РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2014, том 8(17), № 1, с. 5-9
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ОСОБЕННОСТИ ОТВЕТА САМОК НА АНТИГЕНЫ САМЦА ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ С ПОВЫШЕННОЙ ЧАСТОТОЙ СПОНТАННЫХ АБОРТОВ У МЫШЕЙ
© 2014 г. Н.С. Глебездина, Е.М. Куклина
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук, г. Пермь, Россия
Поступила: 27.11.2013. Принята: 21.01.2014
Исследованы свойства и функции периферических Т-лимфоцитов самок мышей СБЛ/Л при беременности с повышенной частотой спонтанных абортов, дифференцированно для Т-клеток различной локализации — спленоцитов, лейкоцитов, клеток разных типов лимфатических узлов (отдельно дренирующих матку — парааортальных, и не дренирующих — подмышечных, мезентериальных). В том числе исследована реактивность по проли-феративному ответу арТ-лимфоцитов беременных самок СБЛ/Л в отношении аллоантиге-нов самцов линий БЛЬБ/е и ОБА/2 в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов. Показано, что реактивность арТ-лимфоцитов зависит от их локализации: Т-лимфоциты лимфатических узлов, дренирующих матку, отвечают на спленоциты самца достоверно эффективнее Т-клеток лимфоузлов других типов. Для комбинации СВА/ЛхОБЛ/2, характеризующейся высоким уровнем спонтанных абортов, показано отсутствие пролифера-тивного ответа арТ-лимфоцитов беременных самок на антигены самца, что, возможно, является одной из причин предрасположенности к абортам.
Ключевые слова: беременность, спонтанные аборты, аРТ-лимфоциты, индекс стимуляции, экстратимическая дифференцировка
ВВЕДЕНИЕ
Проблема спонтанных абортов вызывает широкий интерес. В последнее время наука значительно продвинулась в понимании иммунных механизмов данного явления, однако этиология его не ясна. Согласно современным представлениям, для успешной имплантации и плацентации необходим достаточный уровень иммунореактивности материнского организма в отношении отцовских и феталь-ных антигенов [1].
В недавних исследованиях нами выявлен неизвестный ранее феномен — индукция реаранжировки генов Т-клеточного рецептора (T Cell Receptor, TCR) в периферических Т-лимфоцитах при беременности [2]. В частности, мы показали экспрессию ключевого маркера реаранжировки, рекомбиназы
Адрес: 614081, Пермский край, г. Пермь, ул. Голева, д. 13, ИЭГМ УрО РАН, Глебездиной Н.С. E-mail: glebezdina_n@mail.ru
RAG-1 (Recombination Activating Genes) в Т-клетках периферических лимфоидных органов беременных мышей. Теоретически такой процесс должен сопровождаться появлением на мембране Т-лимфоцита нового антигенного рецептора с измененной специфичностью [3]. А поскольку на периферии отсутствуют условия, обеспечивающие эффективную клональную селекцию вновь образующихся Т-клеток (как это в норме происходит в тимусе), реаранжировка генов TCR в периферических лимфоидных органах неизбежно должна сопровождаться изменением антигенраспознающего репертуара Т-лимфо-цитов, в частности, появлением аутореактив-ных Т-клеточных клонов.
Цель настоящей работы — сопоставить антигенраспознающую активность аРТ-лим-фоцитов беременных мышей с таковой для небеременных при нормальном аллогенном варианте скрещивания и в склонной к аборту комбинации.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Работа выполнена на самках мышей линии СВАЛ1, которых скрещивали с самцами линий ВАЬВ/е, моделируя нормальную аллоген-ную беременность, с БВА/2 — комбинацию с повышенной частотой спонтанных абортов, наиболее убедительную животную модель иммунологически опосредованных самопроизвольных абортов [4]. Беременность фиксировали по появлению вагинальной пробки. Срок беременности у животных (9-е сутки) подбирался в соответствии с тем, что у самок СВАЛ1хОВА/2 аборты происходят, как правило, на 10—14 день беременности [5, 6]. Экспериментальная группа (беременные самки) составила 21 мышь, контрольная (небеременные самки) — 25 мышей. Животных выводили из эксперимента методом цервикальной дислокации. Объектами исследования служили тимоциты и фракционированные периферические Т-лимфоциты, выделенные из лимфоузлов трех разных типов — парааортальных (дренирующих матку), мезентериальных и подмышечных (не дренирующих матку) [6]. Фракционированные Т-лимфоциты получали гомогенизацией лимфоузлов. В основной серии экспериментов из клеточной суспензии удаляли В-лимфоциты с помощью специфической антисыворотки к иммуноглобулинам мыши («Медгамал», Россия). В заключи -тельной серии экспериментов из клеточной суспензии направленно выделялись аРТ-лимфоциты — иммуномагнитным фракционированием с помощью моноклональных антител Н57 — 597 к р-цепи ТСИ мыши («СаН;ад», США).
Оценка реактивности проводилась по пролиферативному ответу фракционированных арТ-лимфоцитов лимфатических узлов (отдельно дренирующих матку — парааортальных, и не дренирующих — подмышечных, мезентериальных) беременных самок СВАЛ1 (2 х105 на пробу) на антигены самцов соответствующих линий — ВАЬВ/е и БВА/2, а также небеременных самок СВАЛ1, в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов. В качестве стимулирующих клеток использовали спленоциты самцов, а также, в ряде экспериментов, фракционированные аРТ-лимфоциты подмышечных и мезентериальных лимфатических узлов самок (2 х 104 на пробу), предварительно обработанных митомицином С (25 мкг/мл). Клетки культивировали 72 часа. Результаты оценивали в
тесте с МТТ (3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2r5)-diphenyltetrazolium bromide («Sigma»)), основанном на определении количества жизнеспособных клеток в пробе [7]. Для этого за 4 часа до окончания культивирования в пробы вносили МТТ (водорастворимая соль тетра-золия) в конечной концентрации 0,5 мг/мл. После культивирования пробы центрифугировали (1500 об/мин х 10 мин), удаляли супернатант и вносили изопропанол для со-любилизации формазана, образующегося из МТТ при разрезании тетразолиевого кольца дегидрогеназами и откладывающегося в клетке в виде гранул. Количество образовавшегося формазана оценивалось спектрофото-метрически при длине волны 570 нм. Индекс пролиферации определялся как отношение соответствующих показателей оптической плотности для стимулированной (Т-клетками самца) и не стимулированной проб. Статистический анализ проводился с использованием t-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Анализ пролиферативного ответа арТ-лим-фоцитов беременных самок СВА/J на антигены самцов соответствующих линий показал, что при нормальной аллогенной беременности индекс пролиферации Т-клеток выше, чем у небеременных животных (рис. 1), но зависит от происхождения Т-клеток — конкретно от типа лимфатических узлов, из которых они получены. Наиболее выраженным этот эффект был при нормальной аллогенной беременности (СВА/JxBALB/c) для Т-лимфо-цитов парааортальных лимфоузлов (дренирующих матку) (индекс стимуляции составил 2,09±0,222, p < 0,05), существенно меньшим, но статистически значимым — для подмышечных (1,69±0,196, p < 0,05), тогда как для Т-клеток мезентериальных лимфатических узлов (1,49±0,124) ответ на антигены самца не отличался от такового для небеременных самок СВА/J (1,39±0,089). Более того, достоверные различия в индексах пролиферации были выявлены и в пределах одной группы животных: ответ Т-клеток у беременных самок CBA/JxBALB/c был выше в парааортальных лимфоузлах (2,09±0,222, p < 0,05) по сравнению с мезентериальными (1,49±0,124). В отличие от нормальной беременности в комбинации CBA/JxDBA/2, характеризующейся высоким уровнем спонтанных абортов, ответа периферических Т-клеток на антиге-
Парааортальные Мезентериальные Подмышечные лимфатические лимфатические лимфатические узлы узлы узлы
■ Небеременные самки СВАЯ
■ Беременные самки СВАЛ х ВАЬВ/с
Рис. 1. Пролиферативный ответ периферических арТ-лимфоцитов самок СВА/Л на антигены самца в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов на модели нормальной аллогенной беременности. Примечание: в каждой группе 8 — 10 животных; *р < 0,05 (сопоставление с ответом Т-клеток соответствующих лимфатических узлов небеременных самок).
согласно современным представлениям, для успешной имплантации и плацентации необходим достаточный уровень иммунореактив-ности материнского организма в отношении отцовских и фетальных антигенов — цитоки-ны, секретируемые в ходе иммунного ответа, оказывают трофическое действие на плаценту и плод [1, 8].
В целом, вычленяя из всего многообразия выявленных эффектов данные, касающиеся реактивности Т-клеток различной локализации самок беременных мышей в отношении антигенов самца, можно сказать, что при нормальной аллогенной беременности (СВА/JxBALB/c) aßT-лимфоциты дренирующих матку (парааортальных) лимфоузлов отвечают на антигены самца достоверно эффективнее Т-клеток лимфоузлов, не дренирующих матку, — мезентериальных и подмышечных. Возможно, данный эффект связан с локальным изменением антигенрас-познающего репертуара этих клеток.
ОБСУЖДЕНИЕ
Парааортальные Мезентериальные Подмышечные лимфатические лимфатические лимфатические узлы узлы узлы
■ Небеременные самки СВА/1
■ Беременные самки СВАЛ х ВАЬВ/с
Рис. 2. Пролиферативный ответ периферических арТ-лимфоцитов самок СВА/Л на антигены самца в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов на модели комбинации, склонной к аборту.
Примечание: в каждой группе 8 — 10 животных; *р < 0,05 (сопоставление с ответом Т-клеток соответствующих лимфатических узлов небеременных самок)
ны самцов ОБА/2 не выявлено (1,01 ± 0,035, р < 0,05) (рис. 2). Возможно, отсутствие ответа в данной модели и является одной из причин предрасположенности к абортам, поскольку,
Мышиная модель СВА/Л*
ОБА/2 много лет является наиболее популярной животной моделью в исследовании им-мунологически опосредованных абортов [9—14]. К 13 дню гестации уровень спонтанных абортов достигает 20 — 50% [15—17]. Это значительно выше, чем в комбинации скрещивания СВА/Л*БЛЬБ/е, завершающейся нормальной беременностью (18% и 1%, соответственно) [18], хотя обе модели представляют собой аллогенный вариант беременности и обе аллогенные линии самцов несут Н-2О антиген (ген МНС I). Степень имплантации в обеих моделях сопоставима [19].
Важность этой генетической комбинации СВА/Л*ОБЛ/2
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.