научная статья по теме CD8+-ПОПУЛЯЦИЯ ЛАК-КЛЕТОК СПОСОБНА ЛИЗИРОВАТЬ КАК HLA-ПОЗИТИВНЫЕ, ТАК И HLA-НЕГАТИВНЫЕ РАКОВЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ Математика

Текст научной статьи на тему «CD8+-ПОПУЛЯЦИЯ ЛАК-КЛЕТОК СПОСОБНА ЛИЗИРОВАТЬ КАК HLA-ПОЗИТИВНЫЕ, ТАК И HLA-НЕГАТИВНЫЕ РАКОВЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ»

ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК, 2009, том 426, № 2, с. 273-274

КЛЕТОЧНАЯ БИОЛОГИЯ

УДК 612.036.576.314.547.915.5

СБ8+-ПОПУЛЯЦИЯ ЛАК-КЛЕТОК СПОСОБНА ЛИЗИРОВАТЬ КАК ИЬЛ-ПОЗИТИВНЫЕ, ТАК И ИЬЛ-НЕГАТИВНЫЕ РАКОВЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ

© 2009 г. Д. В. Яшин, Л. П. Сащенко, О. Д. Кабанова, Т. И. Лукьянова, Е. А. Духанина, Е. А. Романова, член-корреспондент РАН Н. В. Гнучев

Поступило 11.11.2008 г.

Классические клетки иммунной системы Т-лимфоциты и естественные киллеры (КК), отвечающие за антираковую защиту, убивают свои мишени с помощью механизма, включающего контакт с клеткой-мишенью и ее распознавание как раковой, и последующее убийство раковой клетки либо секрецией перфорина и гранзимов, либо непосредственно Рав-РавЬ-взаимодействием [1]. Первый шаг в процессе лизиса - распознавание зависит от типа клеток-мишеней и лимфоцитов. Классический процесс распознавания Т-лимфоцитами состоит из взаимодействия Т-клеточного рецептора лимфоцита (ТСЯ) со специфичным для раковой клетки пептидом, представленным на главном комплексе гистосовместимости клетки-мишени (НЬА) [2]. В последнее время показано, что многие опухолевые клетки способны избегать распознавания, уменьшая экспрессию или убирая НЬА со своей поверхности [3-5]. Для лизиса подобных клеток Т-лимфоцитами должен существовать механизм, отличный от классического. Ранее нами было показано, что лимфокин-активированные клетки (ЛАК-клетки), полученные на шестой день инкубации с цитокином 1Ь-2, способны лизи-ровать клетки К-562, негативные по НЬА [6, 7]. Популяция ЛАК-клеток на шестые сутки состоит из 65% СБ3+СБ4+- и 30% СБ3+СБ8+-клеток и не содержит КК-клеток. Целью данного исследования было понять, какова роль СБ8+-цитотоксиче-ских Т-лимфоцитов (ЦТЛ) в лизисе различных типов раковых клеточных линий.

Нами было проведено исследование, ставящее своей задачей изучение антираковых свойств СБ8+-ЦТЛ, выделенных из популяции ЛАК-кле-

Институт биологии гена Российской Академии наук, Москва Центр медицинских исследований Университета Осло, Москва Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгелъгардта Российской Академии наук, Москва

ток. Лимфоциты получали из крови здоровых доноров и далее культивировали в среде ЯРМ1-1640 в присутствии 1000 ед. цитокина 1Ь-2 в течение шести суток. Цитотоксичность лимфоцитов определяли при помощи окрашивания трипано-вым синим [6].

Согласно литературным данным можно было предположить, что наивные необученные СБ8+-лимфоциты из крови донора не должны обладать противоопухолевой активностью. Проведенный эксперимент подтвердил, что СБ8+-лимфоциты, выделенные с помощью магнитной сепарации из крови здорового донора, не обладают цитолити-ческой активностью против раковых клеток К562 и МОЬТ-4. Их цитотоксическая активность по отношению к рассматриваемым клеточным линиям не превышала естественной гибели клеток в контрольных образцах (рис. 1а). Магнитную сепарацию проводили при помощи коммерческого набора реактивов с магнитными шариками со-

25

л

в20

к ^

к

3 10

о н о н к Я"

15

5

(а)

^ 25

л н о о

к ^

м о н о н к Я

К562 МОЬТ-4 Ь-929 НеЬа СБМЬ-100

(б)

К562 МОЬТ-4 Ь-929 НеЬа СБМЬ-100

Рис. 1. Лизис раковых клеточных линий СБ8+-лим-фоцитами на нулевые (а) и шестые (б) сутки инкубации с цитокином 1Ь-2.

9 ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК том 426 < 2 2009

5

0

274

ЯШИН и др.

Таблица 1. Антираковая цитотоксическая активность ЦТЛ

Клетки-мишени CD8+-лимфоциты, инкубируемые с линиями, %,

HeLa CSML-100 L-929

HeLa 17 ± 2 3 ± 1 2 ± 1

CSML-100 1 ± 0.5 21 ± 3 1 ± 0.5

L-929 4 ± 1 0.5 ± 0.2 18 ± 3

гласно инструкциям производителя ("Dynal, Biotech").

Для экспериментов были использованы опухолевые клеточные линии L-929, HeLa, CSML-100, для которых показано наличие на поверхности клеток HLA, необходимого для узнавания пептидов раковых клеток Т-клеточным рецептором ЦТЛ. Также для проведения экспериментов мы выбрали культуры раковых клеток, способных к образованию монослоя на пластике, не смешивающихся с находящимися в растворе лимфоцитами. Лимфоциты, свежеполученные от здорового донора, инкубировали 30 мин с образовавшими монослой прикрепившимися раковыми клетками, затем лимфоциты собирали и культивировали в течение шести суток в присутствии 1000 ед. цито-кина IL-2. Получившиеся клетки обладали заметным антираковым действием против той клеточной линии, с которой они вступали в контакт (табл. 1). Однако их противоопухолевая активность к другим клеточным линиям не превышала естественной гибели клеток в контрольных образцах. Таким образом, нами было показано, что часть необученных CD8+-лимфоцитов из крови донора способна после контакта с антигенами опухолевых клеточных линий активироваться и после стимуляции цитокином IL-2 приобрести цитологические свойства. Но цитолитическая активность этих клеток была антигензависимой, и в отсутствие антигена, использованного для их активации, они были не способны к лизису раковых клеток.

Кроме этих данных, нами было показано, что спустя шесть суток культивирования с цитокином IL-2, CD8+-субпопуляция ЛАК-клеток приобретала существенную цитотоксическую активность, позволяющую ей лизировать более 20% клеток в HLA-негативных раковых клеточных линиях К562

и MOLT-4 (рис. 16). Эти клеточные линии являются классическими мишенями для NK, но их содержание в СВ8+-субиополяции по результатам анализа с помощью проточной цитофлуорометрии не превышало 0.2% и не могло влиять на полученные результаты (данные не приведены). Следовательно, СВ8+-субпополяция, выделенная из ЛАК-клеток после шести суток культивации с цитокином IL-2, приобретает свойство лизировать HLA-негативные раковые клеточные линии. Однако они не обладали активностью по отношению к другим раковым клеточным линиям, таким как L-929, HeLa, CSML-100, имеющим функциональный HLA. Это позволило нам предположить, что наблюдаемый механизм гибели раковых клеток не основан на узнавании посредством TCR CD8+-лимфоцитами эпитопов на поверхности раковых клеток.

Таким образом, нами были показаны два различных механизма, участвующих в противоопухолевом действии ЦТЛ, получаемых на шестые сутки из ЛАК-клеток. Первый механизм основан на классическом распознавании CD8+-лимфоци-тами раковых антигенов на HLA первого класса, и после активации цитокином IL-2 такие клетки приобретают цитотоксические свойства, специфичные для активировавшего их антигена. Второй механизм менее изучен и не связан с узнаванием с помощью TCR T-лимфоцитами раковых антигенов. После неспецифической активации цитокином IL-2 CD8+-лимфоциты приобретают способность лизировать раковые клетки без HLA, что более присуще NK-клеткам.

Работа была поддержана грантами РФФИ, ICGEB CRP/RUS05-01, Программой РАН "Молекулярная и клеточная биология".

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Shresta S., Pham CT, Thomas D A. et al. // Curr. Opin.

Immunol. 1998. V. 10. P. 581-587.

2. Davis M.M, Boniface J.J., Reich Z. et al. // Annu. Rev.

Immunol. 1998. V. 16. P. 523-544.

3. Bubenik J. // Intern. J. Oncol. 2004. V. 25. P. 487-491.

4. Kunzmann V., Wilhelm M. // Leuk Lymphoma. 2005.

V. 46. P. 671-680.

5. Seliger B. // BioDrugs. 2005. V. 19. P. 347-354.

6. Sashchenko LP, Dukhanina E.A., Yashin D.V. et al. //

J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 2117-2124.

7. Sashchenko L.P, Dukhanina E.A., Shatalov Y.V. et al. //

Blood. 2007. V. 110. P. 1997-2004.

ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК том 426 < 2 2009

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком