научная статья по теме УГЛЕВОД-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СВОЙСТВА С-РЕАКТИВНОГО БЕЛКА Биология

Текст научной статьи на тему «УГЛЕВОД-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СВОЙСТВА С-РЕАКТИВНОГО БЕЛКА»

12. Porter E. M., VanDam E., Valore E. V., Ganz T. Infect. Immun. 1997, 65, 2396-2401.

13. Lehrer R. I., Rosenman M., Harwig S. S. et al. J. Immunol. Methods. 1991, 137, 167-173.

14. Peeters T. J., Vantrappen G. R. Clin. Chim. Acta. 1977,74,217-225.

15. Harwig S. S., Ganz T., Lehrer R. I. Methods Enzy-mol. 1994, 236, 160-172.

CHARACTERIZATION OF CATIONIC FRACTIONS OF ANTIMICROBIAL PROTEINS AND PEPTIDES OF HUMAN MILK

Fateeva S. E., Kurdyumova I. V., Leonova L. E.

Saint-Petersburg State University, St. Petersburg, Russia

Biologically active proteins and peptides of various life systems and organisms from bacteria to mammals play a significant role in the survival among pathogenic and opportunistic microorganisms and are essential components of the innate immune system. The antimicrobial proteins and peptides such as the host defense factors, play an important role in the formation of the immune system of infants. Biologically active components of milk are so numerous and have so many functions, they are highly important in the studies of the formation of immunity of newborns, which opens up opportunities for the development of medicines necessary for the prophylaxis and therapy of newborns from the first days of life. This particular study is based on the fractionation of human milk, whey and desalted extract of human milk by acidic-urea preparative electrophoresis. The most mobile fraction possesses high antimicrobial activity contained lysozyme. In less mobile electrophoretic high molecular weight fractions were identified proteins complexes with human alpha-defensins (HNP-1-4), lactoferrin, lactoperoxidase and myeloperoxidase.

Key words: host defense peptides, antimicrobial proteins and peptides, innate immunity, human milk

УГЛЕВОД-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СВОЙСТВА С-РЕАКТИВНОГО БЕЛКА

Чикаловец И. В.1, КотовА.С.2, Черников О. В.1, Молчанова В. И.1,

Лукьянов П. А.2

'Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г. Б. Елякова ДВО РАН;

Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия

Изучено взаимодействие С-реактивного белка (СРБ) из сывороток крови больных ИБС, сепсисом и онкопациентов с некоторыми гликопротеинами плазмы. Установлено, что гли-козилированные формы СРБ по-разному взаимодействуют с фибронектином, ламинином, фетуином, асиалофетуином и иммуноглобулином G, проявляя углеводную специфичность к терминальным остаткам галактозы и углеводным цепям муцинового типа. Это связывание ингибировалось моно- и дисахаридами, что является подтверждением функциональной роли СРБ как лектина.Таким образом, очевидно, что структурные изменения, происходящие в молекуле СРБ при различных патологических процессах, играют существенную роль в его углевод-связывающих свойствах и существенны для его активности in vivo.

Ключевые слова: С-реактивный белок, гликозилирование, лектин, углевод-белковое взаимодействие

СРБ - мультифункциональный белок острой фазы, играющий важную роль в аутоиммунных, воспалительных и защитных про-

цессах. Роль СРБ является довольно сложной, точная функция этого белка в организме до сих пор остается неясной. Известно, что СРБ об-

Тематический выпуск «Российский научный форум на Урале»

421

ладает иммуномодулирующими свойствами. Показано, что СРБ связывается с некоторыми гликопротеинами плазмы как лектин, проявляя углеводную специфичность к терминальным остаткам галактозы [1]. Ранее полагалось, что субъединицы СРБ не гликозилированы. Позднее появились данные о его гликозили-ровании при ряде заболеваний (туберкулез, лейкемия, саркома) [2]. Мы установили, что СРБ пациентов с неспецифическим язвенным колитом [3], ишемической болезнью сердца (ИБС) [4] и сепсисом [5] содержит углеводные цепи. Функциональное значение гликозили-рования СРБ пока не выяснено.

Целью данного исследования было сравнительное изучение углевод-связывающих свойств различных гликозилированных форм С-реактивного белка.

Методы исследования. Сыворотки крови были получены в ГБУЗ ПККБ № 1 г. Владивостока. Концентрацию СРБ определяли методом иммуноферментного анализа с помощью наборов СРБ-ИФА-БЕСТ (высокочувствительный) (Вектор-Бест, Россия). Связывание СРБ с различными плазматическими гликопротеинами определяли, как описано в [2]. Параллельно исследовали ингибирование связывания. Результаты обрабатывали в программе Excel.

Результаты и обсуждение. Исследование показало, что структурные изменения, происходящие в молекуле СРБ при различных патологических процессах, играют существенную роль в его углевод-связывающих свойствах. Связывание СРБ пациентов с ИБС с фибронектином было более, чем в 1,3 раза выше, по сравнению с СРБ при онкопатологии и сепсисе. В то же время, связывание СРБ при онкозаболеваниях и сепсисе было примерно одинаковым. Заметное увеличение взаимодействия СРБ больных ИБС наблюдалось и с другим гликопротеином межклеточного матрикса - ламинином. Различия в гликози-лировании оказались критическими и для связывания с человеческими антителами. Так, при ИБС наблюдалось увеличение связывания СРБ с иммуноглобулином G в 1,47 и 1,35 раза по сравнению с онкологией и сепсисом.

Несколько другую закономерность можно наблюдать при определении взаимодействия с фетуином и асиалофетуином. Самое большое связывание в этом случае наблюдалось с СРБ онкопациентов. Известно, что фетуин наряду

с N-гликанами, содержит и О-связанные оли-госахаридные цепи муцинового типа, в состав которых входят остатки Gal и GalNAc и, которые, как правило, заканчиваются сиаловыми кислотами [6]. Можно предположить, что СРБ при онкопатологии с большей аффинностью взаимодействует с цепями муцинового типа, причем связывание с асиалофетуином увеличивается более чем в 2 раза для всех образцов СРБ, т.к. десиалирование приводит к уменьшению экранирования концевых остатков Gal. При сепсисе отмечено уменьшение связывания СРБ со всеми исследуемыми гликопротеинами. Известно, что при сепсисе на 50% увеличивается фукозилирование внешних цепей олигосахаридов [7] при этом, вероятно, происходит экранирование терминальных остатков Gal.

50% ингибирование углевод-связывающей активности СРБ различными потенциальными ингибиторами достигалось во всех случаях в пределах концентраций 4 мМ (Gal, GalNAc) и 8 мМ (лактоза). Это является подтверждением функциональной роли СРБ как лектина.

Таким образом, очевидно, что различия в гликозилировании СРБ существенны для его активности in vivo и могут приводить к специфическому связыванию с вирусами, бактериями и другими патогенами и, возможно, могут влиять на биологическую активность через активацию альтернативных путей комплемента, агглютинацию, связывание с лимфоцитами, хроматином, гистоном и рибонуклеотидами.

Работа выполнена при поддержке Программы фундаментальный исследований ДВО РАН «Дальний Восток» П42.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Kottgen E., Hell B., Kage A., Tauber R. J. Immunol. 1992, 149, 2, 445-453.

2. Das T., Mandal Ch., Mandal C. Glycoconj. J., 2004, 20, 537-543.

3. Чикаловец И. В., Скиба М. А., Черников О. В., Молчанова В. И., Лукьянов П. А. Вестн. Урал. мед. акад. науки 2009, 2/1 (24), 184-185.

4. Чикаловец И. В., Черников О. В., Молчанова В. И. Тихоок. мед. журн. 2012, 1, 87-90.

5. Чикаловец И. В., Черников О. В., Кондраши-на А. С. и др. Фундаментальные исследования 2013, 6 (2), 328-331.

6. Spiro R. G., Bhoyroo V. D. J. Biol. Chem. 1974, 249, 18,5704-5717.

7. Higai K., Azuma Y., Aoki Y., Matsumoto K. Clin. Chim. Acta 2003, 329, 117-125.

CARBOHYDRATE-BINDING PROPERTIES OF C-REACTIVE PROTEIN Chikalovets I. V.1, Kotov A. S.2, Chernikov O. V.1, Molchanova V. I.1, Lukyanov P. A.1

'G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry FEB RAS;

2Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia

The interaction of C-reactive protein (CRP) from ischemic heart disease, sepsis and cancer patients with some plasma glycoproteins was studied. Found that glycosylated forms of CRP interact differently with fibronectin, laminin, fetuin, asialofetuin and immunoglobulin G, demonstrating carbohydrate specificity for terminal galactose residues and mucin-type carbohydrate chains. This binding was inhibited by mono- and disaccharides, confirming the functional role of CRP as a lectin. Thus, it appears that structural changes in CRP molecule during various pathological processes play an important role in its carbohydrate-binding properties and are essential for its activity in vivo.

Key words: C-reactive protein, glycosylation, lectin, carbohydrate-protein interaction

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА НЕОНАТАЛЬНОЙ СМЕРТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ С ЭКСТРЕМАЛЬНО НИЗКОЙ МАССОЙ ТЕЛА

Чистякова Г. Н.

ФГБУ «Научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Екатеринбург, Россия

С целью определения наиболее информативных клинико-лабораторных показателей риска летального исхода новорожденных с экстремально низкой массой тела, проведено исследование в пуповинной крови сывороточных и внутриклеточных цитокинов, белков острой фазы у 102 новорожденных родившихся на 22-31 неделе беременности, из них 23 ребенка умерших в период наблюдения (основная группа) и 79 младенцев, выписанных из стационара живыми (группа сравнения). Установлено, что летальный исход детей с ЭНМТ связан с повышением уровня снижением содержания ^-4 в сыворотке

пуповинной крови. Вышеназванные сдвиги у детей основной группы сопровождались повышением уровня гаптоглобина и прокальцитонина, развитием генерализованной инфекции и тяжелой неврологической патологии. Таким образом, определение уровня ^-4 и гаптоглобина в пуповинной крови может служить дополнительным критерием в оценке выживаемости новорожденных с ЭНМТ в период выхаживания в условиях стационара.

Ключевые слова: новорожденные, экстремально низкая масса тела, цитокины

Актуальность. Дети с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ), вес которых при рождении менее 1000 г, составляют около 0,5% от всех живорожденных. Доля выживших детей повышается с увеличением гестационного возраста: Среди детей 22 недель гестации выживают до 2%, 23 недель - до13%, 24 недел

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком