научная статья по теме ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ВЫРАЩИВАНИЯ И СМЕШАННОЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ГИБЕЛЬ ЛЕНСКОГО ОСЕТРА ACIPENSER BAERII В САДКАХ Общие и комплексные проблемы естественных и точных наук

Текст научной статьи на тему «ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ВЫРАЩИВАНИЯ И СМЕШАННОЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ГИБЕЛЬ ЛЕНСКОГО ОСЕТРА ACIPENSER BAERII В САДКАХ»

ВЕСТНИК ЮЖНОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА Том 11, № 1, 2015, стр. 70-79

БИОЛОГИЯ

УДК 639.3.07:639.331:597.442

ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ВЫРАЩИВАНИЯ И СМЕШАННОЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ГИБЕЛЬ ЛЕНСКОГО ОСЕТРА

ACIPENSER BAERII В САДКАХ

© 2015 г. А.В. Казарникова1, Е.В. Шестаковская2, М. Галеотти3, А.В. Тришина4, А.А. Турченко5

Поступила 20.06.2014

Проведены исследования двухгодовиков ленского осетра в садках рыбоводного водоема, расположенного в обводненном песчаном карьере нижнего течения р. Дон. Гибель рыб началась с середины лета 2013 г. и достигла к концу сентября 15%. Больные рыбы приобретали бледную окраску, не питались, становились вялыми и теряли в весе. На отдельных участках тела отмечались серозно-геморра-гическое воспаление кожи и язвы. У погибающих особей жабры были бледные, брюшко увеличено, анус воспален. Рыбы теряли координацию движений, переворачивались спиной вниз и затем погибали. Неблагоприятные условия внешней среды выразились в температурной и кислородной стратификации водных слоев, которая привела к образованию зон, обедненных кислородом; нарушении соотношения азота и фосфора; повышении содержания сульфатов и хлоридов. В результате бактериологического исследования было выделено 67 изолятов (32 из воды и 35 из рыб), относящихся к трем родам -Aeromonas, Vibrio и Edwardsiella. Общее микробное число в воде в обследованных садках составило 1 • 103 КОЕ/мл; коли-индекс 2300; коли-титр 0,43. Уровень микробной обсемененности паренхиматозных органов ленского осетра был гораздо выше (5 • 104 КОЕ/мл) в садках, где была зарегистрирована гибель. Все штаммы, выделенные из паренхиматозных органов рыб, оказались чувствительны к фуразолидону, ципрофлоксацину, доксициклину, тетрациклину, левомицетину. Гистологические изменения, наблюдаемые в печени, селезенке и сердце больных рыб, проявлялись в концентрированных геморрагических рассеянных очагах некроза. Бактерии, зарегистрированные в пораженных некрозом участках, окрашивались в красный цвет по Цилю-Нильсену и имели типичную форму бациллы. Их структура и характеристики свидетельствовали о возможной принадлежности к микобактериям. Изменения в составе красной крови ленского осетра сопровождались агглютинацией, пойкилоцитозом, анизоцитозом эритроцитов и развивающейся у рыб анемией. Возникающая у рыб лейкопения характеризовалась увеличением числа нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов и уменьшением относительного количества лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов.

Ключевые слова: аквакультура, ленский осетр Acipenser baeri, бактерии, Aeromonas, Vibrio, Edwardsiela, условия внешней среды.

Включение всех видов осетровых во вторую категорию охраны СИТЭС (CITES, Convention on International Trade in Endangered Species of Wild

1 Южный научный центр Российской академии наук (Southern Scientific Centre, Russian Academy of Sciences), 344006, г. Ростов-на-Дону, пр. Чехова, 41, e-mail: kazarnikova@gmail.com

2 Центральная производственная станция по акклиматизации и борьбе с болезнями рыб (Ростовский филиал) (Central Station for Acclimatization and Fish Disease Control (Rostov Branch)), 344002, г. Ростов-на-Дону, ул. Обороны, 49, e-mail: fish_cps@mail.ru

3 Университет Удинэ, Италия (University of Udine, Italy); e-mail: marco.galeotti@uniud.it

4 Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотреб-надзора (Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute, Russian Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing (Rospotrebnadzor)), 344002, г. Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40.

1 ООО "Луч" (JSC "Luch").

Fauna and Flora - Конвенция о международной торговле видами дикой фауны и флоры, находящимися под угрозой исчезновения) с 1998 г. стимулировало создание различных программ по их сохранению, а также по коммерческому выращиванию. Основными объектами искусственного разведения на юге России являются русский осетр (Acipenser gueldenstaedtii), севрюга (Acipenser stellatus), белуга (Huso huso), стерлядь (Acipenser ruthenus), бестер (H. huso x A. ruthenus). В последнее десятилетие в аквакультуру юга России был введен сибирский (ленский) осетр, A. baerii, который с 1969 г. стал объектом искусственного разведения в европейской части России и с 1975 г. - за рубежом. Использование ленского осетра для коммерческого выращивания обусловлено способностью данного вида хорошо расти при высоких плотностях посадки,

питаться исключительно сухими гранулированными комбикормами, а также высоким качеством мяса и икры.

В последние годы объем выращивания осетровых в отдельных хозяйствах Российской Федерации доходил до 400 т/год [1]. Однако использование интенсивных форм разведения рыб, особенно в садках, приводит к ухудшению гидрохимического режима за счет загрязнения водной среды продуктами метаболизма и остатками корма [2]. Органическое загрязнение, температура, рН и другие факторы водной среды способствуют росту и развитию не только сапрофитной микрофлоры, но и условно-патогенной и патогенной. При этом растущая агрессивность среды приводит к снижению резистентности организма рыб и как следствие возникновению болезней [3].

О гибели в результате заболеваний осетровых рыб, являющихся объектами аквакультуры, сообщали разные авторы [4-9]. Интенсивное выращивание создает в водной среде такую экологическую нишу для водных организмов, в которой при симбиоти-ческих взаимодействиях микроорганизмов с рыбой возникающие ассоциации бактерий меняются в сторону паразитирования. К этой группе бактерий относятся представители родов Aeromonas, Vibrio и Edwardsiella [10]. В частности A. hydrophila [6-8] и A. sobria в отдельных случаях [6; 11] были зарегистрированы как возбудители заболеваний, они приводили к массовой гибели рыб в рыбоводных хозяйствах.

В данной работе заболевание ленского осетра в садках и сопутствующие условия выращивания были исследованы в едином комплексе: рыбы, тесно связанные с водным пространством, - водная среда.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Летом 2013 г. была зарегистрирована гибель двухгодовиков ленского осетра в садках рыбоводного водоема, расположенного в обводненном песчаном карьере нижнего течения р. Дон. Гибель единичных экземпляров началась с середины лета и достигла к концу сентября 15% от всего количества содержащихся A. baerii. Одновременно с ленским осетром на садковой базе выращивались русский осетр и стерлядь, однако признаков заболевания у этих видов отмечено не было. Пробы воды из основного водоема и садков были взяты на бактериологический и гидрохимический анализы. Согласно общепринятым в ихтиопатологии методам [12], заболевшие рыбы были осмотрены клинически, далее были проведены паразитологические, бактериологические, гистологические и гематологические исследования.

Каждую рыбу измеряли, взвешивали и осматривали клинически, уделяя внимание повреждениям на поверхности тела. Внутренние органы исследовали на наличие патологических изменений и затем отбирали для бактериологических исследований. Соскобы с жабр и поверхности тела, а также внутренние органы и желудочно-кишечный тракт исследовали компрессионным методом под микроскопом.

Исследования проводили в конце августа, когда гибель рыб начала возрастать. Воду для бактериологического исследования отбирали из поверхностных водоемов (садков и основного водоема), определяли общее микробное число (ОМЧ), ко-ли-титр и коли-индекс. Отбор проб воды, фильтрацию через мембранные фильтры, выделение культур микроорганизмов, их идентификацию проводили по общепринятым методикам [13; 14]. Биохимические свойства представителей семейства ЕП;егоЬаС;епасеае определяли с помощью коммерческих тест-систем Enterotest фирмы Lachema (Чехия). Микробиологические исследования проводили согласно нормативной документации на продукцию МУК 13 - 14-2/1738 от 27.09.1999.

Материал для бактериологического исследования из паренхиматозных органов (печень, селезенка, почки) одновременно отбирали у пяти рыб. Взвеси органов эмульгировали в физиологическом растворе, высевали на селективные питательные среды для определения различных групп микроорганизмов. Наряду с качественным составом микробного обсеменения рыб проводили учет их количественного состава. Общую бактериальную обсемененность рассчитывали по количеству выросших колоний и выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 грамм органа. Идентификацию выделенных бактериальных культур проводили путем изучения морфологии бактерий, их куль-туральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду [12; 14; 15]. Кроме этого, в специализированной лаборатории был проведен анализ на микобактериоз.

Определение чувствительности к антибиотикам выделенных микроорганизмов проводили по общепринятым методиками, интерпретацию результатов проводили согласно международным стандартам КС^Б. Исследована чувствительность к пяти антимикробным препаратам, принадлежащим к четырем различным фармакологическим группам.

Гидрохимические показатели воды в садках определяли согласно методическим указаниям по исследованию проб воды из рыбохозяйственных водоемов [16].

Для изготовления гистологических препаратов кусочки тканей (печень, селезенка, сердце) от

пяти рыб фиксировали в 4%-м нейтральном буферном формалине. После этого образцы выдерживали при комнатной температуре и помещали в автоматический гистопроцессор (TISBE-гистопроцессор, Diapath). Подготовленные экземпляры заливали в парафин (ParaplastPlus, Diapath). С помощью микротома (Reichert-Jung 2050) получали срезы толщиной 5 мкм, которые затем окрашивали гематоксилином - эозином по Гимзе и Цилю - Нильсену. Препараты исследовали под световым микроскопом (Leica DMRB) и фотографировали системой "Никон".

Изготовление мазков крови проводили с использованием общепринятых в ихтиопатологии методов [12; 16]. Лейкоцитарную формулу определяли, подсчитывая в окрашенных мазках 200 клеток белой крови. Индекс сдвига лейкоцитов рассчитывали по методу Яблучинского в модификации Сухопаровой [17]. При оценке интенсивности эритропоэза определяли процентный состав незрелых эритроцитов. Методика сводится к просчету по всему мазку в различных его участках 500 эритроцитов. С

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком

Пoхожие научные работыпо теме «Общие и комплексные проблемы естественных и точных наук»