научная статья по теме СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ, КЛИНИЧЕСКИХ И МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ НЕОПЛАЗИЙ ЧЕЛОВЕКА В СВЯЗИ С ПРОЦЕССАМИ РАЗВИТИЯ ОПУХОЛЕЙ Биология

Текст научной статьи на тему «СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ, КЛИНИЧЕСКИХ И МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ НЕОПЛАЗИЙ ЧЕЛОВЕКА В СВЯЗИ С ПРОЦЕССАМИ РАЗВИТИЯ ОПУХОЛЕЙ»

ОНТОГЕНЕЗ, 2004, том 35, № 3, с. 229-238

= БИОЛОГИЯ ОПУХОЛЕВОГО РОСТА

УДК 591

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ, КЛИНИЧЕСКИХ И МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ НЕОПЛАЗИЙ ЧЕЛОВЕКА В СВЯЗИ С ПРОЦЕССАМИ РАЗВИТИЯ ОПУХОЛЕЙ1

© 2004 г. Е. М. Грецов, Ж. В. Чуракова, Е. В. Шеваль, И. А. Воробьев

Гематологический научный центр РАМН 125167 Москва, Новозыковский пр-т, д. 4а Поступила в редакцию 30.05.03 г.

Окончательный вариант получен 17.11.03 г.

В работе приведено описание трех случаев лимфатических неоплазий, которые характеризуются одинаковым иммунофенотипом, характерным для хронического лимфолейкоза (СБ19+/СБ5+, кло-нальность по легким цепям иммуноглобулинов, СБ23+, СБ10). Однако на основании клинической картины и морфологии клеточного субстрата опухолей эти случаи должны быть отнесены к различным нозологическим формам (собственно хронический лимфолейкоз, крупноклеточная трансформация хронического лимфолейкоза и первичная диффузная крупноклеточная лимфома). Принимая во внимание то, что сходство иммунофенотипа, по-видимому, является отражением происхождения опухоли, а клинико-морфологическая картина - отражением особенностей онкогенеза и/или этапа опухолевой прогрессии, в работе обсуждаются возможности классификации лимфатических неоплазий, учитывающей процессы развития опухолей.

Ключевые слова: лимфоидная неоплазия, онкогенез, опухолевая прогрессия, классификация, имму-нофенотип, морфология клеток.

Современные классификации лимфопролифе-ративных заболеваний человека базируются на анализе разнообразных признаков (морфологических, иммунологических, клинических, генетических и т.д.). При этом совокупность этих признаков, а не каждого в отдельности, служит основанием для отнесения любой конкретной опухоли к той или иной нозологической форме (Harris et al., 1994; World Health Organization..., 2001).

Взятые поодиночке многие признаки и даже группы признаков перекрываются. В диагностической практике это приводит к тому, что если выявленный при анализе признак не укладывается в предполагаемый диагноз, то он попросту отбрасывается. С точки зрения анализа онкогенеза и опухолевой прогрессии, такой подход мало оправдан, так как любая особенность неоплазии есть отражение особенностей онкогенеза. Поэтому анализ ситуаций, когда опухоль обладает отдельными признаками (или группой признаков), на первый взгляд не укладывающимися в диагноз, имеет большое значение для понимания процессов развития опухолей.

1 Работа поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (проекты < 02-04-49217 и 03-07-90406).

Широкое применение в дифференциальной диагностике лимфопролиферативных заболеваний находит метод иммунофенотипирования. Его использование базируется на том, что в процессе дифференцировки лимфоидных клеток происходит последовательное изменение спектра экс-прессируемых ими антигенов. Предполагается, что опухолевые клетки несут те же антигены, что и их нормальные предшественники, а установление иммунофенотипа опухоли трактуется как нахождение ее нормального аналога.

Впрочем, в последнее время появились данные о том, что сходный иммунофенотип не обязательно означает сходное течение заболевания в рамках одной нозологии. Так, при различных формах В-клеточного хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) иммунофенотип и особенности гистологического строения пораженных органов слабо коррелируют друг с другом (АврШпё е! а1., 2002). В настоящей работе проанализированы три случая, имеющие одинаковый иммунофенотип, но существенно различающиеся по морфологическим и клиническим особенностям. В связи с полученными данными обсуждаются особенности он-

1 81

; v • 4Ё1

= ■ ..

\Щ 1Ш Mill Г Mil INI "f Vl 7 1 1 1 Mil 1 1 1 1 1 III

0.2

0.1

ТТТ1....................—г-г-ггпг

случай 1

93

0.4

случай 2

случай 3

Рис. 1. Иммунофенотип трех анализируемых лимфопролифераций (проточная цитофлуориметрия клеточных суспензий, приготовленных из биопсийного материала).

По оси абсцисс - интенсивности флуоресценции: а - CD5, б - к, в - CD23. По оси ординат - интенсивности флуоресценции: а - CD19, б - X; в - число просчитанных клеток. Уровень фоновой флуоресценции обозначен линиями, цифры -процент клеток с позитивной экспрессией, рассчитанный от общего числа клеток в лимфоцитарном регионе, выделенном на основании анализа прямого и бокового светорассеяния.

когенеза ХЛЛ и подходы к классификации лим-фоидных неоплазий человека.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Материалом для исследования служили селезенка, полученная в результате спленэктомии (случай 1), и биопсированные лимфатические узлы (случаи 2 и 3) пациентов, проходивших лечение в ГНЦ РАМН в 2002 г. Диагнозы установле-

ны в соответствии с требованиями классификации ВОЗ (World Health Organization..., 2001).

Для иммунофенотипирования суспензию клеток готовили с помощью гомогенизатора Medi-machine ("Becton Dickinson", США), эритроциты лизировали с использованием лизирующего раствора FACS ("Becton Dickinson", США). Для имму-нохимического окрашивания применяли следующие моноклональные антитела: анти-CD5-FITC, анти^19-РБ, анти^23-РБ, анти^10^ГГС,

R1

■mm--- ■

Hg^"".

C S S

R1

R1

T-1-1-г

FSC

б . в случай

1

L1

ТПТ]— I I II III Г I I III II—I I I INN

случай 2 ■

L1

L2

ТПТ] I I I lllll| I I I 111 II I I I I lllll

CD5

случай 3 -

L1 в R1

R1

i i i г

L1 в R1

R1

i-1-1-1-г

L1 в R1

R1

T-1-1-1-г

FSC

L2 в R1

R1

—i-1-г

L2 в R1

R1

г i i г

L2 в R1

R1

i i-1-1-г

FSC

Рис. 2. Анализ прямого (Б8С) и бокового (88С) светорассеяния опухолевых клеток и реактивных Т-лимфоцитов. Распределение по Б8С/88С для: а - общей популяции клеток в суспензии (Ш - лимфоцитарный регион), в - опухолевых лимфоцитов (Ь1 в Ш), г - реактивных Т-лимфоцитов (Ь2 в Ш); распределение клеток в Ш по интенсивности флуоресценции СБ5 и СБ19 (•). Ь1 - опухолевые клетки, экспрессирующие СБ5 и СБ19, Ь2 - реактивные Т-лимфоциты, экспрессирующие только СБ5. При подготовке графиков распределения Б8С/88С применен алгоритм, реализованный в программном обеспечении проточного цитофлуориметра, позволяющий показать области наиболее плотного расположения клеток.

анти-к-FITC, анти-À-PE и соответствующие негативные контроли ("DAKO", Дания). Подсчет клеток производили с помощью проточного цитофлуориметра PAS ("Partek", Германия). Для обработки полученных данных использовали программу FloMax, поставляемую с проточным цитофлуориметром.

Отпечатки готовили из свежего материала, фиксировали метанолом, окрашивали раствором Гимзы ("Merck", Германия) и заключали в синтетическую смолу DePeX ("Serva", Германия). Препараты изучали и фотографировали на микроскопе Leica DMRBE (объектив NPL Fluotar 100/1.30) ("Leica", Германия) с помощью цифрового фотоаппарата Kodak DC290 ("Kodak", США). Морфометричес-кий анализ проводили по методике, описанной в работе Кохно с соавт. (2001).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Для анализа были отобраны три случая, имеющие сходные картины экспрессии поверхностных

антигенов, которые соответствуют ХЛЛ, а не другим нозологиям, описанным в классификации ВОЗ 2001 г. (World Health Organization., 2001). Это послужило основанием для первоначального заключения о том, что все эти случаи относятся к ХЛЛ. Результаты по основным антигенам представлены на рис. 1.

Во всех трех случаях в лимфоцитарном регионе выявляется популяция B-лимфоцитов (экспрессия CD19), которые коэкспрессируют на своей поверхности CD5 (рис. 1, а). Размер этой популяции позволяет выдвинуть предположение об ее неопластической природе, подтверждением чего служит обнаруженная клональность по легким цепям иммуноглобулинов: в случае 1 экспресси-руются А-, в случаях 2 и 3 - к-цепи (рис. 1, б). Кроме того, эта популяция лимфоцитов характеризуется экспрессией CD23, о чем можно говорить на основании анализа размеров популяций клеток, положительных по CD19/CD5 и по CD23, в случаях 1 и 2, где размер этих популяций превышает 75% (рис. 1, в). В случае 3 размер CD19/CD5-пози-

120 80 40 0

120 80 40 0

80 40 20 0

40 80 120 160

Рис. 3. Гистограммы распределения размеров ядер в отпечатке биопсированных лимфоидных органов в случаях: а - 1, б - 2, в - 3. По оси абсцисс - площадь ядер, мкм2, по оси ординат - число измеренных кле-

тивной популяции составляет 47% от общего количества клеток; размер популяции клеток, позитивных по СБ23, равняется 74%, что позволяет говорить о том, что среди этих клеток с неизбежностью присутствуют и опухолевые лимфоциты. На гистограмме распределения клеток по интенсивности флуоресценции СБ23 выявляется два пика, т.е. присутствуют две популяции. Вероятно, опухолевые клетки содержит большая из них. Опухолевые лимфоциты во всех трех случаях не экспрессировали СБ 10 (не показано), что и послужило в совокупности основанием для следующего заключения: в биопсийном материале присутствуют опухолевые лимфоциты с иммунофе-нотипом, соответствующим ХЛЛ.

Однако анализ клинических данных показал различную картину заболевания во всех трех слу-

чаях. Случай 1 характеризовался высоким, постепенно нарастающим лимфоцитозом (на день спленэктомии: лейкоциты - 200 х 103/мкл, лимфоциты - 98%), увеличением всех групп периферических лимфатических узлов (узлы мягкие, безболезненные, подвижные), спленомегалией. Такая картина в целом достаточно характерна для ХЛЛ.

Случай 2 имел отчасти схожую картину: высокий лимфоцитоз (на день биопсии: лейкоциты -60 х 103/мкл, лимфоциты - 81%), периферические узлы увеличены, безболезненны. Такая картина соответствует ХЛЛ, однако клинически болезнь протекала более агрессивно. При обследовании выявлено опухолевое поражение средостения, брюшной полости и забрюшинного пространства с дислокацией органов грудной и брюшной полостей, признаки прорастания паренхимы легких. Эти признаки могут свидетельствовать о злокачественном перерождении ХЛЛ.

Особенности случая 3 не позволяют даже говорить о ХЛЛ. При обследовании в средостении выявлены конгломераты лимфатических узлов с признаками прорастания левого легкого и перикарда, увеличенные селезенка и лимфатические узлы брюшной полости и забрюшинного пространства. При этом в крови число лейкоцитов (5.3 х 103/м

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком