ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
УДК 616.831-005.4-092.9:577.112.385.4
ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ (8)-2,6 ДИАМИНОГЕКСАНОВОЙ КИСЛОТЫ 3-МЕТИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛИЛ-5-ТИОАЦЕТАТА (ЛИЗИНИЙ): ВЛИЯНИЕ НА ЭКСПРЕССИЮ ВАСКУЛОЭНДОТЕЛИАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА (УЕОБ) И ХАРАКТЕРИСТИКУ ЭНДОТЕЛИОЦИТОВ СОСУДОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЖИВОТНЫХ С ЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИЕЙ
© 2013 г. И. Ф. Беленичев, И. А. Мазур, А. В. Абрамов, Л. И. Кучеренко, Н. В. Бухтиярова, А. А. Егоров*, О. И. Беленичева, Е. Н. Полякова
Запорожский государственный медицинский университет
Моделирование острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) путем билатеральной перевязки общих сонных артерий у белых беспородных крыс приводило к формированию эндотели-альной дисфункции капиллярной сети 1У—У слоев коры и сосудов сосудистой оболочки мозга, сосудистого сплетения желудочков мозга, ветвей центральной мозговой и глазной артерий, что выражалось в значительном снижении плотности ядер эндотелиоцитов, уменьшении в них концентрации РНК, экспрессией васкулоэндотелиального фактора роста (УЕОБ) и значительным угнетением индекса пролиферативной активности эндотелиоцитов. Курсовое введение лизиния в течение 21-х суток в дозе 50 мг/кг, внутрибрюшинно крысам с ОНМК приводило к повышению плотности эндотелиоцитов капиллярной сети коры головного мозга и сосудистой стенки сосудов мозга и к повышению содержания РНК в ядрах эндотелиоцитов, на 4-е сутки экспериментальной терапии. По окончании курсового введения лизиния наблюдалось повышение плотности эндоте-лиоцитов капиллярной сети коры головного мозга и сосудистой стенки сосудов мозга, повышение содержания РНК в ядрах эндотелиоцитов, увеличение плотности пролиферирующих эндотелиоцитов в этих сосудах на фоне повышение концентрации УЕОЕ Введение референс-препарата пираце-тама не оказывало эндотелиотропного действия.
Ключевые слова: церебральная ишемия, морфофункциональные показатели эндотелиоцитов, васкулоэн-дотелиальный фактор роста (УЕОГ), эндотелиопротективное действие, (8)-2,6-диаминогексановой кислоты 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат, лизиний.
Б01: 10.7868/81027813313040031
В настоящее время острые нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) занимают второе место среди причин инвалидности, третье — среди смертности населения промышленно развитых стран [1—5]. Показано, что в основе полиморфизма ОНМК лежат разнообразные патогенетические механизмы — атеротромбоз, церебральная эмболия, кардиогенные нарушения системной гемодинамики, изменения мелких внутримозговых сосудов при артериальной гипертонии и др. [6, 7]. В настоящее время основным объектом внимания нейрофизиологов, фармакологов и клиницистов стал эндотелий сосудов, который считается как органом-мишенью для мозговых инсультов, так и эффектором в патогенезе данных заболеваний
*Адресат для корреспонденции: 69035, Украина, г. Запорожье, пр. Маяковского, 26, тел.: +38(099)023-24-75; +38(068)318-22-11, e-mail: datas999@gmail.com.
[2, 3, 5, 8]. В последние годы сформировалось понятие об эндотелиальной дисфункции (ЭД), включающей в себя его структурные и функциональные изменения и выражающейся в неадекватном образовании в эндотелии различных биологически активных веществ [2, 5] и рассматривается как предиктор повреждений головного мозга при цереб-роваскулярных заболеваниях [5]. Важным фактором, влияющим на исход ОНМК, является организация своевременной ургентной помощи больным с данным заболеванием [5, 8]. Начиная с первых минут ишемического инсульта с позиций активного участия сосудистого звена в начальном дефиците локального мозгового кровотока с дальнейшим прогрессированием нейродеструкции важную роль играет эндотелиопротективная терапия [1, 2, 5, 8]. Однако в настоящее время нет препаратов с доказанным эндотелиопротективным
действием. Будущее за препаратами, обладающими не только нейропротективным действием, но и опосредованным позитивным влиянием на эндо-телиальную функцию. Исходя из вышеизложенного, актуальной задачей современной нейро-фармакологии является поиск препаратов, обладающих выраженным эндотелиопротективным, антиоксидантным и NO-модулирующим действием в условиях цереброваскулярной патологии [1, 2, 5, 8].
В последнее время все более широкое применение в практике ангионеврологии находит препарат L-лизина эсцинат, который проявляет противовоспалительные, антиэкссудативные свойства и повышает сосудистый тонус [2, 3, 8, 9].
В качестве средств вторичной нейропротек-ции применяются антиоксиданты, метаболито-тропы, нейрометаболические церебропротекто-ры (эмоксипин, милдронат, пирацетам, тиотриа-золин), которые в условиях эксперимента улучшают нейрохимические процессы, тормозят окислительную модификацию белковых фрагментов рецепторов и ионных каналов и проявляют мембранопротективные свойства [1, 8, 10—13, 16, 17]. Из этой группы препаратов эндотелио-протективные свойства прогнозируются у тиот-риазолина (морфолиния 3-метил-1,2,4-триазо-лил-5-тиоацетат), который оказывает регулирующее воздействие на мозговой кровоток на уровне сосудов крупного и среднего калибра и поддержание проходимости микроциркуляторного русла, а также защищает N0 от активных форм кислорода и повышает его биодоступность [8, 11, 17].
С целью создания эффективного метаболито-тропного эндотелиопротектора в НПО "Фармат-рон" было синтезировано соединение ^)-2,6-ди-аминогексановой кислоты 3-метил-1,2,4-триазо-лил-5-тиоацетат (рабочее название "Лизиний"), сочетающее в своей структуре фрагменты молекул тиотриазолина и L-лизина эсцината, обладающее противоишемической, кардиопротектив-ной, нейропротективной, антиоксидантной и противовоспалительной активностью и по силе действия превосходящую активность структурных "родителей" [9, 13, 14]. Показано, что введение лизиния животным с ишемией миокарда приводило к нормализации соотношения тиол-дисульфидной системы и N0 в миокарде и улучшало показатели кардиогемодинамики. Также лизиний повышает выживаемость нейронов сен-сомоторной зоны коры, повышает в их ядрах содержание РНК, снижает количество нейронов с признаками апоптоза и нейродегенерации в условиях церебральной ишемии [15].
Цель исследования: на основании выявленных особенностей дисфункции эндотелия сосудов головного мозга при моделировании острого нарушения мозгового кровообращения оценить эндо-
телиопротективное действие потенциального препарата лизиния и обосновать его применение при патологии сердечно-сосудистой системы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В опытах использовали белых крыс линии Ш81аг обоего пола массой 180—200 г, полученных из питомника Государственного учреждения "Институт фармакологии и токсикологии АМН Украины" (г. Киев). Длительность карантина (акклиматизационного периода) для всех животных составляла 14 дней. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние), дважды в день животных наблюдали в клетках (заболеваемость и смертность). Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, были распределены на группы с помощью метода рандомизации. Животные, не соответствующие критериям, были исключены из исследования в течение карантина. Животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и стандартному гранулированному корму.
Все экспериментальные процедуры осуществляли согласно "Положению про использование животных в биомедицинских исследованиях". Поскольку целью нашей работы стала оценка эн-дотелиопротективной активности нового соединения в условиях церебральной ишемии, нам были необходимы модели экспериментальной патологии головного мозга, адекватные клиническим ситуациям, таким как ишемический инсульт. С этой целью используют различные экспериментальные модели: одно- и двустороннюю перевязку общих сонных артерий, временную окклюзию двух сонных артерий на фоне необратимой перевязки двух позвоночных артерий. Указанным требованиям соответствует двусторонняя перевязка общих сонных артерий в связи с видовыми анато-мо-физиологическими особенностями кровоснабжения головного мозга белых крыс. При этом наблюдается соответствующий неврологический дефицит, когнитивные нарушения, гистологические и биохимические изменения ткани головного мозга [16].
Шерсть в месте операции выбривали и операционное поле обрабатывали антисептиком. Эксперимент проводили в экспериментальной операционной после кварцевания и обработки антисептиками при температуре 19—20°С. Двустороннюю перевязку общих сонных артерий выполняли под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг), с использованием хирургического доступа путем выделения сонных артерий и одномоментного наложения на них шелковой лигатуры. После окклюзии сонных артерий раны послойно ушивались и обрабатыва-
лись бриллиантовым зеленым. Ложноопериро-ванным животным разрезалась и послойно ушивалась кожа. Развитие эндотелиальной дисфункции и эндотелиопротективную активность лизиния оценивали по морфофункциональным характеристикам эндотелиоцитов капиллярной сети коры головного мозга и сосудистой стенки сосудов головного мозга в острый (4-е сут) и восстановительный (21-е сут) периоды экспериментального нарушения мозгового кровообращения. Животных разных групп выводили из эксперимента на 4-е и 21-е сутки наблюдения под тиопен-таловым наркозом (40 мг/кг). Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно сразу после выхода животных из наркоза в течение 4-х и 21-х сут — лизиний — 2.5% р-р для инъекций (НПО "Фарматрон", Украина) в дозе 50 мг/кг (2 мл/кг). В качестве референс-препарата был взят нейрометаболический церебропроектор пи-рацетам, широко применяемый в неврологической практике [17]. В работе использовали пира-цетам — 20% р-р для инъекций в ампулах по 5.0 мл, "Санитас" (Латвия) — 250 мг/кг (1.25 мл/кг) [17], контрольная группа (группа нелеченых животных) получала 2 мл/кг физиологический раствор по той же схеме.
Всего было использовано 70 животных, разделенных на семь групп:
1) ложнооперированные — (10 крыс) ;
2) контрольные — животные с окклюзией общих сонных артерий, получавшие физиологический раствор и выведенные из эксперимента на 4-е сут (10 крыс);
3) животные с окклюзией общ
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.