ВЛИЯНИЕ ПАРАЗИТАРНЫХ ИНВАЗИЙ НА РЕЗУЛЬТАТЫ ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЯ КЛЕТОК КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДЕТЕЙ И ДЕТЕЙ С АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ
ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
Куропатенко М.В.1, Кудрявцев И. В.1, Азамова З.Ш.1, Платонова Н.Б.1,2, Нишева Е.С.1
'НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН; 2Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет, Санкт-Петербург, Россия
В детском возрасте сходную распространённость имеют различные варианты аллергической патологии (бронхиальная астма, атопический дерматит, аллергический ринит и их сочетания) и гельминтно-протозойные инфекции (энтеробиоз, аскаридоз и лямблиоз). И те, и другие заболевания сопровождаются существенными реакциями со стороны иммунной системы. Целью представленной работы было исследование фенотипических особенностей иммунокомпетентных клеток в крови детей с аллергической патологией, в зависимости от наличия или отсутствия паразитарной инвазии. С показателями в группе здоровых (34 чел) сравнивались результаты проточной цитометрии условно здоровых ин-вазированных детей (22 чел), детей с аллергопатологией (37 чел) и детей с сочетанием аллергических заболеваний и паразитарной инвазии (23 чел). Показано, что при сочетанной патологии провоспалительная направленность иммунных реакций была более выражена, чем при одном из рассматриваемых заболеваний.
Ключевые слова: фенотипы иммунных клеток, паразитарные инвазии, дети с аллергией
Введение. Возбудители гельминтно-прото-зойных инфекций относятся к облигатным биоэкологическим факторам окружающей среды и неизменно сопровождают жизнь человека с момента его появления на земле в эволюционной цепочке видов. Человек сталкивается с указанной группой инвазионных агентов с первых дней и в течение всей последующей жизни. Наиболее часто и практически повсеместно в детском возрасте диагностируются так называемые «просветные» парази-тозы - нематодозы энтеробиоз и аскаридоз и протозооноз лямблиоз - конечным местом обитания возбудителей которых служат различные отделы пищеварительного тракта. У инвазированного ребёнка, особенно при персистировании инвазии, многоплановые системные негативные эффекты воздействия инвазионного агента на иммунную, пищеварительную и детоксикационную системы, могут приводить к срыву защитных механизмов, ослаблению сопротивляемости и утяжелению течения имеющихся заболеваний.
Ответная реакция на внедрение паразитарного агента в значительной степени зависит от исходного состояния здоровья организма хозяина, его генетических характеристик и активности его иммунной системы. На развитие антипаразитарного ответа хозяина влияют также интенсивность инвазии, первичность или повторность встречи с конкретным инвазионным агентом, его вирулентность, имму-ногенность и ряд других свойств [1]. Наиболее важными особенностями при заболевании гельминтно-протозойными инфекциями являются приобретенная иммуносупрессия и слабая специфичность антипаразитарного иммунного ответа, обусловленная гетерогенностью паразитарных антигенов и постоянным обновлением антигенных вариантов популяций паразита. Иммунологический статус при этом отражает совокупность свойств иммунной системы хозяина и совершенство приспособительных реакций паразита [2].
Иммуногенетика многих, особенно про-светных, паразитозов и сложный комплекс
иммунопатологических сдвигов, которыми сопровождаются все гельминтно-протозойные инфекции до сих пор остаются мало изученными. Ранее показано, что паразитозы могут сопровождаться разными типами иммунных реакций, а борьба с «просветными» паразитами требует объединенных усилий гуморального и клеточного иммунитета [3]. У детей, страдающих различными проявлениями аллергической болезни (АБ), такими как атопический дерматит (АД), аллергический ринит (АР), бронхиальная астма (БА) и их сочетания, сенсибилизация и активация комплекса защитных реакций в ответ на внедрение в организм паразитарного агента, наслаиваются на имеющиеся иммунные процессы, обусловленные основной аллергической патологией. Единой точки зрения на характер и направленность происходящих при этом иммунологических сдвигов в состоянии больного АБ нет. Данных, позволяющих дифференцировать фенотипические изменения в спектре иммунокомпетентных клеток в крови детей с аллергической патологией, в зависимости от наличия или отсутствия паразитарной инвазии, в доступной литературе не найдено.
Материал и методы. В представленной работе приводится сравнительный анализ результатов иммунофенотипирования клеток цельной периферической крови детей трёх групп. В первую группу (I гр) вошли условно здоровые инвазированные дети (22 чел.; средний возраст 7,2 (3,0^7,1) лет), посещающие группы общей физической подготовки (ОФП) в детской спортивной школе Выборгского р-на Санкт-Петербурга, которые не предъявляли жалоб и не имели других установленных заболеваний, но у которых было выявлено заражение одним из трех паразитов: Enterobius vermi-cularis, Ascaris lumbricoides, Giardia intestinalis. Во вторую группу (II гр) включались дети с наличием АД, АР, БА и их сочетанием (37 чел.;
6.2 (3,8^8,7) лет), у которых в течение двух лет гельминтно-протозойные инвазии (ГИ) отсутствовали. В третью группу (III гр) вошли дети с сочетанным заболеванием АБ и ГИ (23 чел.; 5,5 (3,6^8,1) лет). Сравнение результатов иммунофенотипирования клеток крови детей трёх групп проводилось с показателями контрольной группы (IV гр), в которую вошли здоровые дети не спортсмены из групп ОФП той же районной спортивной школы (34 чел.;
6.3 (4,8^8,7) лет). Возрастные отличия групп были статистически не значимы.
Содержание различных фенотипов лимфоцитов определяли в образцах цельной периферической крови, забираемой в пробирку с К2-ЭДТА, с помощью 8-канального (не надо) проточного цитометра Navios. Для окрашивания клеток использовали составные панели моноклональных антител, меченых FITC, PE, ECD и PC5 (Beckman Coulter, США). Для удаления эритроцитов пробоподготовку проводили по безотмывочной технологии с использованием лизирующего раствора OptiLyse C. Популяцию лимфоцитов выделяли при помощи двойного «иммунологического» гейтирования с оценкой параметров малоуглового и боковому светорассеянию, а также уровня экспрессии пан-лейкоцитарного маркера CD45, анализируя в каждой пробе не менее 10000 лимфоцитов. Для проверки однородности групп применялся критерий х2 (с учётом поправки Йетса) с проверкой выполнения ограничений Кокрейна. Гипотеза об однородности групп принималась на уровне а=0,05. Проверка нормальности распределения количественных показателей показала, что в большинстве случаев распределение не являлось нормальным, в связи с чем количественные данные были представлены в виде медианы Ме (Q25^Q75) с указанием в скобках 25% и 75% персенти-лей (табл.). Для сравнения количественных показателей вычислялся непараметрический критерий Манна-Уитни Zт с поправкой Йетса. Полученные значения Zт критерия сравнивали с критическими значениями для уровня значимости 5% (р=0,05). Нулевая гипотеза об отсутствии различий принималась, если значение выборочного Z^g было меньше Z^p^ критического.
Результаты и обсуждение. При сравнении соотношения клеток крови разных фенотипов у здоровых (IV гр) и условно здоровых инва-зированных детей (I гр) было показано, что наличие в организме инвазии сопровождается более низким относительным содержанием общей популяции Т-лимфоцитов (CD3+) ^т=1,978; p=0,044) и более низким относительным содержанием цитотоксических Т-клеток (CD3+CD8+) ^т=2,135; p=0,027). Незначительное уменьшение% указанных Т-клеток происходило с параллельным увеличением относительного содержания у инвазированных детей 1гр. количества В-клеток (CD 19+) ^т=2,135; p=0,027) и относительного и абсолютного содержание В-1 лимфоцитов (CD19+CD5+)
^т=2,135; р=0,027). Увеличение содержания В-клеток типично для паразитарных инвазий. Для субпопуляции В-лимфоцитов с фенотипом В-1 клеток (СБ19+СБ5+) характерна высокая активность продукции иммуноглобулинов, в первую очередь, ^М, способность к самообновлению и низкая специфичность [4]. Повышение пула В-1 клеток у инвази-рованных детей отражает активацию гуморального звена иммунного ответа. В ряде
работ показано, что при персистирующих кишечных паразитозах возрастает число клеток, экспрессирующих СШ3 [5, 6], однако мы не выявили у условно здоровых детей с гельминтно-протозойными инвазиями значимых изменений В клеток с данным маркёром, как и других статистически значимых различий в содержании клеток разных фенотипов по сравнению со здоровыми детьми ^-ой группы.
Таблица. Влияние паразитарных инвазий на относительное содержание клеток разных фенотипов в крови здоровых детей и детей, страдающих аллергическими заболеваниями (в %)
Сравниваемые группы Фенотип клеток крови Неинвазирован-ные здоровые дети Инвазированные условно здоровые дети Неинвазированные дети с аллергией Инвазированные дети с аллергией
1 2 3 4
Ме1 ^25^) Ме2 ^25^75) Ме3 ^25^75) ** Ме4 ^25^75)
С03+С045Ь"81Й 76,9 (72,8- 78,5) 72,9 (69,6-75,2) * 72,5 (68,9-77,3) ** 73,9 (66,9-76,6) ***
С03+С04+ С045ь"81й 43,0 (40,5- 45,4) 42,5 (40,6-47,2) 41,9 (36,3-45,7) 40,2 (39,2-46,6)
С03+С08+ С045Ь"8Й 26,9 (24,2- -31,2) 24,0 (21,2-25,4) * 26,9 (25,0-29,9) 23,9 (21,9-25,3) ***
С03+С04+/С03+С08+ 1,60 (1,26- 1,85) 1,77 (1,58- -1,96) 1,39 (1,24-1,82) 1,73 (1,49-2,03)
С03-С08+ С045Ьг1811 2,40 (1,50- 5,35) 1,80 (1,45- 3,15) 2,55 (1,4-3,38) 2,65 (1,6-3,53)
С03+С08+/С03С08+ 11,5 (5,79- 16,2) 12,98 (7,7- -16,4) 10,4 (7,4-19,0) 9,3 (5,6-18,5)
С03-С016+56+ С045Ьп811 6,3 (3,75- 9,9) 7,4 (5,3-8,75) 9,0 (5,5-11,8) 7,2 (6,0-9,73)
С03+С016+56+ С045Ьг1811 1,7 (1,2-2,5) 1,25 (0,83-1,65) 1,65 (0,8-2,53) 1,3 (0,51-2,0)
С03С016+56+/ С03+С016+56+ 4,2 (2,26-6,2) 5,08 (3,4-10,2) 6,4 (2,9-10,3) 7,2 (3,7-19,9) ***
CD3+Y5-ТcR+CD45Ьrl8ht (% от всех кл) 6,0 (4,3-8,7) 5,5 (3,9-6,58) 4,5 (2,8-5,58) ** 5,9 (3,93-7,8)
CD3+Y6-ТcR+CD45Ьrlght (% от CD3) 8,05 (5,6-11,4) 7,6 (6,0-9,2) 6,3 (4,18-7,5) 7,2 (5,9-10,4)
CD19+CD45Ьrlght 16,9 (15,2-19,1) 19,9 (19,2-23,2) * 18,3 (15,6-20,3) 17,7 (15,7-23,4)
CD3+CD45Ьrlght / CD19+CD45Ьrlght 4,44 (3,96-5,32) 3,74 (2,9
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.