимых изменений в содержании суммарной и олигомерной фракций sCD95 антигена выявлено не было. Сывороточный уровень молекул sHLA-DR у пациентов с ОЛЛ был выше нормы в 3,7 раза (p < 0,05), в то время как для ОНЛЛ значимых изменений в их содержании не обнаружено.
Антигены главного комплекса гистосов-местимости, как и многие другие мембранные белки клеток иммунной системы, имеют
U/ml * 900-,
800- -
700600500400-
зоо- -
200- -
1000-1---1---1---1-1
Норма Ремиссия Отсутствие ремиссии
Рис. Сывороточное содержание олигомерного sCD38 антигена у больных ОНЛЛ в стадии первичной атаки при последующем выходе в ремиссию и при ее отсутствии.
растворимые формы. При ОЛЛ в стадии первичной атаки наблюдалось повышение сывороточного уровня растворимых молекул ИЬЛ I класса в 3,9 раза по сравнению с нормой (р < 0,05). При ОНЛЛ содержание этих молекул в сыворотке также повышалось, но не столь значительно — в 1,7 раза (р < 0,05). Ранее нами было продемонстрировано существование растворимых комплексов, состоящих из молекул ИЬЛ I класса и СБ8 антигена [2, 15]. В связи с этим, наряду с антигенами главного комплекса гистосовместимости, мы исследовали сывороточное содержание растворимой формы СБ8 антигена, а также комплекса НЬЛ1-СБ8 (таб. 2). Содержание растворимых комплексов при ОЛЛ сохранялось в пределах нормы, а при ОНЛЛ характеризовалось статистически значимым повышением.
У больных острым лимфолейкозом проведено исследование сывороточного содержания суммарных фракций антигенов адгезии СБ 18, СБ50 и СБ54, олигомерного растворимого СБ54 антигена, а также содержание растворимых комплексов С
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.