ЖУРНАЛ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ, 2008, том 63, № 6, с. 566-580
= ОБЗОРЫ
УДК 543.544
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ АНАЛИЗА МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ
© 2008 г. А. В. Костарной*, Г. Б. Голубицкий*, Е. М. Басова**, Е. В. Будко***, В. М. Иванов****
*ОАО "Фармстандарт-Лексредства" 305039 Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18 ^Международный университет природы, общества и человека "Дубна" 141980 Московская обл. Дубна, ул. Университетская, 19 ***Курский государственный медицинский университет 305004 Курск, ул. К. Маркса, 3 ****Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет
119992 Москва, Ленинские горы Поступила в редакцию 04.07.2007 г., после доработки 24.09.2007 г.
Обзор публикаций за последние 10-12 лет по анализу многокомпонентных лекарственных препаратов методом ВЭЖХ. Обсуждаются особенности анализа готовых лекарственных форм, применяемые сорбенты, состав подвижной фазы, режим элюирования, способы получения производных, используемые детекторы, способы снижения продолжительности анализа. Рассмотрено применение ионообменной, ион-парной и энантиоселективной ВЭЖХ для определения компонентов лекарственных препаратов.
Создание высокоэффективных многокомпонентных лекарств является одной из основных теоретических и практических задач современной фармакологии и фармации, поэтому важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препаратов. Анализ многокомпонентных смесей титриметри-ческими и спектрофотометрическими методами трудоемок, включает много отдельных методик определения индивидуальных компонентов, поэтому трудоемок и длителен. Для проверки чистоты, однородности и устойчивости промышленной продукции, а также в анализе биологических жидкостей и тканей для установления соответствующей дозировки, путей метаболизма и фармакоки-нетики, целей судебной медицины широко применяют современные хроматографические методы: газовую хроматографию, хроматомасс-спектро-метрию, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и тонкослойную хроматографию. ВЭЖХ идеально подходит для проверки чистоты и качества лекарственных препаратов, особенно в тех случаях, когда применение газожидкостной хроматографии (ГЖХ) затруднено из-за недостаточной термической устойчивости или низкой летучести соединений. Поэтому ВЭЖХ чаще, чем ГЖХ, используют для контроля качества продукции большинства фармацевтических фирм. ВЭЖХ включена в отечественную
фармакопею [1] и ряд зарубежных фармакопей [2, 3]. Достижения в области разработки новых сорбентов, обладающих высокой селективностью, и повышение чувствительности проточных спек-трофотометрических, флуориметрических и электрохимических детекторов еще больше способствуют применению ВЭЖХ в анализе лекарственных препаратов.
Обсуждено применение ВЭЖХ для определения барбитуратов [4], витаминов [5, 6], гормонов [7], противогерпетических препаратов [8]. Обзоров по анализу многокомпонентных лекарственных смесей с одновременным определением компонентов из одной пробы не обнаружено.
Цель данной работы - обзор работ за последние 10-12 лет по применению ВЭЖХ для количественного определения составляющих многокомпонентных препаратов.
Особенности ВЭЖХ при анализе готовых лекарственных средств. Для готовых лекарственных средств (ГЛС), помимо идентификации и количественного определения действующих компонентов, ВЭЖХ используют при испытаниях на растворимость, однородность дозирования, для оценки стабильности препаратов при хранении. Удобно определять и различные вспомогательные вещества, в том числе консерванты и стабилизаторы. Консерванты определяли в смесях доксорубицина и 5-фторурацила, этопозида и цитарабина [9], в
противогрибковых композициях [10], а стабилизаторы определяли в сиропе "Олиговит" [11].
Высокая селективность метода позволяет определять родственные примеси, в том числе изомеры и продукты деградации в фармпрепаратах. Успешно разделены изомеры мезилата 2-бромэр-гокриптина в таблетках "Абергин" [12] и псорале-на [13]. На хроматограмме субстанции витамина В2 имеется до 5 индивидуальных пиков [11], а субстанция витамина А может содержать, помимо ретинола, его эфирные производные (ацетат, пальмитат) [14]. В подобных случаях количественный состав смеси наиболее рационально определять именно методом ВЭЖХ.
К недостаткам ВЭЖХ следует отнести необходимость предварительного отделения некоторых вспомогательных веществ, в частности, суспендирующих агентов, быстро выводящих из строя хро-матографические колонки [15].
ВЭЖХ имеет некоторые ограничения при анализе многокомпонентных ГЛС, содержащих компоненты в макро- и микроколичествах. Описано по крайней мере четыре способа решения указанной проблемы. Наиболее очевидный метод - определение микрокомпонентов в концентрированном образце и остальных составляющих после соответствующего разбавления. Так, согласно фармакопее Великобритании, таблетки "Ко-дидрамол", содержащие тартрат дигидрокодеина и парацетамол в соотношении по массе 1 : 50, анализируют, используя водно-метанольный экстракт таблеток, содержащий тартрат дигидрокодеина в количествах, достаточных для его надежного определения. Затем экстракт разбавляют в 50 раз и определяют парацетамол [2]. Недостатками подобных методик являются перегрузка колонки, влияющая на качество разделения и форму пиков, и уменьшение срока службы колонки. Принципиально иной подход реализован при определении компонентов препарата "Каффетин" (0.21 г пропифеназона, 0.25 г парацетамола, 0.05 г кофеина, 0.01 г фосфата кодеина) [16]. Фосфат кодеина отделяют и концентрируют жидкостно-жидкостной экстракцией, а затем определяют методом ВЭЖХ. Экстракция увеличивает продолжительность анализа, приводит к потерям и снижает точность, поэтому стараются обойтись без нее. Однако таблетки "Пентал-гин 1С№', содержащие по 0.3 г анальгина и парацетамола, 0.05 г кофеина, 0.008 г фосфата кодеина, 0.01 г фенобарбитала, удалось проанализировать в одну стадию без предварительного разделения и концентрирования [17]. В таком случае повышаются требования к качеству применяемой воды и реактивов для уменьшения количества и величины системных пиков, мешающих определению компонентов, содержащихся в относительно малых количествах. Наиболее оптимален в некоторых случаях четвертый подход - определение микро-
компонентов альтернативными методами. Так, например, определяли гидрохлорид эфедрина и сульфат атропина в восьмикомпонентных таблетках "Спазмовералгин нео" при содержании ниже предела обнаружения [18].
В ряде случаев по объективным причинам метод ВЭЖХ не применим для определения всех компонентов ГЛС. Аминокислоты, не поглощающие в УФ-области спектра, при использовании спектрофотометрического детектора необходимо предварительно дериватизировать. Однако дери-ватизация Ь-цистина (препарат "Элтацин") затруднена из-за нестабильности производных. Поэтому Ь-цистин определяют окислительно-восстановительным титрованием, два других компонента - Ь-глутаминовую кислоту и глицин - методом ВЭЖХ [19]. При анализе препарата "Меновазин" (новокаин, анестезин, ментол) методом ВЭЖХ с УФ детектированием ментола, молярные коэффициенты поглощения которого низки, его определяют альтернативным методом [20]. Ряд фармакопейных методик анализа двухкомпонентных ГЛС [2, 3] включает микробиологическое определение антибиотиков, другой компонент определяют методом ВЭЖХ. Такой подход не всегда оправдан, если все компоненты можно определить методом ВЭЖХ [21].
Используемые сорбенты. В настоящее время подавляющее большинство лекарственных препаратов анализируют в условиях обращенно-фазовой хроматографии, используя чаще всего в качестве сорбента силикагель с привитыми октадецилсила-нольными группами (С 18). Сорбенты с другими привитыми алкильными группами, обладающие различной селективностью, также применяют в фармацевтическом анализе [22, 23]. Используют привитые фазы триметилсилана, С6 [3], С8 [24, 25,26], С16 [10.27], С30 [28]. С удлинением алкиль-ного радикала, привитого к сорбенту, увеличивается удерживание компонентов. В ряде случаев оправдано применение фенильных [3] и нитриль-ных [24, 29] привитых фаз. Сорбенты с привитыми СК-группами пригодны как для обращенно-фазо-вого, так и нормально-фазового вариантов. Эти сорбенты интересны тем, что анализ можно выполнить с использованием подвижных фаз, содержащих небольшое количество органических компонентов (до 0.25% [30]). Это немаловажно, если учесть высокую стоимость растворителей для ВЭЖХ. При сравнении удерживания на колонках с СК и С18-фазами на примере смеси этмозина, эта-цизина и возможных примесей найдено [24], что продолжительность определения на колонке с СК-фазой почти в два раза меньше, чем на колонке с С18-фазой при меньшей концентрации ацето-нитрила в элюенте.
Нормально-фазовый вариант применяют гораздо реже. Ряд смесей лекарственных препаратов промежуточной полярности можно анализировать
[30, 31] как в нормально-фазовом, так и в обра-щенно-фазовом вариантах, но обычно в таких случаях используют обращенно-фазовый вариант. В то же время отмечается, что селективность хро-матографического разделения на силикагеле выше, чем на алкилсиликагелях [32]. Кроме того, нормально-фазовый вариант можно успешно использовать для определения очень полярных молекул, удерживание которых на обращенных фазах незначительно [33]. В нормально-фазовом варианте сорбентом обычно служит немодифицирован-ный силикагель [32, 34, 35]. Его недостаток в том, что воспроизводимые результаты и четкие пики получаются при минимальном содержании воды в подвижной фазе, и его надо тщательно контролировать. Альтернативу немодифицированному си-ликагелю составляют сорбенты с привитыми полярными фазами, пригодные для нормально-фазового варианта - нитрильные и диольные [33].
В последнее время возрастает интерес к монолитным колонкам [36, 37]. Они имеют взаимосвязанный скелет с большими порами, обеспечивающими проницаемость и высокую эффективность. Монолиты на основе силикагеля имеют поры двух размеров: 1-3 мкм и 10-25 нм, поверхность пор достигает 300 м2/г
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.