ЖУРНАЛ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ, 2007, том 62, № 2, с. 170-174
^=ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ =
УДК 543.544
УДЕРЖИВАНИЕ АНАЛЬГИНА И АНЕСТЕЗИНА НА СОРБЕНТАХ РАЗНОЙ ПОЛЯРНОСТИ. АНАЛИЗ ТАБЛЕТОК "БЕЛЛАЛГИН" МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
© 2007 г. Г. Б. Голубицкий*, Е. В. Будко**, Е. М. Басова***, А. В. Костарной*, В. М. Иванов****
*ОАО "Фармстандарт-Лексредства" 305039 Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18 **Курский государственный медицинский университет 305004 Курск, ул. К.Маркса, 3 ***Международный университет природы, общества и человека "Дубна" 141980 Московская обл., Дубна, ул. Университетская, 19 ****Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова, химический факультет
119992 Москва, Ленинские горы Поступила в редакцию 31.10.2005 г.
Изучено влияние концентрации ацетонитрила, дигидрофосфата калия в подвижной фазе и рН подвижной фазы на удерживание анальгина и анестезина на сорбентах с привитыми октадецилсила-нольными группами Symmetry C18 и с нитрильными группами Nova-Pak CN HP. Показано, что при одинаковых условиях удерживание на сорбенте с привитыми нитрильными группами слабее. Разработана экспрессная и экономичная методика определения анальгина и анестезина при анализе таблеток "Беллалгин".
Таблетки "Беллалгин" серийно выпускаемый комплексный препарат анальгезирующего и анта-цидного действия, содержащий в качестве действующих веществ анальгин, анестезин, гидрокарбонат натрия и экстракт красавки (белладонны). По действующей нормативной документации (НД) каждый компонент определяют отдельно. Анальгин определяют иодометрически, анестезин - нит-ритометрически, гидрокарбонат натрия ацидимет-рически, а содержание алкалоидов, содержащихся в экстракте красавки, определяют экстракционно-спектрофотометрическим методом в виде ионного ассоциата с бромфеноловым синим в хлороформе. Сильно отличающиеся физико-химические свойства компонентов и разные их количества в таблетке не позволяют определить содержание всех действующих веществ по одной методике. Но и методика, позволяющая одновременно определять два из них, например, анальгин и анестезин, значительно упростила и ускорила бы анализ препарата.
Разработка такой методики явилась практически значимой научно-производственной задачей, которой и была посвящена настоящая работа. В качестве метода анализа выбрана ВЭЖХ как наиболее приемлемый метод для смеси органических веществ, поглощающих свет в УФ-области спектра.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ) и растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для хроматографии осч сорт 0 (Криохром, Россия) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18.2 МОм/см, полученную на установке Direct Q (Millipore). В качестве образцов сравнения (РСО) для определяемых лекарственных веществ использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям НД. Все остальные использованные реактивы имели квалификацию не ниже ч.д.а.
Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографе Waters Alliance 2695 с ди-одно-матричным детектором Waters 2996. "Мертвый" объем хроматографа по паспорту менее 0.650 мл. Использовали колонку с обращенно-фа-зовым сорбентом Symmetry C18 5.0 мкм (Waters) и колонку с сорбентом с привитыми нитрильными группами Nova-Pak CN HP 4.0 мкм (Waters). Длина колонок 150 мм, внутренний диаметр 3.9 мм.
Приготовление растворов. Для выполнения анализа 20 анализируемых таблеток взвешивали на аналитических весах и находили среднюю массу таблетки. Около 0.1600 г (точная навеска) рас-
Усл. ед.
X, нм
Рис. 1. Спектры поглощения анальгина (1) и анестезина (2) (30 об.% CH3CN в 0.025 М KH2PO4 при pH 4.8).
тертых таблеток 10 мин встряхивали в мерной колбе емк. 100 мл в 20 мл смеси (1:3) ацетонит-рил-вода, разбавляли водой до метки и перемешивали. Параллельно готовили раствор PCO, содержащий 0.050 г анальгина, 0.050 г анестезина и 0.30 г Na2SO3 в 100 мл смеси (1:19) ацетонитрил-во-да. Все растворы фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонитрильных растворах).
Проведение анализа, расчет результатов. Для
каждого испытуемого раствора и раствора PCO получали не менее трех хроматограмм. В качестве ПФ использовали раствор, содержащий 10 об. % CH3CN и 0.025 М KH2PO4. Объем инжектируемых проб и расход ПФ составляли 5.0 мкл и 1.0 мл/мин соответственно. Определяемые вещества детектировали при 220 нм.
Рассчитывали площади пиков компонентов и находили количество каждого компонента в таблетках по формуле:
X = S ит ст т с
S сТ т н
где SH и SCT - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и PCO соответственно; тст, тс и тн - массы стандарта определяемого вещества в растворе PCO, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток, взятой для
приготовления испытуемого раствора, соответственно^ граммах).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Оптимальные условия анализа. Рабочая длина волны. Спектры поглощения анальгина и анестезина в ПФ (30 об. % CH3CN в 0.025 М КН2Р04), зарегистрированные диодно-матричным детектором хроматографа в режиме on line, представлены на рис. 1. Поскольку анальгин и анестезин не имеют максимума поглощения, совпадающего по длине волны, оптическую плотность измеряли при 220 нм (один из максимумов анестезина и плато анальгина).
Влияние параметров ПФ. Используемые хро-матографические колонки ранее применяли при анализе пятикомпонентных препаратов "Пентал-гин" [1], "Пенталгин Н" [2] и "Пенталгин ICN" [3]. Колонка, заполненная сорбентом с привитыми нитрильными группами, обладает меньшим удерживанием по отношению к некоторым лекарственным веществам, что позволяет использовать ее для более экономичного и экспрессного анализа, чем колонку с обращенно-фазовым сорбентом С18. Представляло интерес сравнить характеристики удерживания анальгина и анестезина на колонках этого типа для обоснования оптимальных условий анализа таблеток "Беллалгин" методом ВЭЖХ. На колонке с сорбентом С18 изучена зависимость удерживания анальгина и анестезина от концентрации ацетонитрила и
ГОЛУБИЦКИИ и др.
172
Таблица 1. Зависимость удерживания (lnk) анальгина, анестезина и сульфит-ионов от концентрации ацето-нитрила в подвижной фазе (колонка Nova-Pak CN HP, 4 мкм; 0.025 М KH2PO4, рН 4.8)
c(CH3CN), об. % Анальгин Анестезин Сульфит-ионы
2 0.36 1.92 -0.89
4 0.13 1.72 -0.88
6 -0.01 1.57 -0.91
8 -0.10 1.45 -0.92
10 -0.19 1.34 -0.93
12 -0.26 1.24 -0.94
14 -0.32 1.15 -0.95
16 -0.38 1.04 -0.96
18 -0.44 0.93 -0.98
20 -0.50 0.84 -1.00
Таблица 2. Зависимость удерживания (lnk) анальгина, анестезина и сульфит-ионов от концентрации KH2PO4 в подвижной фазе (колонка Nova-Pak CN HP, 4 мкм; 5 об. % CH3CN, рН 4.8)
c(KH2PO4), М Анальгин Анестезин Сульфит-ионы
0.000 1.63 -4.96 -1.47
0.005 1.62 -1.31 -0.52
0.010 1.62 -1.07 -0.20
0.015 1.62 -0.97 -0.07
0.020 1.62 -0.91 0.01
0.025 1.62 -0.88 0.06
0.030 1.63 -0.86 0.08
0.035 1.63 -0.85 0.11
0.040 1.62 -0.83 0.13
0.045 1.61 -0.83 0.15
0.050 1.61 -0.82 0.16
КН2Р04 в ПФ, а на колонке с сорбентом с приви- Влияние концентрации ацетонитрила в ПФ тыми нитрильными группами в дополнение к на- на удерживание (1пк) анальгина (1) и анестезина званным факторам, изучено влияние рН ПФ. (2) для колонки с сорбентом С18 приведено ниже.
c(CH3CN), об. % 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
ln k (1) 2.8 2.2 1.7 1.4 1.0 0.7 0.4 0.2 -0.2 -0.5
ln k (2) -0.1 -0.8 -1.3 -1.7 -2.1 -2.5 -2.7 -2.9 -3.0 -3.0
В качестве "неудерживаемого компонента" выбран сульфит-ион, который фактически не удерживается только при отсутствии КН2Р04 в подвижной фазе ^уд = 1.008 мин). Эта величина использована для расчета коэффициентов емкости.
Удерживание анальгина и анестезина на колонке с сорбентом С18 значительно сильнее, чем для нитрильного сорбента. Так, если для получения коэффициента емкости анестезина, равного 1, на колонке с сорбентом С18 в ПФ должно содержаться 40 об. % СН3С^ то на колонке с нит-рильным сорбентом для такого же удерживания необходимо только 16 об. % CH3CN (табл. 1). Для
c(KH2PO4), M 0 0.005 0.010 0.015 0.020 lnk (1) 0.17 0.16 0.17 0.17 0.18
lnk (2) -5.2 -1.8 -1.2 -1.2 -1.2
коэффициента емкости 1.5 эти величины составляют 33 и 7 об. % соответственно. Таким образом, сорбент с привитыми группами -CN значительно сокращает продолжительность анализа при одинаковом содержании органического модификатора ПФ или позволяет экономить дорогостоящий органический растворитель при равной продолжительности определения.
Влияние концентрации КН2Р04 на удерживание анальгина и анестезина аналогично для обоих типов изученных колонок и для колонки Symmetry C18 приведено ниже, а для колонки Nova-Pak CN HP в табл. 2.
0.025 0.030 0.035 0.040 0.045 0.050 0.055 0.18 0.18 0.18 0.17 0.18 0.18 0.17 -1.3 -1.3 -1.3 -1.3 -1.3 -1.2 -1.3
В обоих случаях концентрация КН2Р04 практически не влияет на удерживание анестезина. Это связано с нейтральной природой молекулы анестезина в изученном диапазоне рН. Анальгин и сульфит - анионы, поэтому механизм их удерживания иной. Известно [4], что удерживание ионов возрастает с ростом концентрации одноименно заряженных ионов в ПФ. Следовательно,
как показано нами [1], удерживание анальгина и сульфит-иона должно возрастать при повышении концентрации КН2Р04 в ПФ. При отсутствии соли в ПФ удерживание этих веществ минимально, возрастает при изменении концентрации КН2Р04 от 0 до 0.015 М, а дальнейшее добавление фосфата не влияет.
ln k 1.4
0.4
-0.6
-1.6
-2.6 -3.6 -4.6
2.62 3.02
6.66
pH
Рис. 2. Зависимость удерживания анальгина (1), анестезина (2) и сульфит-ионов (3) от рН подвижной фазы.
Колонка Nova-Pak CN HP 4 мкм, 5 об.% CH3CN, 0.025 M KH2PO4.
Влияние pH ПФ на удерживание компонентов изучали только для колонки с нитрильным сорбентом, как более перспективной для данного анализа с точки зрения экспрессности и экономичности. Полученные зависимости представлены на рис. 2. При рН от 2.6 до 4.2 удерживание анестези
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.