РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2009, ТОМ 3(12), № 3-4, с. 267-272
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
УЧАСТИЕ ХЕМОКИНОВ В РАЗВИТИИ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ
© 2009 г. Н.Ю. Сотникова, Н.Ю. Борзова, И.Е. Таланова,
Н.В. Крошкина
ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи», г. Иваново, Россия
Поступила: 06.08.2009. Принята: 25.08.2009
Целью работы было установить особенности содержания хемокинов 1Ь-8, ЯЛЫТЕБ и фракталкина на системном и локальном уровнях у женщин с угрожающими преждевременными родами в сроке гестации 32 — 36 недель. Было установлено, что содержание 1Ь-8 в периферической крови у пациенток, беременность которых закончилась преждевременными родами, было достоверно ниже, по сравнению с пациентками контрольной группы. Также отмечено, что в децидуальной оболочке плаценты содержание 1Ь-8 у всех обследуемых пациенток было выше, чем на системном уровне. В периферической крови концентрация ЯЛЫТЕБ у пациенток с клиникой преждевременных родов была достоверно выше, чем при неосложненной беременности. Однако в плацентарных экстрактах женщин группы с угрозой прерывания уровень ЯЛЫТЕБ был значительно ниже, чем в контрольной группе. При изучении системной и локальной продукции ЯЛЫТЕБ было выявлено, что и у женщин с угрозой прерывания, и у женщин с неосложненным течением беременности сывороточное содержание ЯЛЫТЕБ превышало таковое в тканевых экстрактах. Полученные нами данные свидетельствуют об участии указанных хемокинов в патогенезе преждевременных родов.
Ключевые слова: хемокины, преждевременные роды, периферическая кровь, дециду-альная оболочка, околоплодные воды.
ВВЕДЕНИЕ
Несмотря на существенный прогресс, достигнутый за последние десятилетия в акушерстве и гинекологии, проблема преждевременных родов до настоящего времени остается одной из наиболее сложных. По данным ряда авторов частота преждевременных родов составляет 3,3% от всех родов (2007 г.), 9—10% детей рождаются до 37 недель, 6% до 36 недель, 2 — 3% до 33 недель [1].
Причины преждевременных родов разнообразны и чаще всего обусловлены действием инфекционного, генетического, эндокринологического, иммунологического факторов, которые действуют одновременно или последовательно, и нередко выделение ведущей причины оказывается затруднительным [2, 3].
Адрес: 153003, г. Иваново, ул. Красных Зорь, д. 14, кв. 63 E-mail: niimid.immune@mail.ru
В 75,3% случаев причины преждевременных родов бывают сочетанными. В настоящее время не вызывает сомнения тот факт, что нормальное течение беременности возможно благодаря наличию уникальных иммунологических механизмов и гармоничному их функционированию [4]. Иммунологические основы осложнений течения беременности связаны с нарушением регулирующей роли иммунитета на разных этапах развития системы мать — плацента —плод. Развитие иммунного ответа на аллоантигены отца, антигены микроорганизмов и собственные антигены на разных сроках беременности могут приводить к таким осложнениям как спонтанные выкидыши, тяжелый поздний гестоз, внутриутробная задержка развития плода и преждевременные роды [5].
Известно, что при угрозе преждевременных родов цитокиновый профиль меняется в сторону преобладания провоспалительных цитокинов. Большое количество эксперимен-
тальных работ показало, что введение про-воспалительных цитокинов вызывает преждевременные роды [6]. Предполагается, что провоспалительные цитокины, продуцируемые макрофагами, такие как, Т№а, 1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8, стимулируют синтез простагландинов и тем самым индуцируют сократительную активность миометрия, что приводит к преждевременным родам или внутриутробной гибели плода [7]. Цитокины 1Ь-ф, TNFа, 1Ь-6, 1Ь-8 значительно увеличены в амниотической жидкости у женщин с угрожающими преждевременными родами инфекционного генеза [1]. Менее изучены особенности выработки хемокинов в конце гестационного процесса. К настоящему времени выделяют 4 семейства хемокинов. В основе их классификации лежит различие в количестве и расположении цистеиновых остатков [8]. Молекулы хемокинов состоят из 70 — 80 аминокислотных остатков, молекулярный вес которых составляет 8—12 кДа. Хемокины вырабатывают различные типы клеток: лейкоциты, тромбоциты, клетки эндотелия, эпителия, фиб-робласты и другие. Особенностью действия хемокинов является их способность осуществлять свою функцию через различные рецепторы, а индивидуальные рецепторы хемокинов, в свою очередь, могут связываться более чем с одним хемокином [9].
Целенаправленная миграция нейтрофилов и моноцитов, получившая название хемотаксиса, контролируется хемокинами. Но особая роль хемокинов в процессах репродукции обусловлена не только их участием в контроле направленного движения лейкоцитов, но также и вовлечением хемокинов в регуляцию воспаления, гемопоэза, противоопухолевой защиты, ангиогенеза [10]. По литературным данным повышение уровня хемокинов ассоциировано с развитием преждевременных родов [10, 11]. Однако пока еще нет единого мнения о механизмах действия этого класса цитокинов при преждевременных родах.
Цель работы: установить особенности содержания хемокинов на системном и локальном уровнях у женщин с угрожающими преждевременными родами.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Пациенты
Под наблюдением находились 81 беременная женщина в сроке гестации 32 — 36 недель, 65 из которых составили основную группу и 16 женщин — контрольная группа. Основная
группа, представленная беременными с клиникой угрозы прерывания в сроке гестации 32 — 36 недель, ретроспективно была разделена на 2 подгруппы: I подгруппа — пациентки, беременность которых закончилась своевременными родами (n = 47), II подгруппа — пациентки, беременность которых закончилась преждевременными родами (n = 18). Диагноз ставился на основании жалоб обследуемых, данных клинического обследования (влагалищного исследования) и данных ультразвукового исследования.
Материалом для исследования служила периферическая кровь из локтевой вены, образцы децидуальной оболочки и образцы амниотической жидкости.
Получение экстрактов децидуальной ткани
Экстракты децидуальной ткани получали следующим образом: децидуальную ткань срезали небольшими пластинами площадью до 3 см2 и отмывали от крови и от клеток тро-фобласта физиологическим раствором, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут. Кусочки децидуальной ткани подсушивали на фильтровальной бумаге, взвешивали и гомогенизировали с использованием гомогенизатора до однородной массы. К полученному гомогенату добавляли PBS в объеме, равном изначальному весу децидуальной ткани (на 1 г ткани — 1 мл PBS). Взвесь помещали в пластиковые пробирки Falcon и подвергали замораживанию при —20 °С в течение суток. Гомогенат размораживали, фильтровали через 8 слоев плотной марли и ультрацентрифугировали 30 мин при 4000 об/мин при температуре + 4 °С. Надосадочную жидкость разливали аликвотами и замораживали при —20 °С до проведения иммуноферментного анализа.
Получение образцов амниотической жидкости
Для исследования содержания хемокинов околоплодные воды, взятые при родах в количестве 1 мл, отбирали в сухую центрифужную пробирку и центрифугировали при 1500 об/мин 10 мин. Отделившуюся амнио-тическую жидкость аликвотами по 200 мкл разливали в пробирки типа Эппендорф и хранили до проведения исследования в холодильнике при —20° С.
Проведение иммуноферментного анализа (ИФА)
В образцах сыворотки крови, экстрактах децидуальной оболочки плаценты и в амнио-
Таблица 1. Особенности содержания хемокинов в сыворотке крови женщин с угрозой прерывания
беременности в сроке 32 — 36 недель
Показатель, пг/мл Контрольная группа (n=16) Основная группа (n = 65) I подгруппа (n = 47) II подгруппа (n=18)
FRACTALKIN 0,52±0,40 2,07+1,12 2,64+1,55 0,59 + 0,31
RANTES 9104,97+1414,69 17095,08 + 1139,27*** 17706,91 + 1425,39*** 15497,50+1755,76**
IL-8 99,21±53,70 58,12+15,09 70,81 + 19,44 6,79 + 2,85***,###
Примечание: п — число проведенных исследований;
'различия статистически достоверны относительно показателей контрольной группы (*р < 0,05; **р < 0,02; ***р < 0,01; **"р < 0,001);
"различия статистически достоверны относительно показателей I подгруппы беременных (#р < 0,05; ##р < 0,02; ###р < 0,01; ####р < 0,001).
Таблица 2. Особенности содержания хемокинов в децидуальной оболочке плаценты женщин с угрозой прерывания беременности в сроке 32 — 36 недель
Показатель, пг/мл Контрольная группа (n=19) Основная группа (n = 41) I подгруппа (n = 26) II подгруппа (n=15)
FRACTALKIN 6,30 + 0,97 6,05 + 0,66 5,36 + 0,82 7,26 + 1,08
RANTES 1778,38 + 149,57 2321,78+659,03 1682,34+118,21 3430,13 + 1791,71
IL-8 167,60+65,03 104,80+20,90 82,87+17,40 145,12 + 43,46
Примечание: n — число проведенных исследований.
тической жидкости определяли концентрацию хемокинов IL-8, RANTES и FRACTALKIN методом твердофазного иммунофермент-ного анализа (ИФА) с помощью коммерческих тест-систем. Содержание RANTES и FRACTALKIN оценивали с помощью коммерческих тест-систем «Bender Medsystems»' (Австрия). Уровень IL-8 определяли с помощью тест-системы производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург, Россия). Учет результатов проводили на ридере Multiscan EX Labsystams (Финляндия).
Статистическая обработка данных
Статистическая обработка данных проводилась с использованием прикладных программ Statistica 5.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Как видно из представленных в таблице данных, в периферической крови уровень FRACTALKIN у женщин с угрозой прерывания имел тенденцию к повышению и составил 2,07 ± 1,12, в то время как у беременных контрольной группы его уровень был 0,52 ± 0,40. Та же закономерность наблюдалась и у бере-
менных I подгруппы, где уровень FRACTALKIN составил 2,64 ± 1,55. При изучении содержания RANTES в периферической крови было выявлено достоверное повышение его содержания в основной группе, I и II подгруппах по сравнению с содержанием в сыворотке беременных контрольной группы (p < 0,001 в основной группе и I подгруппе, p < 0,02 во II подгруппе). При анализе содержания IL-8 отмечено, что у пациенток II подгруппы уровень этого хемокина был достоверно ниже
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.