эффекторными Т-лимфоцитами/клетками памяти и СБ8+ ХХЕтА, т.е. зрелыми цитотокси-ческими СБ8+Т-лимфоцитами, содержащими перфорин и гранзим В, экспрессирующими FasL и продуцирующими ^N-7 и ХNF-a.
Заключение. На ранних этапах МФ ЭВИ у детей происходит активная миграция в ЦСЖ Т-хелперов с фенотипом центральных клеток памяти, а также эффекторных Т-лимфоци-тов памяти и коротко живущих Т-эффекто-ров. По-видимому, именно СБ4+ХЕМ контролируют энтеровирусную инфекцию ЦНС. Цитотоксические Т-лимфоциты, мигрирующие через ГЭБ на ранних этапах МФ ЭВИ, представлены в основном СБ8+ эффектор-
ными Т-лимфоцитами/клетками памяти
и CD8+ TTEMRA.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Makis A., Shipway D., Hatzimichael E. J Interf and Cytok Research. 2010; 30: 661-665.
2. Lucht F., Gordier G., Pozzetto B. J Med Virology 1992, 38, 92-96.
3. Lepej S. Z., Tesovic G., Sternak S. L. Immun Inv. 2007, 36, 321-335.
4. Marelli-Berg F.M., Fu H., Vinello F. Immunology 2010,130,158-165.
5. Bergmann C. C., Lane T. E., Stohlman S. A. Nat Rev Microbiol. 2006, 4, 121-132.
6. Griffin D. E. Nat Rev Immunol. 2003, 3, 493-502.
CD4+ AND CD8+ MEMORY T-CELLS, NAIVE AND TERMINALLY DIFFERENTIATED T LYMPHOCYTES IN CEREBROSPINAL FLUID DURING ACUTE STAGE OF ENTEROVIRAL MENINGITIS IN CHILDREN
Lagereva J. G.1,2, Chereshnev V. A.1, Eremenko A. J.1,2, Beykin J. B.1,2
'Institute of Immunology and Physiology; 2Clinical Diagnostic Center, Ekaterinburg, Russia
45 children aged 8 to 14 years were studied during acute stage of enteroviral meningitis. Immunological testing of peripheral blood and CSF was performed on the 1st-10th day from disease onset and within the acute period of the disease (the 11th-20th day). The study results demonstrated that active migration of CD4+ central and effector memory T cells to CSF during enteroviral meningitis acute period occurs. Apparently, CD4+ effector memory T cells control enteroviral infection CNS. CD8 + T lymphocytes in CSF consist of CD8 + effector memory T cells and CD8+Ttemra.
Key words: subpopulation of T lymphocytes, cerebrospinal fluid, cytokines, enteroviral meningitis
T0LL-РЕЦЕПТ0РЫ НА МОНОЦИТАХ И ИХ КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ У ПАЦИЕНТОВ С СЕПСИСОМ
Лазанович В. А., Маркелова Е. В., Смирнов Г. А., Павлов В. А.
ГБОУ ВПО « Тихоокеанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Владивосток, Россия
Дисфункция в системе TLRs является важным патогенетическим звеном механизмов врожденного иммунитета при генерализованном воспалении. В исследование были включены 32 пациента с сепсисом. В ходе нашего наблюдения не было выявлено достоверных различий экспрессии TLR4 на всех этапах исследования, а также связи экспрессии данного маркера на моноцитах, в зависимости от тяжести течения сепсиса и исходов заболевания. Низкий уровень TLR2, СБ14 на поздних этапах заболевания отражает тяжесть течения и указывает на неблагоприятный исход тяжелого сепсиса у хирургических пациентов.
Ключевые слова: TOLL-рецепторы, моноциты, сепсис РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2014, том 8 (17), №3
Несмотря на выработку единых диагностических подходов и методов лечения, хирургический сепсис по-прежнему является наиболее частой причиной смерти в отделениях интенсивной терапии, ведущих клиник мира [5]. За один год в США регистрируют более 500 000 пациентов с сепсисом, и эти цифры только растут. Данные обстоятельства, неоднозначные результаты методов, на которые возлагались определенные надежды, в частности антици-токиновые препараты, направляет исследователей по пути более глубокого изучения данной проблемы.
Нарушения в системе иммунитета были всегда предметом пристального внимания специалистов, изучающих проблему сепсиса. Открытие консервативных молекулярных структур (групп молекул), ассоциированных с патогеном (pathogen-associated molecular patterns, PAMP) и рецепторов для их распознавания (pattern recognition receptors, PRR) на иммунных клетках, возродили интерес к механизмам врожденного иммунитета [7]. TLR-рецепторы наиболее хорошо изученная подгруппа PRR, представляют семейство трансмембранных гликопротеинов I типа, состоящих из внеклеточного лейцин содержащего домена LRR (Leucine-Rich Repeat domain) контактирующего с лигандом, коротким трансмембранным участком и внутриклеточного компонента TIR-домена ответственного за передачу сигнала адаптерным молекулам с последующей активацией факторов транскрипции (NF-B, AP-1). У человека выделяют 11 типов Toll -подобных рецепторов [10]. В качестве ли-гандов выступают консервативные структуры многих патогенов, липопротеиды, пептидогли-каны, липотейхоевые и маннуроновые кислоты, липополисахарид (LPS), флагеллин и др.
Наиболее значимыми при сепсисе являются грамположительные и грамотрицательные бактерии, а также грибковые патогены. TLR2 и 4, распознают наибольшее количество PAMP грамположительных и грамотрицательных бактерий соответственно.
Экспрессия данных рецепторов на клетках миелоидного ряда, имеет ключевое значение в активации механизмов врожденного иммунного ответа и во многом определяет последующие адаптивные реакции при септических состояниях. Многие экспериментальные и клинические исследования подтверждают центральную роль TLRs в развитии тяжелых
инфекционных заболеваний [4].Однако, многие исследования носят экспериментальный характер, считают, что они весьма ценны, но не могут напрямую быть экстраполированы к человеку. Число исследований, в которых изучалась зависимость тяжести течения сепсиса и степенью выражения TLR2, TLR4 и CD14 на моноцитах весьма ограниченно.
Цель работы: изучить уровень экспрессии TLR2, TLR4, CD14 на моноцитах у пациентов с сепсисом, как основных инициирующих сигнальных молекул врожденного иммунитета, их прогностическое значение в зависимости от тяжести течения и клинических исходов заболевания.
Материал и методы: Нами представлены результаты проспективного исследования, проведенного на базе краевого Центра анестезиологии и реаниматологии, ГБУЗ Приморской краевой клинической больницы № 1 г. Владивостока. В исследование были включены 32 пациента, от 18 до 70 лет, в первые 48 часов после установления диагноза сепсиса, тяжелого сепсиса (дисфункция органов) или септического шока (стойкая гипотензия), в соответствии с клиническими критериями (ACCP/ SCCM Consensus Conference committee, 1992). Источниками септического процесса были органы брюшной полости 56,25% (n=18), легкие 25% (n=8), мочевыводящие пути 12,5% (n=4), инфекции кожи 6,25% (n=2).
Клиническую стратификацию пациентов проводили по тяжести сепсиса на начало исследования, используя интегральную шкалу APACHE II (Acute Physiology And Chronic Health Evaluation), менее 20 баллов (группа I), более 20 баллов (группа II) и исходам заболевания: выжившие n = 24 и умершие пациенты n = 8, с учетом 28-дневной летальности. В контрольную группу вошли 12 клинически здоровых людей, сопоставимых по полу, возрасту и расовой принадлежности.
Критериями исключения в исследовании являлись: терминальное состояние (прогнозируемая гибель в течение 48 часов), риск летального исхода, не связанного с сепсисом (тромбоэмболия, инфаркт миокарда, нарушения мозгового кровообращения), онкологические, ВИЧ-инфицированные пациенты, получавшие иммуносупрессивную терапию.
Цитофлюориметрический анализ популяции моноцитов и экспрессии активационных маркеров выполняли в течении 2 часов после
забора крови, из периферической вены, в пробирки с добавлением К3ЭДТА, на проточном цитометре "FACS Calibur BD", по стандартному протоколу в программе CellQuestPro. В каждой пробе анализировали не менее 104 клеток. Использовали моноклональные антитела к молекулам CD14-FITC, CD282 (TLR2) -APC, CD284 (TLR4)-PE, производства "Beckman Coulter" (США). Количественную оценку уровня экспрессии исследуемых поверхностных рецепторов проводили по средней интенсивности флюоресценции (MFI -mean fluorescence intensity), на 1, 5, 10 сутки заболевания. Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием программы «StatPlus 2010». Для сравнения параметров использовали t-критерий Стьюдента.
Результаты: В ходе исследования были выявлены существенные различия экспрессии рецепторов врожденного иммунитета на моноцитах у пациентов сепсисом по сравнению с группой контроля. Так уровень MFI для TLR 2,4 был существенно выше у септических пациентов, а CD14, напротив, ниже по сравнению с группой здоровых доноров (рис.). Все различия между группами носили достоверный характер (р < 0,001).
О 100 200 300
■ здоровые ■ пациенты
Рис. Уровень экспрессии (MFI) TLR2, TLR4 и CD 14 на моноцитах здоровых лиц и пациентов с сепсисом (р<0,001*)
Основные медиаторы воспаления II-1 в, TNF-a, IL-6, TGF-вз, IL-10, ходе септического процесса претерпевают динамические изменения, отражая стадии, тип и во многом исход иммунного ответа при септических состояниях [1, 2]. Их синтез индуцируется при взаимодействии TLR4 и TLR2 (Toll-like receptors) на клетках макрофагально-гранулоцитарного звена с PAMP патогенов. Оценивая экспрес-
сию исследуемых маркеров в динамике, выявлены разнонаправленные изменения. Для TLR 2 было отмечено повышение показателя к 5 суткам (117, 2±38,3) по сравнению с исходным 100,2±45,2 MFI), а затем наоборот снижение к 10 суткам (84,39± 27,2) причем только на данном временном интервале различия носили достоверный характер (р<0,05). Для TLR4, уровень MFI не претерпевал значительных колебаний. Для CD14 было отмечено постепенное снижение в динамике, однако различия не достигали статистически значимых величин (p>0,05).
Далее, проведен анализ в зависимости от тяжести течения и клинических исходов заболевания. Корреляция между уровнем экспрессии, TLR2, TLR4 и CD14 на моноцитах пациентов и степенью тяжести течения сепсиса по шкале APACHE II, была выявлена только для TLR2 (MFI). Более низкие значения данного показателя были зафиксированы в группе со степенью APACHE II > 20 баллов, на 10 день наблюдения (р<0,05).
Неблагоприятные исходы сепсиса (n=8), были связаны с низкой экспрессией на моноцитах TLR2 на 5, 10 сутки наблюдения (р<0,05) и CD14 10 сутки (р<0,05).
Обсуж
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.