МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ, 2008, том 42, № 2, с. 238-241
== ГЕНОМИКА. ТРАНСКРИТОМИКА. ПРОТЕОМИКА ^
УДК 575.113:616-002.5
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ПОДВЕРЖЕННОСТИ К ХРОНИЗАЦИИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА И ФИБРОЗУ В ПЕЧЕНИ
© 2008 г. И. А. Гончарова1, Е. В. Белобородова2, М. Б. Фрейдин1, Э. И. Белобородова2, Г. Э. Черногоршк2, В. П. Пузырев1, 2*
Научно-исследовательский институт медицинской генетики Томского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Томск, 634050 2Сибирский государственный медицинский университет, Томск, 634050 Поступила в редакцию 12.03.2007 г. Принята к печати 12.11.2007 г.
Изучена ассоциация полиморфных маркеров C(-590)T гена IL4, Ile50Val гена IL4RA и G(-308)A гена TNF со степенью хронизации вирусного гепатита, определяемой стадией фиброза печени. Показано, что частота аллеля А полиморфного маркера G(-308)A гена TNF в группе больных со слабой степенью фиброза выше (24.5%), чем в группе с умеренным и выраженным фиброзом (13.4%) и циррозом печени (8.7%). Частота гетерозиготного генотипа CT полиморфного маркера C(-590)T гена IL4 в группе больных циррозом печени (68.2%) отличалась от частоты в группе с хроническим гепатитом с умеренным и выраженным фиброзом (39.1%).
Ключевые слова: хронический вирусный гепатит, генетика инфекционных заболеваний, генетический полиморфизм, гены цитокинов.
GENETIC FACTORS DETERMINING PREDISPOSITION TO CHRONIC COURSE OF VIRUS HEPATITIS AND FIBROSIS IN LIVER, by I. A. Goncharova1, E. V. Beloborodova2, M. B. Friedin1, E. I. Beloborodova2, G. E. Chernogoruk2, V. P. Puzyrev1,2* ^Institute of Medical Genetics, Tomsk Research Center, Siberian Division, Russian Academy of Medical Science, Tomsk, 634050 Russia, *e-mail: valery.puzyrev@medgenetics.ru; pk_ssmu@ssmu.net.ru; 2Siberian State Medical University, Tomsk, 634050 Russia). Polymorphic variants of several genes IL4 C(-590)T, IL4RA Ile50Val, TNF G(-308)A were studied for their association with extent of the disease chronization which is marked by hepatic fibrosis stage. Gradual decrease in A allele frequency of polymorphic marker G(-308)A in TNF gene, from patients with weak fibrosis to patients with cirrhosis. Group of patients with weak fibrosis was characterized by higher frequency of A allele (24.5%) comparing with patients with moderate and pronounced fibrosis (13.4%) and cirrhosis (8.7%). Differences in heterozygous genotype frequencies of IL4 C(-590)T were found between patients with cirrhosis (68.2%) and groups of patients with moderate and marked fibrosis (39.1%).
Key words: chronic viral hepatitis, hepatic fibrosis, genetic polymorphism.
Фиброз представляет собой коллагенизацию ткани печени и является типичной реакцией на хроническое поражение, вызванное множеством причин как экзогенной (персистирующие вирусные и гельминтные инфекции, алкогольная интоксикация), так и эндогенной (наследственные нарушения обмена металлов и другие генетические факторы, определяющие ответ организма человека на воздействие различных агентов) природы [1, 2].
Особенности генной регуляции синтеза и распада коллагена у носителей определенных генотипов могут лежать в основе генетической предрасположенности к активному фиброгенезу и быстрому
* Эл. почта: valery.puzyrev@medgenetics.ru; pk_ssmu@ssmu.net.ru
прогрессированию заболевания в условиях воздействия повреждающих агентов. Выявлены мутации и полиморфные варианты генов, ассоциированные с темпами фиброобразования при хронических вирусных гепатитах. Так, например, быстрое прогрессирование связано с мутацями в генах ге-мохроматоза (НЕЕ) и/или рецептора трансферри-на (ТЕЯ1), которые приводят к избыточному накоплению железа в тканях печени [3]. Генетически обусловленная а1-антитрипсиновая недостаточность (мутация гена ингибитора протеиназ Pi) также способствует быстрому развитию фиброза. Увеличение частоты гетерозиготного генотипа MZ Pi отмечено в группах с тяжелыми патологиями печени [4].
В последнее время большое внимание уделяется изучению полиморфных вариантов генов, вовлеченных в формирование иммунного ответа. Анализ многочисленных данных о связи полиморфных маркеров различных генов иммунной системы с хроническим вирусным гепатитом (ХВГ), особенностями его течения и осложнениями показывает, что в развитии инфекционного процесса значимую роль играет адекватный иммунный ответ, который определяется генетическими особенностями организма-хозяина [5]. Известно, что интерлейкины (IL) не только вовлечены в формирование иммунного ответа, но и модулируют метаболизм и активность ферментов, участвующих в процессе образования коллагена в печени. Например, синтез протеолитического фермента коллагеназы контролируется IL1, 6, 10, у- и ß-интерферонами, трансформирующим фактором роста а, фактором некроза опухолей-а (TNF-<x), а его подавление - IL4, IL11 и IL13 [6, 7].
Цель нашей работы состояла в оценке ассоциации полиморфных маркеров некоторых генов иммунной системы, участвующих в контроле синтеза коллагена (IL4 C(-590)T, IL4RA Ile50Val, TNF G(-308)A), с особенностями течения ХВГ, определяемыми степенью фиброза. Работа выполнена с привлечением дополнительных генетических маркеров и на более многочисленной выборке, чем проведенная нами ранее оценка ассоциации полиморфного маркера Ile50Val гена IL4RA с ХВГ [8].
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
В группу больных ХВГ вошли 130 человек. Критериями для включения в исследование служили: 1) серологические маркеры ХВГ В и/или С, обнаруженные в сыворотке крови методом иммунофер-ментного анализа (набор фирмы "ELISA"); 2) ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С, выявленная c помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). У всех больных проведена морфологическая верификация диагноза с определением индекса гистологической активности по Knodell [9] и стадии фиброза по Desmet [10]. Для оценки ассоциации полиморфных маркеров генов со стадией фиброза больных ХВГ разделили на три подгруппы. К первой подгруппе (I) отнесены больные (44 человека) со слабой степенью фиброза (стадия I). Вторую группу (II) составили 64 человека с умеренным и выраженным фиброзом (стадии II и III соответственно). В третью группу (III) вошли 22 больных с циррозом печени (стадия фиброза IV).
Ассоциацию полиморфных маркеров генов иммунной системы, участвующих в контроле синтеза коллагена, с ХВГ и стадией фиброза в печени анализировали с использованием следующих маркеров: C(-590)T гена IL4, Ile50Val гена IL4RA, G(-308)A гена TNF.
фиброз II фиброз III (цирроз)
Распределение частот генотипов СС + TT и СТ полиморфного маркера C(-590)T гена IL4 в группах больных хроническим вирусным гепатитом с умеренным и выраженным фиброзом (II) и циррозом печени (III).
ДНК из лимфоцитов периферической крови выделяли по стандартной неферментативной методике [11]. Генотипирование проводили путем анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов амплификации согласно [12, 13].
Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью критерия х2 Пирсона [14]. Частоты аллелей и генотипов в группах сравнивали с использованием критерия х2 с поправкой Йетса на непрерывность при числе степеней свободы равном 1, а также точного теста Фишера.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров C(-590)T гена IL4 и G(-308)A гена TNF, расположенных в промоторных областях, со степенью фиброза печени при ХВГ. В группе с циррозом печени (группа III) частоты генотипов полиморфного маркера C(-590)T гена IL4 (таблица) отличались от частот в группе с умеренным и выраженным фиброзом (группа II) (р = 0.047). Это различие обусловлено увеличением частоты гетерозиготного генотипа СТ за счет уменьшения частоты гомозиготных генотипов СС и TT (х2 = 4.47; р = 0.030) среди больных с циррозом печени (рисунок).
Различия в частотах генотипов маркера C(-590)T гена IL4 обнаружены ранее в группах ВИЧ-инфицированных, в которых до 10% увеличена частота гомозиготного генотипа TT, не обнаруженного в группе здоровых лиц [15]. Среди больных ХВГ жителей ^мска гомозиготные носители аллеля T гена IL4 встречались с частотой 6.7%, в зависимости от стадии фиброза частота этого генотипа варьировала от 0% (группа III) до 9.1% (группа I) (таблица).
Ранее показали, что аллель T, ассоциированный с повышенной продукцией IL4, усиливает предрас-
240
ГОНЧАРОВА и др.
Распределение частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов у больных хроническим вирусным гепатитом c разной стадией фиброза
Ген Поли-мор-физм Генотип Стадия фиброза p
I II III I и II I и III II и III
n % n % n %
ILA C-590T CC 1б 3б.4 35 54.7 7 31.S 0.172* 0.279* 0.047*
CT 24 54.5 25 39.1 15 б8.2
TT 4 9.1 4 б.2 0 0
T 32 3б.4 33 25.S 15 34.1 0.129 0.94S 0.38б
IL4RA Ile50Val Ile/Ile 19 3б.5 20 2б.7 9 34.б 0.129* 0.б03* 0.752*
Ile/Val 29 55.S 40 53.3 13 50
Val/Val 4 7.7 15 20 4 15.4
Val 37 35.б 70 4б.7 21 40.4 0.103 0.б81 0.533
TNF G-30SA GG 29 59.2 54 7б 19 82.б 0.134* 0.135* 0.S70*
GA 1б 32.б 15 21.2 4 17.4
AA 4 S.2 2 2.S 0 0
A 24 24.5 19 13.4 4 S.7 0.041 0.045 0.412
Примечание. п - Абсолютное число наблюдаемых генотипов и аллелей; р - уровень значимости, полученный с помощью критерия х2 и точного теста Фишера*.
положенность к атопическому дерматиту, астме, ревматоидному артриту [16]. Известно, что IL4, будучи ведущим противовоспалительным цитокином, ограничивает распространенность и интенсивность воспаления, подавляет синтез провоспалительных цитокинов IL6, IL8, IL12, TNF-a в макрофагах, уменьшает образование высокоактивных метаболитов кислорода и азота. Отсутствие в группе больных циррозом печени генотипа TT можно объяснить тем, что дефицит IL4 способствует увеличению интенсивности воспалительных реакций, активации апоптоза мононуклеарных клеток и ге-патоцитов и, как следствие, прогрессированию процесса. Повышенную же частоту гетерозиготного генотипа CT в этой группе больных невозможно объяснить особенностями биохимических процессов, ассоциированных с разными аллелями. Скорее всего, в случае ге
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.