научная статья по теме ТРЕМАТОДА SKRJABINOLECITHUM SPASSKII BELOUS, 1954 (DIGENEA: HAPLOPORIDAE) - ПАРАЗИТ КЕФАЛЕЙ (MUGILIDAE) ИЗ ЗАЛИВА ПЕТРА ВЕЛИКОГО ЯПОНСКОГО МОРЯ И ИЗ ВЬЕТНАМСКИХ ВОД ТОНКИНСКОГО ЗАЛИВА: МОРФОЛОГИЯ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ДАННЫЕ Биология

Текст научной статьи на тему «ТРЕМАТОДА SKRJABINOLECITHUM SPASSKII BELOUS, 1954 (DIGENEA: HAPLOPORIDAE) - ПАРАЗИТ КЕФАЛЕЙ (MUGILIDAE) ИЗ ЗАЛИВА ПЕТРА ВЕЛИКОГО ЯПОНСКОГО МОРЯ И ИЗ ВЬЕТНАМСКИХ ВОД ТОНКИНСКОГО ЗАЛИВА: МОРФОЛОГИЯ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ДАННЫЕ»

БИОЛОГИЯ МОРЯ, 2015, том 41, № 4, с. 256-263

УДК 576.895.122 ПАРАЗИТОЛОГИЯ

ТРЕМАТОДА SKRJABINOLECITHUM SPASSKIIBELOUS, 1954 (DIGENEA: HAPLOPORIDAE) - ПАРАЗИТ КЕФАЛЕЙ (MUGILIDAE) ИЗ ЗАЛИВА ПЕТРА ВЕЛИКОГО ЯПОНСКОГО МОРЯ И ИЗ ВЬЕТНАМСКИХ ВОД ТОНКИНСКОГО ЗАЛИВА: МОРФОЛОГИЯ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ДАННЫЕ1

© 2015г.В. В. Беспрозванных1, Д. М. Атопкин12, X. 3. Нго3, А. Ю. Белодед1, А. В. Ермоленко1, Н. В. Ха3, Н. В. Танг3

1Биолого-почвенный институт ДВО РАН, Владивосток 690000;

2Кафедра клеточной биологии и генетики Школы естественных наук Дальневосточного федерального

университета, Владивосток 690091;

3Институт экологии и биоресурсов Вьетнамской академии наук и технологий, Ханой 10000

e-mail: ermolenko@ibss.dvo.ru

Статья принята к печати 05.02.2015 г.

Тремтод,&Skrjabinolecithum spasskii была описана Белоус (1954) от imnem&c&Mugil soiuy (=Liza haematocheila) из р. Раздольная (Суйфун) (ют Дальнего Востока России). При описании вида автор указала на то, что у половозрелых S. spasskii нет пигментных глазков, имеются сферический семенник и короткие кишечные ветви, а матка содержит яйца с мирацидиями без глазка. Нами обнаружены половозрелые черви этого вида в кишечнике пиленгаса Liza haematocheila и лобана Mugil cephalus из зал. Петра Великого Японского моря, а также лобана М. cephalus из вьетнамских вод Тонкинского залива. Изучение морфологии S. spasskii показало, что черви имеют диффузные глазные пятна, V-образный семенник, длинные кишечные ветви, достигающие уровня середины задней трети тела, а в матке находятся эмбрионально неразвитые яйца с крышечкой на одном полюсе и штифтиком на другом. Мирацидий развивается после попадания яиц в воду и имеет пигментный глазок. В результате анализа нуклеотид-ных последовательностей гена 28S рРНК и фрагмента ITS1-5.8S-ITS2 выявлена внутривидовая дифференциация S. spasskii на три генотипа, два из которых обнаружены у трематод из Приморского края и один генотип - у трематод из Вьетнама.

Ключевые слова: Skrjabinolecithum spasskii, ДНК, ген 28S рРНК, Haploporidae, Mugilidae, трематоды.

The trematode Skrjabinolecithum spasskii Belous, 1954 (Digenea: Haploporidae), a parasite of mullets (Mugilidae) from Peter the Great Bay of the Sea of Japan and from Vietnam waters of the Gulf of Tonkin: morphology and molecular data. V. V. Besprozvannykh1, D. M. Atopkin1-2, H. D. Ngo3, A. Yu. Beloded1, A. V Ermolenko1, N. V Ha1, N. V Tangi3 ('Institute of Biology and Soil Science, Far East Branch, Russian Academy of Sciences, Vladivostok 690000; ^Department of Cell Biology and Genetics, Far Eastern Federal University, Vladivostok 690091; 'Institute of Ecology and Biological Resources, Vietnamese Academy ofSciences and Technology, Hanoi, Vietnam 10000)

The trematode Skrjabinolecithum spasskii was described by Belous, from the redlip mullet Mugil so-iuy (=Liza haematocheila) from the Razdolnaya (Suifun) River (southern Far East of Russia). In the description of the species the author noted that adult S. spasskii had no pigment eye-spots, but had a spherical testis and short caeca; the uterus contained eggs with miracidia devoid of an eye-spot. We found adult worms of this species in the intestine of the redlip mullet L/za haematocheila and the striped muUetMugil cephalus from Peter the Great Bay of the Sea of Japan and in the striped mulletM cephalus from Vietnam waters of the Gulf of Tonkin. Our study of the morphology of S. spasskii showed that the worms had diffuse eyes-spots, V-shaped testis, long caeca reaching the level of the middle of the last third of the body, and the uterus with unembryonated underdeveloped eggs with an operculum on one pole and a knob on the other pole. The miracidium develops on eggs hatched in water and has an eye-spot. An analysis of the nucleotide sequences of the 28S rRNA gene and the fragment ITS1-5.8S-ITS2 revealed intraspecific differentiation of the three genotypes of S. spasskii, two of them were detected in the trematodes from Primorye Region and one genotype in the trematodes 256-263).

Keywords: Skrjabinolecithum spasskii, DNA, 28S rRNA gene, Haploporidae, Mugilidae, trematodes.

Род Skrjabinolecithum (Haploporidae Nicoll, 1914) был основан Белоус (1954) для трематоды, обнаруженной у пиленгаса Mugil so-iuy (= Liza haematocheila) из р. Раздольная (Суйфун) Приморского края России. Этой

трематоде было присвоено видовое название X В 2005 г. в результате ревизии семейства Нар1оропёае в состав рода кроме типового вида X spasskii Ве1ош, 1954 были включены X /и^/'смда ^Ьикоу, 1972), X у/'/е//о5мда

1 Работа поддержана грантом Президента РФ (№ 394.2014.4) и частично грантом Вьетнамского национального фонда развития науки и техноло-

гий (№ 106.15-2012.08).

(Martin, 1973) и S. lobolecithum (Martin, 1973) - паразиты морских и эстуарных рыб Восточного полушария (Overstreet, Curran, 2005). Нами половозрелые черви S. spasskii были найдены у Liza haematocheila и Mugil cephalus, отловленных в р. Раздольная [типовое место обнаружения (Белоус, 1954)] и в эстуариях рек, расположенных южнее и севернее этой реки, а также у М. cephalus, отловленных у о-ва Кат Ба в северной части Вьетнама. При изучении обнаруженных червей на большом материале выявлен ряд неточностей в описании S. spasskii.

К сожалению, Белоус (1954) не обозначила голотип и не указала депозитарий, куда она поместила описанных ею червей. Наши попытки найти типовой экземпляр были безуспешными. В 1954 г. Е.В. Белоус работала в Лаборатории паразитологии Дальневосточного филиала Сибирского отделения АН СССР [в настоящее время Биолого-почвенный институт (БПН) ДВО РАН], но в фондах Зоологического музея БПН ДВО РАН типовые экземпляры S. spasskii отсутствуют. По-видимому, эти черви были утеряны или автор вида действительно не поместила их в музей. Мы переописали S. spasskii, выделили неотип и привели результаты анализа нуклеотид-ных последовательностей гена 28S рРНК и фрагмента ITS1-5.8S-ITS2 рибосомной ДНК ядерного генома.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Половозрелые трематоды вида Skrjabinolecithum spasskii были собраны в ходе паразитологического обследования рыб из эстуариев рек Раздольная (43°20' N, 131°47' Е), Карасик (42°32' N, 130°38' Е) и Киевка (42°52rN, 133°38' Е) в Приморском крае, а также из Тонкинского залива (о-в Кат Ба, Вьетнам, 20°81' N, 106°59' Е). Всего в Приморье было просмотрено 16 экз. пиленгаса Liza haematocheila и 6 экз. лобана Mugil cephalus. Зараженными трематодой оказались 11 пиленгасов и все 6 лобанов. Интенсивность инвазии пиленгаса и лобана составляла соответственно 7-112 и 5-40 червей на рыбу. Единственный вскрытый во Вьетнаме лобан был заражен 13 червями.

Извлеченных из рыб червей промывали дистиллированной водой, прижизненно изготавливали временные препараты,

под микроскопом определяли идентичность особей, после этого их убивали горячей дистиллированной водой и фиксировали в 70% спирте. При изготовлении постоянных препаратов половозрелых червей окрашивали в квасцовом кармине, обезвоживали в растворах этанола повышающейся концентрации, просветляли в гвоздичном масле и заключали в канадский бальзам. Чтобы определить сроки развития мирацидиев, из половозрелых особей трематод, найденных у рыб из рек Приморского края, извлекали яйца, которые помещали в дистиллированную воду и содержали при температуре воды 21-22°С.

Все размеры приведены в микрометрах.

Для молекулярного анализа использовали 25 половозрелых особей S. spasskii, найденных в просмотренных рыбах и зафиксированных в 96% этиловом спирте (табл. 1). Тотальную ДНК экстрагировали с помощью метода щелочного лизиса (Truett, 2006). Амплификацию фрагмента гена 28S рРНК выполняли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием специфических прайме-ров: прямого DIGL2 (5'-AAGCATATCACTAAGCGG-3') и обратного 1500R (5'-GCTATCCTGAGGGAAACTTCG-3'). Оптимальная температура отжига праймеров, использованная для ПЦР, составляла 55°С (Tkach et al., 2003). Фрагмент рибосомной ДНК, включающий два внутренних транскрибируемых спейсера, и ген 5.8S рРНК (ITS1-5.8S-ITS2) амплифицировали с использованием специфических праймеров BD1 (5'-GTCGTAACAAGGTTTCCGTA-3') и BD2 (5'-TATGCTTAAATTCAGCGGGT-3'), оптимальная температура отжига - 54°С (Luton et al., 1992). Контроль эффективности и контаминации ПЦР осуществляли с помощью постановки позитивных и негативных проб соответственно. Продукты ПЦР секвенировали методом терминирующего синтеза с использованием набора BigDye Treminator Cycle Sequencing kit фирмы Life Technologies, США. Нуклеотидные последовательности определяли с помощью генетического анализатора GA 3130 на базе БПН ДВО РАН. Для секвени-рования гена 28S рРНК использовали внутренние праймеры 300F, ECD2, 900F и 1200R (Tkach et al., 2003), а также праймеры для амплификации. Для секвенирования фрагмента ITS1-5.8S-ITS2 использовали внутренние праймеры 3S (Han et al., 2013) и HaplRv2 (5'-CGTTCAAGATGTCGAT-3'), разработанный нами. Последовательности зарегистрированы в Европейской базе данных (European Nucleotide Archive, ENA) (табл. 1).

Таблица 1. Список видов, использованных для молекулярного анализа

Вид n Окончательный хозяин Источник Регистрационные номера в базе данных ENA

28S рДНК ITS-5.8S-ITS2 рДНК

8кг]аЫпо1есИЬит 5ра55кИ, р. Раздольная, 4 Liza haematocheila Наши данные LK022754-LK022757 LK022759-LK022762

Приморский край, Россия

Я. 5ра55кИ, р. Раздольная, Приморский 1 Mugil cephalus -11- LK022758 LK022763

край, Россия

Я. 5ра55кИ, р. Киевка, Приморский край, 9 Liza haematocheila -11- НЕ806363-НЕ806376 HG530210-

Россия HG530219

Я. 5ра55кИ, р. Карасик, Приморский 4 L. haematocheila -11- НЕ806377-НЕ806380 HG530220-

край, Россия HG530223

Я. зраззкИ, Тонкинский залив, о-в Кат 7 Mugil cephalus -11- HG530224-HG530230 HG530203-

Ба, Вьетнам HG530209

1Мгот^И т^Шсо1ш 1 M.cephalus Pulis et al., 2013 КС430096 КС430096

8рт1е$Ия Ьегуеуеп5{я 1 Moolgarda seheli -11- КС206500 КС206500

Примечание. ENA - Европейский нуклеотидный архив; п - количество образцов.

Другой хозяин: Mugil cephalus Linne.

Типовое место обнаружения: р. Раздольная

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком