Объединенный иммунологический форум, Санкт-Петербург 2008
клетки иммунной системы
популяции и субпопуляции, активация, апоптоз и эффекторные функции
Quantitative regulation of the strength and class of the adaptive immune response
P.D. Hodgkin
The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research, 1G Royal Parade Parkville Victoria 3050
When lymphocytes, the primary mediators of immunity, are stimulated they proliferate and their rate of growth, survival and differentiation is highly regulated by the receipt of soluble and cell contact mediated signals. This complex system is well suited to experimental dissection, and offers a useful testing ground for developing concepts in systems biology. A major tool in measuring and analysing the immune response is flow cytometry. Careful quantitative experiments with this method have revealed how cells follow a combination of relatively simple cellular rules operating independently. These rules can be used to develop quantitative models of cell growth, survival and differentiation that can be used to 'calculate' the net result of adding signals together. A software tool, available freely, will be demonstrated for its ability to simulate immune responses and extract important parameters of cell function from flow cytometry data.
TEpredict: новые подходы к предсказанию т-клеточных эпитопов
Д.В. Антонец, А.З. Максютов
ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, Кольцово,
Новосибирская обл., Россия
Для предсказания Т-клеточных эпитопов разработана программа TEpredict. Модели, используемые в ней, были получены с помощью метода частных наименьших квадратов на основе информации, взятой из IEDB - наиболее полной в настоящее время базе, содержащей экспериментальные данные о связывании пептидов с различными аллельными вариантами молекул МНС. При построении моделей использовался новый метод параметризации пептидов - запись аминокислот в виде векторов свойств, что позволяет учесть взаимное сходство/отличие аминокислот. Тестирование программы показало, что для большинства полученных моделей значение площади под характеристической кривой находится в пределах от 0,75 (хорошее предсказание) до 0,96 (очень хорошее предсказание). Большинство моделей демонстрирует высокую чувствительность (50-80%) и высокую специфичность предсказаний (75-99%). Сравнительный анализ качества предсказаний с такими программами как ProPredl, SVRMHC, SVMHC и SYFPEITHI показал, что TEpredict им не уступает или превосходит их. TEpredict также позволяет исключить из выборки предсказанных эпитопов пептиды, имеющие локальное сходство с белками человека; оценить в целевой популяции процент носителей аллелей МНС, по которым рестриктирован Т-клеточный ответ на выбранные пептиды. Таким образом, TEpredict продемонстрировал высокое качество предсказаний и может стать удобным инструментом для разработки полиэпитопных вакцин, в том числе вакцин против таких опасных инфекционных агентов, как ВИЧ, вирус гриппа и других.
Экспрессия CD25 и CD28 антигенов на т-лимфоцитах в зависимости от количества пройденных делений in vitro в норме и у больных ревматоидным артритом
Е.А. Блинова, В.И. Борисов, В.С. Кожевников ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия
При ревматоидном артрите (РА) наблюдается экспансия Т-лимфоцитов на периферии, что из-за нарушения работы теломеразы приводит к укорочению теломер и вступлению клеток в апоптоз. В данной работе методом проточной цитометрии сравнивалась экспрессия CD25 и CD28 антигенов на Т-лимфоцитах in vitro на 7 сутки в зависимости от количества пройденных делений (с помощью CFSE) у здоровых доноров и больных РА, так как в отсутствие CD28 развивается слабый ответ на стимуляцию. После активации a-CD3 антителами и IL-2 количество CD28+ клеток увеличилось у доноров на 7,8% и у больных РА - на 36,4%; а количество CD25+ клеток возросло на 86% и на 89% соответственно, в культуре количество CD25+ клеток стало более 90%. Максимум CD28+ клеток приходится на 5 деление у доноров и на 4 у больных РА и составляет 15% и 25% соответственно. Наибольшая экспрессия CD28 наблюдается на 2 деление у обеих групп, и в дальнейшем снижается. Максимум CD25+ клеток приходится на 4-5 деление у доноров и на 3 у больных РА и составляет 18% и 35% соответственно. Наибольшая экспрессия CD25 обнаруживается на 2 делении у доноров и на 1 у больных РА, с последующими делениями она снижается, причем быстрее у больных РА, чем у доноров. Возможно потому, что после 3 деления до 3% увеличивается число клеток, вступающих в апоптоз. Но общий уровень экспрессии CD25 и CD28 увеличивается в обеих группах. Видно, что при РА развивается патологический ответ, быстрый, но рано заканчивающийся. Количество делений, пройденных T-клетками, при РА меньше, вследствие нарушений процессов активации и пролиферации, возникших у этих клеток в процессе большего числа делений, чем у доноров в гомеостатической пролиферации.
Оценка пролиферативной активности иммунокомпетентных клеток методом проточной ДНК-цитометрии
Н.В. Бычкова, Н.И. Давыдова, Д.А. Вологжанин*, Г.Н. Бисага* Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России;
*Военно-Медицинская академия, Санкт-Петербург, Россия
Функциональную активность Т- и В-лимфоцитов можно определить по их ответу в реакции бластной трансформации (РБТЛ) с митогенами и специфическими антигенами, который возможно оценить с помощью проточной ДНК-цитометрии. Для определения клинической значимости нового варианта методики РБТЛ нами обследовано 12 клинически здоровых доноров, 16 пациентов с тяжелой сочетанной травмой, 63 пациента с рассеянным склерозом. РБТЛ была поставлена в цельной крови с фитогемагглютинином и митогеном
лаконоса в течение 3 дней, основным белком миелина - в течение 7 дней. В результате проведенной работы выявлено достоверное увеличение спонтанной пролиферативной активности у пациентов с травмой и значимое снижение данного показателя у пациентов с рассеянным склерозом. Наблюдалось достоверное угнетение пролиферативной функции Т-лимфоцитов в первые дни после тяжелой сочетанной травмы по сравнению с клинически здоровыми людьми с последующим восстановлением пролиферативной активности к третьей-четвертой неделям после воздействия. В группе пациентов с рассеянным склерозом индексы стимуляции на основной белок миелина были значимо выше, чем у клинически здоровых лиц. Результаты исследований свидетельствуют о том, что быстрота и точность оценки пролиферации лимфоцитов методом ДНК-цитометрии могут являться гарантией того, что данная методика станет удачной альтернативой реакции бластной трансформации лимфоцитов с использованием радиоактивной метки.
Роль пролиферативной активности антителопро-дуцентов в формировании иммунной памяти
Е.Д. Гаврилова, О.Т. Кудаева, О.П. Колесникова, В.А. Козлов ГУ НИ Институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия
Закономерности формирования иммунной памяти в настоящее время ещё далеки от разрешения. Целью данной работы было исследовать зависимость интенсивности вторичного гуморального ответа от пролиферативной активности антителопродуцентов во время первичного ответа. Показано, что введение гидроксимочевины - ингибитора синтеза ДНК при формировании IgM-ответа на первое введение антигена в раннюю стадию фазы плато резко снижает количество IgM- и IgG-антителопродуцентов в селезёнке на пике первичного ответа, но лишь незначительно подавляет число IgG-АОК при вторичном ответе. Эффект проявляется при первичной иммунизации как оптимальной, так и низкой дозой антигена. Интенсивность первичного IgM- и IgG-ответов можно многократно усилить введением дополнительного количества антигена в ранний период фазы плато. Подавление пролиферации клеток параллельно с введением антигена в этот период приводило к отмене стимуляции IgM-, но не IgG-ответа. Изучение выраженности вторичного IgG-ответа в этих условиях не выявило корреляции с количеством IgM- или IgG-антителопродуцентов после первого введения антигена: резкое возрастание IgM- и IgG-АОК не сопровождалось стимуляцией вторичного IgG-ответа; подавление IgM-антителообразования не вызывало ингибиции вторичного IgG-ответа. Полученные данные позволяют предположить, что формирование клеток памяти не связано с активно пролиферирующим пулом антителопро-дуцентов, либо происходит на более ранних стадиях иммунного ответа (лаг- и лог-фазы).
Клеточные взаимодействия при иммунном ответе на поливинилпирролидон in vitro
М.В. Гаврилова, И.Н. Чернышова, Е.В. Сидорова ГУ НИИ ВС им. И.И. Мечникова, Москва, Россия
Изучение клеточных взаимодействий при ответе на Т-независимые антигены 2-го типа (ТН-2) затруднено отсутствием системы in vitro. Основным препятствием является невозможность выделения некоторых субпопуляций В-лимфоцитов в количествах, необходимых для создания требуемой плотности клеток в культуре. Для решения этой проблемы использовали культуры из смеси клеток конгенных мышей CBA и CBA/N. Мыши CBA/N, не имеющие CD5+ В-1 клеток, не отвечают на ТН-2, поэтому их спленоциты можно использовать в качестве «наполнителя» для изучения ответа В-лимфоцитов мышей СВА в культурах. Исследовали иммунный ответ на ТН-2 (поливинилпирролидон, ПВП) спленоцитов, клеток перитонеальной полости, В-1 и В-2 лимфоцитов мышей СВА. В-1 клетки получали из перитонеальной полости, а В-2 из селезенки мышей методом иммуномагнитной сепарации. Чистоту выделенных субпопуляций контролировали цитофлуориметрически. Клетки культивировали со спленоцитами мышей СВА/N в разных соотношениях в присутствии
ПВП и без него. Число антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток (АОК и ИГОК, соответственно) определяли методом ELISPOT. При 50% соотношении СВА и СВА/N клеток добавление ПВП вызывало увеличение числа АОК и ИГОК в культуре, т.е индуцировало первичный иммунный ответ. Это указывает на то, что активация клеток и иммунный ответ на ТН-2 в смешанных культурах обусловлены В-клетками мышей СВА. Описанная модель может быть использована для изучения взаимодействий разных субпопуляций В-лимфоцитов с другими клетками при иммун
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.