ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК, 2015, том 462, № 1, с. 103-106
БИОХИМИЯ, БИОФИЗИКА, МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ
УДК 616.36-002:615.27:615.015.13
ВЛИЯНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА "КСИМЕДОН" НА ВОССТАНОВЛЕНИЕ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ
© 2015 г. А. Б. Выштакалюк, Н. Г. Назаров, А. Г. Порфирьев, И. В. Зуева, О. А. Миннеханова, О. В. Маятина, В. С. Резник, В. В. Зобов, академик РАН Е. Е. Никольский
Поступило 29.01.2015 г.
БО1: 10.7868/80869565215130241
Отечественный лекарственный препарат Кси-медон (1-(В -оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2-оксопиримидон, регистрационный номер ЛС-000045) известен как средство с выраженным регенеративным и репаративным действием [1], которое с высокой эффективностью применяется в клинической практике для лечения ожогов и для заживления ран в постоперационный период. Результаты клинических исследований последних лет позволили выявить новые показания к применению Ксимедона: склеродермия [2], псориаз [3], обструктивная болезнь легких [4], язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки [5], остеомиелит [6, 7], гнойно-воспалительные заболевания [8]. Показано, что Ксимедон оказывает влияние на ключевые биохимические процессы на клеточном и субклеточном уровнях, активируя аденилатциклазу, что приводит к быстрому накоплению цАМФ в клетке, к стимуляции обменных процессов и, в первую очередь, биосинтеза белка.
Препарат воздействует также на систему регуляции активного транспорта кальция в клетке, влияет на процессы тканевого дыхания, перекис-ного окисления липидов и активность антиокси-дантной системы [9].
Поскольку неинфекционные и инфекционные заболевания печени в последнее время приобретают все большую социальную значимость, а на современном фармацевтическом рынке гепа-топротекторов нет ни отечественных, ни импортных препаратов, которые бы полностью удовлетворяли всем необходимым требованиям для лекарств данной фармакологической группы [10,
Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского научного центра Российской Академии наук, Казань E-mail: alex.vysh@mail.ru
Казанский (Приволжский) федеральный университет
11], поиск эффективных гепатопротекторов является актуальной задачей. Среди существующих лекарств для лечения патологии печени более половины составляют средства растительного происхождения, причем наиболее распространенными среди них являются препараты на основе рас-торопши пятнистой [12]. Учитывая литературные сведения о препарате Ксимедон и полученные нами ранее данные об уменьшении признаков поражения печени четыреххлористым углеродом при профилактическом введении Ксимедона [13], можно предположить, что этот препарат окажется эффективным и при восстановительной терапии печени.
Таким образом, целью настоящего исследования было изучение терапевтической эффективности Ксимедона на модели токсического повреждения печени, индуцированного СС14.
Работа выполнена на 111 беспородных половозрелых крысах обоего пола. Для индукции токсического повреждения печени [14] животным вводили четыреххлористый углерод СС14, разбавленный 1 : 1 растительным маслом, в течение 3—4 дней, подкожно, в дозе 2 мл/кг (схема 1) или однократно, перорально, в дозе 4 мл/кг (схема 2). Для терапевтического воздействия крысам опытных групп, начиная со следующего дня после индукции токсического повреждения печени по схеме 1, в первом опыте вводили Ксимедон в течение 5 дней в дозах 20, 45 и 70 мг/кг. Во втором опыте — в течение 19 дней в дозах 5, 10 и 50 мг/кг, выводя животных из опыта на 10-й и 20-й дни для взятия крови и получения гистологического материала. После введения СС14 по схеме 2 в третьем опыте Ксимедон вводили в течение 3 дней в дозах 10 и 50 мг/кг. Животные контрольных групп Кси-медон не получали. По окончании введения препаратов крысы получали эфирный наркоз с соблюдением "Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" [15].
104 ВЫШТАКАЛЮК и др.
Таблица 1. Биохимические показатели крови у крыс
Группа крыс АлАТ, ед./л АсАТ, ед./л Коэффициент де Ритиса ЩФ, ед./л n
Интактные 37.38 ± 2.69 148.06 ± 8.60 4.45 ± 0.29 311.5 ± 25.0 44
Показатели в 1-м опыте (индукция повреждения печени по схеме 1)
Контроль, 2-й день Контроль, 6-й день Ксимедон 20 мг/кг, Ксимедон 45 мг/кг, Ксимедон 70 мг/кг,
6-й день 6-й день 6-й день
131.49 ± 22.43 p < 0.001
89.13 ± 13.97 p < 0.001
69.25 ± 19.63 p < 0.01
79.01 ± 15.54 p < 0.001
77.00 ± 13.81 p < 0.001
238.08 ± 15.27 p < 0.001
168.52 ± 14.62
126.11 ± 22.96
185.06 ± 30.79
217.06 ± 8.92 p < 0.05
2.39 ± 0.51 p < 0.05
2.37 ± 0.32 p < 0.001
2.27 ± 0.89 p < 0.05
2.39+ 0.11 p < 0.05
3.00 ± 0.50
433.2 p <
349.1
430.2 476.9 347.1
± 65.2 0.05
± 26.4 ± 84.1 ± 135.5 ± 28.9
Показатели во 2-м опыте (индукция повреждения печени по схеме 2)
14 13
3
4 3
Контроль, 4-й день 135.69 ± 25.27 221.20 ± 35.96 1.73 ± 0.25 453.1 ± 84.1 4
p < 0.001 p < 0.05 p < 0.01
Ксимедон 10 мг/кг, 4-й день 99.22 ± 17.56 209.86 ± 14.63 2.16 ± 0.23 401.4 ± 50.2 3
p < 0.001
Ксимедон 50 мг/кг, 4-й день 42.77 ± 14.01 149.57 ± 8.48 3.99 ± 1.50 136.3 ± 31.3 3
Примечание. М± т, п — число животных в группе; достоверность различий — при сравнении с показателями интактных крыс.
Затем у них брали кровь для биохимических исследований и извлекали печень для оценки морфологических изменений. В сыворотке крови определяли аланинаминотрансферазу (АлАТ), аспартатаминострансферазу (АсАТ), щелочную фосфатазу (ЩФ) на анализаторе RX Daytona ("Randox", Великобритания) и рассчитывали коэффициент де Ритиса (КР) как отношение АсАТ/АлАТ. Морфологические изменения печени изучали путем гистологического анализа (фиксация 10%-м формалином, заливка в парафин, окраска гематоксилин-эозином). Микрофотосъемку проводили на установке: микроскоп AxioImager M2, цифровая камера AxioCamHRc ("Zeiss", Германия) и персональный компьютер. Исследованные параллельно показатели интактных животных были приняты за норматив.
Полученный цифровой материал обрабатывали с помощью программы Origin 6.1, выборки сравнивали по критерию t Стьюдента.
Исследование состояния животных на следующий день после окончания введения CCl4 по схеме 1 выявило статистически достоверное повышение АлАТ, АсАТ, ЩФ и снижение КР по сравнению с интактными животными (табл. 1). Наиболее существенно (в 3.6 раза) повышалась активность АлАТ. Выявленные изменения биохимических показателей крови, а также результаты исследования гистологических срезов печени крыс, подвергнутых воздействию CCl4 по схеме 1,
подтверждают формирование токсического повреждения печени у животных.
Исследование состояния крыс в контрольной группе в динамике выявило, что на 6-й день отклонение от нормы (показатели интактных крыс) исследуемых параметров уменьшается по сравнению с изменениями, обнаруженными сразу после воздействия СС14: остается повышенным уровень АлАТ и пониженным — КР, в то время как уровни АсАТ и ЩФ приходят в норму. Изменения показателей крови, выявленные в контрольной группе на 6-й день, свидетельствуют о продолжающихся деструктивных нарушениях в печени (табл. 1).
Результаты исследования биохимических показателей крови на 10-й и 20-й дни после воздействия СС14 не выявили достоверных различий показателей в контрольной группе по сравнению с таковыми интактных животных, что свидетельствует о купировании патологического процесса деструкции гепатоцитов за счет естественных компенсаторных реакций организма. Поэтому значения биохимических показателей крови на поздних сроках исследования в табл. 1 не приводили.
При введении Ксимедона по схеме 1 на 6-й день мы не наблюдали статистически достоверного снижения содержания АлАТ в плазме крови по сравнению с контрольными значениями при всех исследуемых дозах препарата, что свидетельствует об уменьшении деструктивных изменений и улучшении функционального состояния пече-
ВЛИЯНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА "КСИМЕДОН"
105
г,Лии*!^' ■ ЯУд^." 1 ,
50 мкм > 1 1
Рис. 1. Дистрофические изменения гепатоцитов и нарушение структурной организации печени у крыс контрольной группы на 6-й день после воздействия СС14 по схеме 1. Здесь и на рис. 2 увеличение х600.
Рис. 3. Область печени, пораженная стеатозом, у крыс контрольной группы на 10-й день после воздействия СС14 по схеме 1. Здесь и на рис. 4 увеличение х30.
ни (табл. 1). На 10-й и 20-й дни после воздействия СС14 в опытных группах, получавших Ксимедон, так же как и в контроле, исследуемые биохимические показатели также не отличались от соответствующих значений интактных животных.
Исследование гистологической картины печени подтвердило уменьшение патологических изменений и ускорение регенерации клеток паренхимы органа под влиянием Ксимедона. На гистологических препаратах контрольной группы крыс (рис. 1) в опыте по схеме 1 на 6-й день наблюдали гидропическую и зернистую дистрофию с капельной жировой инфильтрацией цитоплазмы клеток, нарушение дольчатого строения с небольши-
Рис. 2. Уменьшение дистрофических изменений ге-патоцитов и нормализация структурной организации печени в группе, получавшей Ксимедон в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней после воздействия ССЦ по схеме 1.
Рис. 4. Уменьшение области стеатоза у крыс при введении Ксимедона в дозе 5 мг/кг в течение 9 дней после воздействия ССЦ по схеме 1.
ми участками жирового перерождения (стеатоза). В соответствующих опытных группах проявления дистрофических изменений и нарушений структурной организации были менее выраженными (рис. 2).
В опыте по схеме 2 на 10-й день в контрольной группе наблюдали стеатоз с локализацией участков повреждения у центра печеночной дольки, вокруг центральных кровеносных сосудов (рис. 3). Определение площади нормальной, патологически не измененной ткани относительно всей площади гистологического среза в поле зрения микроскопа у животных контрольной группы на 10-й день после воздействия СС14 показало,
106
ВЫШТАКАЛЮК и др.
что доля здоровой ткани составляет лишь 65.4 ± ± 2.9% (рис. 2). Данный показатель не отличался от соответствующих значений на 2-й день после воздействия
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.