MOLECULAR AND CELLULAR MECHANISMS OF ANTIMICROBIAL ACTION OF A HOST DEFENCE PEPTIDE PROTEGRIN
Orlov D. S. Artamonov A. Yu. Orlov S. B. 2
'Institute of Experimental Medicine of the North-West Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, St.Petersburg; 2Saratov State Medical University, Saratov;
3Saint-Petersburg State University, Saint-Petersburg, Russia
Antimicrobial peptides (AMPs) are naturally-occurring molecules that exhibit marked antibiotic effects against numerous infectious bacterial strains. Protegrin (PG-1) is a porcine antimicrobial cationic peptide of the innate immune system with a promising therapeutic potential. Using the colony counting assay, chromogenic substrates, an ion-selective electrode we have explored the viability of E.coli ML35p treated with PG-1 and an influence of the peptide on the permeability of bacterial inner and outer membranes, and potassium release. PG-1 at the concentration of 0,95 microg/ml and higher induced the loss of intracellular potassium accompanying with the outer and inner membrane integrity compromising. In the presence of 1-10 mM La3+ the antimicrobial activity of PG-1 and the peptide-induced damaging of bacterial membranes were decreased in a concentration dependent manner. Lanthanum alone did not decrease bacterial survival. We supposed that La 3+ could replace Ca 2+ in bacterial membranes, forming more stable structures. The present study lends support to the idea on a protective functional role of divalent cations in bacterial membrane structures.
Key words: host defense peptides, protegrin, antimicrobial action
ХАРАКТЕРИСТИКА ЗРЕЛОСТИ И АДГЕЗИОННОЙ СПОСОБНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ
Панова И. А., Кудряшова А. В., Хлипунова Д. А., Смирнова Е. В., Рокотянская Е. А.
ФГБУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В. Н. Городкова» Минздрава России,
Иваново, Россия
Изучены особенности экспрессии молекул адгезии нейтрофилов в венозной крови у женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности. Выявлено, что ги-пертензивные расстройства у беременных сопровождались изменениями функциональной активности нейтрофилов и содержания СБ49Ь+, СБ31+ и СБ56+ клеток в зависимости от генеза артериальной гипертензии.
Ключевые слова: беременность, преэклампсия, нейтрофилы, молекулы адгезии
Артериальная гипертензия является одним из самых грозных и распространенных осложнений беременности с неясной этиологией. Гипертензивные расстройства во время беременности представлены несколькими нозологическими формами. Согласно международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем (десятого пересмотра), выделяют: существовавшую ранее (хроническую) артериальную гипертензию (ХАГ), существовавшую ранее
гипертензию с присоединившейся протеи-нурией (преэклампсией), гестационную артериальную гипертензию и преэклампсию (ПЭ). Артериальная гипертензия и протеи-нурия рассматриваются как второстепенные признаки, в основе которых лежит эндоте-лиальная дисфункция [1]. Исследованиями последних лет подчеркивается значимость изменения иммунологических процессов в патогенезе гипертензивных нарушений у беременных. По данным литературы при
гипертензивных расстройствах у беременных отмечаются усиление продукции провоспа-лительных цитокинов [2], активация лейкоцитов [3], повышение белков острой фазы воспаления [4], что позволило ряду авторов провести аналогию между преэклампсией и системной воспалительной реакцией [5]. Частью системного воспалительного ответа является эндотелиальная дисфункция, сопровождающаяся изменением взаимодействия циркулирующих клеток крови и эндотелия, усилением проницаемости стенок сосудов, накоплению активированных клеток преимущественно в периваскулярных тканях с развитием локальной воспалительной реакции и оксидантного стресса [6]. Сам процесс транссосудистой миграции клеток является многоступенчатым и обусловлен участием молекул адгезии различных классов, каждые из которых участвуют на определенном этапе взаимодействия клеток крови и эндотелио-цитов сосудистой стенки.
Целью настоящего исследования было определить клинические факторы риска развития преэклампсии и выявить особенности изменения степени зрелости нейтрофилов и экспрессии ими молекул адгезии у беременных с различными формами гипертензивных нарушений.
Проведено клиническое обследование 371 беременной женщины в 24-36 недель геста-ции. Из них у 136 имелась ХАГ, у 83 женщин -ПЭ на фоне ХАГ, у 102 женщин - ПЭ, у 50 женщин беременность протекала без гипер-тензивных расстройств (контрольная группа). Лабораторное обследование проведено 152 женщинам.
В периферической венозной крови проводилось исследование: абсолютного содержания лейкоцитов (Т/л - тера/литр), относительного содержания нейтрофилов, уровня палочкоядерных и сегментоядерных клеток в общей фракции лейкоцитов на гематологическом анализаторе VEGA (Roche, Франция); относительного содержания CD49b+, CD31+ и CD56+ клеток в популяции нейтрофилов (CD14CD45+) на проточном цитофлюориме-тре FACSCantoII в программе FACSDiva (Becton Dickinson, США); сывороточного уровня С-реактивного белка (С-РБ) (мг/л) на микропланшетном ридере Multiscan (Labsystems, Финляндия). Статистический анализ полученных результатов осуществлялся в пакете при-
кладных лицензионных программ "Microsoft Office 2010", "Statistica for Windows 6.0". Расчет значений относительного риска - OR, доверительного интервала - CI при уровне значимости 95% осуществлялся с использованием системы "Open Epi". Проверка рядов данных на нормальность распределения осуществлялась с помощью критериев Колмогорова и Шапиро-Уилка. Достоверность различий между показателями оценивалась по t-критерию Стьюдента.
Учитывая, что ПЭ является мультифакто-риальной патологией, мы провели анализ клинических факторов, в том числе и инфекцион-но-воспалительных, влияющих на развитие данной патологии. Проведенный эпидемиологический анализ с расчетом значений относительного риска и доверительного интервала показал, что медико-биологическими факторами риска развития преэклампсии (по сравнению с группой контроля) являются: индекс массы тела более 30 кг/м2 (OR=9,1; 95%CI 1,2-70,8; р=0,01), первые роды (OR=3,7; 95%CI 1,8-7,7; р<0,001), анемия беременных в первой половине гестации (OR=2,3; 95%CI 1,1-4,9; р=0,02), угроза прерывания беременности во втором триместре (OR=4,4; 95%CI 1,7-11,2; р<0,001). Обращает на себя внимание высокий удельный вес инфекционно-воспалительных факторов в данной группе: ОРЗ в первом триместре беременности повышает риск в 8,6 раз, хронический пиелонефрит в 4,1 раза, воспалительные заболевания органов малого таза в анамнезе в 2,8 раза. Факторами риска развития ПЭ у беременных с ХАГ (по сравнению с женщинами первой группы) являются: отягощенная по гипертонической болезни наследственность (OR=2,2; 95% CI 1,3-3,9; р=0,001), длительность артериальной гипертензии более пяти лет (OR=2; 95% CI 1,0-3,2; р=0,02), индекс массы тела более 30 кг/м2 (OR=2,3; 95% CI 1,3-4,0; р=0,01), табакокурение (OR=1,9; 95% CI 1,3-2,9; р=0,04), отсутствие родов в анамнезе (OR=2; 95% CI 1,1-3,5; р=0,02), вторая стадия гипертонической болезни (OR=2,2; 95% CI 1,2-3,9; р=0,01), третья степень артериальной гипертензии (OR=2,4; 95% CI 1,7-3,4; р=0,01). Из инфекционно-воспалительных факторов в данной группе влияние оказывают только хронический пиелонефрит, увеличивая риск ПЭ в 2,5 раза и хронический гастрит, повышая риск в 2 раза.
Выявленный нами высокий уровень значимости инфекционно-воспалительной патологии у женщин с ПЭ сочетался с достоверным повышением содержания С-РБ в сыворотке периферической крови по сравнению с показателями женщин контрольной группы вне зависимости от того существовала артериальная гипертензия ранее или выявлена впервые при беременности (3,46±0,43 мг/л в контрольной группе; 11,22±1,87 мг/л в группе ХАГ, р<0,001; 14,02±3,49 мг/л в группе ПЭ на фоне ХАГ, р<0,01; 12,77±3,08 мг/л в группе ПЭ, р<0,01). Наряду с уровнем С-РБ, маркерами воспаления являются повышение абсолютного содержания лейкоцитов и относительного содержания нейтрофилов в крови. Однако по нашим данным достоверное повышение абсолютного содержания лейкоцитов в периферической крови имелось только в группе женщин с ПЭ по сравнению с показателями в контрольной группе (9,87±0,39 Т/л в контрольной группе; 9,80±0,50 Т/л в группе с ХАГ, р>0,05; 10,15±0,40 Т/л в группе ПЭ на фоне ХАГ, р>0,05; 11,77±0,52 Т/л в группе с ПЭ, р<0,01). Относительное содержание нейтрофилов в периферической крови было выше только у женщин с ПЭ (р<0,01) и с ПЭ на фоне ХАГ (р<0,02) по сравнению с контрольной группой (табл.). При оценке степени зрелости нейтрофилов в исследуемых группах было отмечено более высокое содержание сегментоядерных зрелых форм нейтрофилов у женщин с преэклампсией (р<0,01 для группы ПЭ, р<0,001 для группы ПЭ на фоне ХАГ). Расчет ядерного индекса (ЯИ) сдвига дифференцировки нейтрофилов, вычисляемого как отношение незрелых форм нейтро-
филов к сегментоядерным клеткам (Г. А. Даш-таянц, 1978), выявил тенденцию к снижению данного показателя в группах женщин с ХАГ и с ПЭ (0,011±0,004 в контрольной группе; 0,004±0,002 в группе с ХАГ; 0,006±0,002 в группе с ПЭ, p>0,05 во всех случаях).
Экспрессия молекул межклеточной адгезии нейтрофилами у беременных с гипер-тензивными расстройствами имела определенные особенности. Так, повышение содержания CD49b+ нейтрофилов в периферической крови было характерно для женщин с ПЭ (р<0,02), в том числе развившейся на фоне ХАГ (р<0,001) по сравнению с группой контроля. Содержание CD49b+ нейтрофилов в группе женщин с ХАГ и группе контроля достоверно не отличалось друг от друга (р>0,05). Повышение количества CD31+ и CD56+ ней-трофилов отмечено у всех беременных, имевших гипертензивные нарушения в отличие от группы контроля: при ХАГ (р<0,02, р<0,01), при ПЭ (р<0,01, р<0,001) и при ПЭ на фоне ХАГ (р<0,01, р<0,01).
Проведенные нами исследования показали, что для всех женщин с гипертензив-ными расстройствами при беременности характерны признаки воспалительной реакции, в том числе определяемые у
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.