ЖУРНАЛ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ, 2008, том 63, № 5, с. 524-531
^=ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ =
УДК 543.544
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СИРОПА "ПАССИФИТ"
© 2008 г. Г. Б. Голубицкий*, В. В. Дшльдина*, Е. М. Басова**, В. М. Иванов***, Е. В. Будко****
*ОАО "Фармстандарт-Лексредства" 305039 Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18 ^Международный университет природы, общества и человека "Дубна" 141980 Московская обл., Дубна, ул. Университетская, 19 ***Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет
119992 Москва, Ленинские горы ****Курский государственный медицинский университет
305004 Курск, ул. К. Маркса, 3 Поступила в редакцию 01.11. 2006 г., после доработки 21.07.2007 г.
Разработаны методики качественного анализа нового лекарственного средства - сиропа "Пасси-фит". Оптимизированы условия выделения активных веществ. Методом тонкослойной хроматографии на пластинках Кизельгель 60/Кизельгур F254 обнаружены экстракты валерианы и шишек хмеля. Методом газожидкостной хроматографии на капиллярной колонке с неподвижной фазой 0V-101 и пламенно-ионизационным детектором идентифицированы ментол (летучий компонент масла мяты перечной), тимол и его изомер карвакрол (компоненты экстракта чабреца), а также сорбиновая кислота (консервант). Методом ВЭЖХ с обращенными фазами на колонке Zorbax SB C8 в режиме градиентного элюирования с УФ-детектированием при 210 и 330 нм идентифицированы лютеолин, тимол, рутин и сорбиновая кислота. В составляющих сиропа рутин не обнаружен.
Сироп "Пассифит" - оригинальный препарат седативного действия, содержащий в качестве действующих компонентов вещества - жидкого экстракта чабреца, густого экстракта валерианы, экстракта шишек хмеля, настоек мяты перечной, боярышника, а также растворы сорбита и сорби-новой кислоты. Как лекарственный препарат, "Пассифит" представляет большой интерес, поэтому обеспечению и контролю его качества на производстве уделяют особое внимание. Важнейшим показателем качества многокомпонентных лекарственных препаратов является их подлинность.
Одним из основных действующих веществ корня валерианы лекарственной является валере-новая кислота. Известна работа [1] по выделению и идентификации валереновой кислоты из высушенного сырья валерианы лекарственной для оценки возможности использования ее в качестве стандартного образца для определения качества препаратов валерианы. Вещества извлекали из сухого свежеизмельченного сырья хлороформом. Упаренный экстракт растворяли в эфире, и сумму кислот извлекали 5%-ным раствором безводного карбоната натрия. Полученный после этого раствор подкисляли серной кислотой до рН 2,
сумму кислот извлекали хлороформом и упаривали на роторном испарителе. Суммарную фракцию кислот растворяли в эфире и выделяли фракции кислот растворами гидрокарбоната и карбоната натрия с повышением основности. Отобранные фракции вновь подкисляли серной кислотой до рН 2, экстрагировали хлороформом и упаривали на роторном испарителе. Фракцию слабых кислот разделяли на силикагеле методом колоночной хроматографии с применением ступенчатого градиентного элюирования петролей-ным эфиром и его смесями с ацетоном. Фракции, содержащие валереновую кислоту, объединяли и упаривали в вакууме на роторном испарителе. Из полученной маслянистой жидкости выделяли валереновую кислоту кристаллизацией из смеси (1 : 1) диэтилового и петролейного эфиров. Подлинность и чистоту полученной в виде бесцветных призматических кристаллов массы подтверждали методами ЯМР, масс-спектрометрии и определением температуры плавления. На тонкослойной хроматограмме, полученной на силикагеле с применением смеси (15 : 3) петролейный эфир-ацетон обнаружено одно пятно розового цвета после проявления раствором ванилина в серной кислоте.
Для подтверждения качества и доказательства подлинности многокомпонентного препарата важно установить наличие в образцах всех предусмотренных технологией ингредиентов. Для этого очень удобна тонкослойная хроматография (ТСХ), поскольку получаемые результаты дают наглядный и однозначный ответ.
Некоторые биологически активные вещества "Пассифита" высоколетучи, поэтому для их обнаружения эффективна газожидкостная хроматография (ГЖХ). Внешний вид сиропа и его составляющих указывает на содержание разнообразных окрашенных веществ. Обнаружить их можно методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометриче-ским детектором в УФ- и видимой областях спектра. Кроме того, многие из этих веществ термолабильны и нелетучи, поэтому ВЭЖХ для их обнаружения эффективнее ГЖХ.
Цель данной работы - разработка методик качественного анализа нового многокомпонентного лекарственного препарата "Пассифит" методами ТСХ, ГЖХ и ВЭЖХ.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Реагенты и препараты. Для приготовления элюентов и растворения анализируемых препаратов использовали ацетонитрил для градиентной хроматографии ("Мерк", Германия), ацетон ос.ч., гексан "для хроматографии", хлороформ х.ч. "для хроматографии", диэтиловый эфир "для наркоза" и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18.2 МОм/см, полученную на установке Direct Q (Millipore). Для приготовления стандартных растворов использовали тимол и сорби-новую кислоту фармацевтического качества, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям нормативной документации (НД), а также квер-цетин, рутин и лютеолин реагентной чистоты ("Сигма", США). Для растворения стандартов использовали 96%-ный ректификат этанола, соответствующий всем требованиям НД. Все остальные использованные реактивы имели квалификацию не ниже ч.д.а. Использованные в работе экстракты и настойки были приготовлены в лаборатории в соответствии с НД и технологическим регламентом.
Аппаратура. Использовали жидкостной хроматограф Waters Alliance 2695 с диодно-матрич-ным детектором Waters 2996. Величина "мертвого" объема хроматографа по паспорту - менее 0.650 мл. Колонка длиной 150 мм и внутренним диаметром 4.6 мм с предколонкой 20 х 4.6 мм заполнена обращенно-фазовым сорбентом Zorbax
SB C8 с размером частиц 3.5 мкм (Agilent Technologies, США). Разделение вели при температуре 40°С. В случае ГЖХ использовали газовый хроматограф "Кристалл 2000М" (СКБ "Хроматэк", Россия) с пламенно-ионизационным детектором и капиллярной колонкой из плавленого стекла длиной 50 м, внутренним диаметром 0.3 мм с неподвижной жидкой фазой OV-101. Температура колонки 220°С, температура испарителя 250°С, температура детектора 280°С. Газ-носитель -азот, расход 10 мл/мин, деление потока 1 : 20. Расходы водорода и воздуха 20 мл/мин и 200 мл/мин соответственно. Объем проб 1.0 мкл.
Для разделения компонентов проб методом ТСХ использовали хроматографические пластины размером 5 х 15 см с сорбентом Кизельгель 60/Кизельгур F254 на алюминиевой подложке ("Мерк", Германия).
Приготовление растворов. При использовании ТСХ для приготовления сиропа в соотношениях согласно технологии производства смешивали растворы сорбита, сорбиновой кислоты, экстракта чабреца жидкого, экстракта валерианы густого, настойки мяты перечной, настойки боярышника и экстракта шишек хмеля. При приготовлении пробы для обнаружения компонентов экстракта валерианы к 50 мл препарата прибавляли 2.5 мл 15%-ной H2SO4, перемешивали, полученный раствор помещали в делительную воронку и трижды экстрагировали хлороформом порциями 40, 30 и 20 мл соответственно. Экстрагировали, осторожно перемешивая в течение 3 мин. Экстракты объединяли и фильтровали через бумажный фильтр с 3.0 г безв. Na2SO4, смоченный хлороформом, в круглодонную колбу. Растворитель отгоняли на водяной бане при 40°С под вакуумом досуха. Остаток в колбе растворяли в 0.5 мл 96%-ного этанола.
Для обнаружения компонентов экстракта шишек хмеля 50 мл препарата помещали в делительную воронку и трижды экстрагировали хлороформом порциями 40, 30 и 20 мл, осторожно перемешивая в течение 3 мин. Далее поступали, как при обнаружении компонентов экстракта валерианы.
Для приготовления реагента 0.16 г ванилина растворяли в смеси 16 мл воды и 30 мл конц. H2SO4.
Для приготовления растворов стандартных образцов для ГЖХ точную навеску 0.0300 г тимола помещали в мерную колбу емк. 50 мл, прибавляли 15 мл диэтилового эфира и перемешивали до полного растворения. Разбавляли раствор диэти-ловым эфиром до метки (раствор А). Точную навеску 0.0300 г ментола помещали в мерную колбу емк. 50 мл, прибавляли 15 мл диэтилового эфира и перемешивали до полного растворения. Прибавляли 5.0 мл раствора А, разбавляли диэтило-
вым эфиром до метки и перемешивали (раствор Б). Около 0.0150 г сорбиновой кислоты помещали в коническую колбу с притертой пробкой емк. 50 мл, прибавляли 25 мл воды и перемешивали до полного растворения. Добавляли 0.25 мл глицерина и перемешивали. Добавляли 5.0 мл раствора Б и встряхивали 10 мин. После расслоения жидкости в течение 1 ч эфирный слой использовали для анализа. Для приготовления испытуемого раствора 25.0 мл анализируемого сиропа помещали в коническую колбу с притертой пробкой емк. 50 мл, добавляли 5.0 мл диэтилового эфира и встряхивали 10 мин. После расслоения жидкости в течение 1 ч эфирный слой использовали для анализа.
Растворы стандартных образцов (PCO) для ВЭЖХ тимола, рутина, лютеолина и кверцетина в этаноле с содержанием по 0.1 мг/мл индивидуального вещества готовили растворением точных навесок. Стандартный образец сорбиновой кислоты (0.1 мг/мл) растворяли в смеси (10 : 90) CH^N-вода. Для приготовления испытуемых растворов 2.0 мл исходных препаратов помещали в мерные колбы емк. 50 мл и растворяли в смеси (10 : 90) CH^N-вода, за исключением экстракта шишек хмеля, который растворяли в этаноле.
Выполнение анализа. TCX. На линию старта хроматографической пластинки наносили 15 мкл испытуемого раствора в виде полоски длиной 1 см. Пластинку с нанесенной пробой высушивали на воздухе в течение 10 мин и помещали в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью (1 : 2) ацетон-гексан, и хроматографиро-вали восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы проходил 12 см, пластинку вынимали из камеры, высушивали на возд
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.