РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2013, том 7(16), № 1, с. 77-82
== ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ ==
ПРОДУКЦИЯ ДО, sIgA В ВАГИНАЛЬНОМ СЕКРЕТЕ, ЭКСПРЕССИЯ TLR2, TLR9 ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ
СЛИЗИСТОЙ ЦЕРВИКАЛЬНОГО КАНАЛА ДО И ПОСЛЕ КОМПЛЕКСНОГО ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕГО ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ МАЛОГО ТАЗА У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
© 2013 г. Л.В. Шибина*, Л.И. Краснопрошина*, О.А. Свитич*, И.М. Ордиянц**, О.В. Слатинова*, С.А. Сходова
*ФГБУ НИИВС им. Мечникова РАМН, Москва, Россия;
**Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
Поступила: 25.02.2013. Принята: 28.02.2013
Целью работы являлось определение уровней IgG, IgA, sIgA в вагинальном секрете и TLR2, TLR9 в эпителиальных клетках цервикального канала с помощью ПЦР в режиме реального времени до и после проведения иммунокорригирующей терапии в составе комплексного лечения воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин репродуктивного возраста. Выявлено повышение уровня иммуноглобулинов sIgA, IgG, IgA в вагинальном секрете у женщин с хронически протекающими воспалительными заболеваниями органов малого таза и резкое их повышение при обострении по сравнению с показателями женщин группы контроля. После лечения отмечалась нормализация показателей. Уровень экспрессии TLR2 у женщин с острым течением воспалительных заболеваний органов малого таза был несколько выше, экспрессия TLR9 была увеличена в 13,7 раз по сравнению с женщинами группы контроля. Результатом успешного лечения становилась нормализация показателей TLR2, TLR9. Полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязи повышения уровня продукции иммуноглобулинов в вагинальном секрете, экспрессии TLR2, TLR9 в эпителии слизистой цервикального канала и степени выраженности воспалительного процесса. Нормализация показателей после лечения в сочетании с положительной динамикой в клинической картине свидетельствует об эффективности проводимой терапии. Данные методы могут быть использованы с целью дополнительной диагностики наличия, степени выраженности воспалительного процесса, а также для оценки эффективности иммунотерапии.
Ключевые слова: воспалительные заболевания органов малого таза, TLR2, TLR9, IgA, sIgA, IgG, вагинальный секрет
ВВЕДЕНИЕ
В последние годы на фоне возрастающей урбанизации, изменения образа и условий жизни населения, ухудшения экологической обстановки, характера питания, гиповитами-нозов и увеличения числа иммунодефицит-ных состояний возрастает заболеваемость воспалительных заболеваний органов малого таза (ВЗОМТ) [1]. Статистика Националь-
Адрес: 105064 Москва, Малый Казенный переулок, д. 5а. E-mail: larra_1@mail.ru
ного центра контроля заболеваемости (CDC, США) ежегодно отмечает около 1 млн. случаев ВЗОМТ. Это означает, что одна из десяти женщин репродуктивного возраста имеет урогенитальную инфекцию, причем у одной из четырех развиваются осложнения. В России структура заболеваемости несколько отличается: до 34% женщин страдают ВЗОМТ. Анализ результатов бактериологических исследований показывает структуру возбудителей ВЗОМТ. Большинство авторов солидарны во взгляде на эту проблему и утверждают, что ведущими инициаторами ВЗОМТ являют-
ся ассоциации хламидий, уреаплазмы, мико-плазмы, трихомонады, гарднереллы, грибов рода Candida и вирусов группы Herpes (вирусы герпеса 1 и 2 типа, цитомегаловирус, папи-ломавирус) [2]. Практически нет пациенток с привычным невынашиванием, у которых не было бы персистенции нескольких вирусов [3]. Анализ результатов многочисленных бактериологических исследований в гинекологии, произведенных за последние 50 лет, выявил смену возбудителей воспалительных заболеваний органов малого таза [4]. По данным международной статистики ВОЗ трихо-мониаз занимает 1-е место среди инфекций, передающихся половым путем [5]. Ежегодно в мире трихомониазом заболевают 174 млн. человек. Уреаплазма, также как и трихомони-аз, была обнаружена у 174 млн. 2-е место занимает хламидиоз — 92 млн. человек. ВЗОМТ достаточно редко вызываются одним возбудителем. Смешанные инфекции составляют примерно 20 — 30% в структуре уреаплазмен-ной инфекции (УИ), у каждой 3-й пациентки выявляется инфекционный процесс, вызванный несколькими возбудителями. Наибольшая заболеваемость ВЗОМТ приходится на период 15 — 24 лет [2]. Течение заболевания зависит от агрессивности микроорганизма, инициирующего воспалительный процесс, и от исходного состояния иммунитета пациентки. Персистенции микроорганизмов способствуют вторичные иммунодефицитные состояния как системного, так и местного уровня [6]. В настоящее время рост числа заболевших сопровождается и определенными особенностями инфекционных процессов. Распространение самолечения способствует развитию резистентности микроорганизмов к лечебному воздействию. Изменение образа жизни снижает иммунную защиту организма, что нередко способствует генерализации инфекционного процесса [1]. Для практического врача проблемой в диагностике и лечении хронических УИ является частое бессимптомное или субклиническое течение заболевания. Первичная инфекция в ряде случаев не диагностируется, а выявляется только при развитии вторичных проявлений или осложнений. В связи с указанными обстоятельствами первостепенными задачами становятся своевременная диагностика и эффективное лечение ВЗОМТ [2]. Таким образом, проблемы хронических воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин репродуктивного периода заключаются не только
в идентификации инфекционного агента, но и в определении вызванных ими изменений показателей иммунного статуса и необходимости адекватной коррекции этих состояний. Одним из основных факторов защиты слизистых оболочек от поражения инфекционными агентами являются секреторные IgA-антитела. В организме человека ежедневно секретируется от 3,5 до 5 г. sIgA, который осуществляет функцию иммунного исключения — они «обволакивают» бактерии, вирусы и препятствуют их прикреплению к клеткам слизистых оболочек и прохождению через них. Значительную роль в защите организма от патогенов имеет экспрессия Toll-подобных рецепторов (Toll-like receptor — TLR) на эпителиальных клетках слизистых организма. Большинство исследований посвящено иммунитету слизистых кишечника и дыхательных путей, однако все больше данных свидетельствуют о важной иммунологической роли слизистых женской половой системы. В последние годы доказана экспрессия TLRs (в особенности TLR2 и TLR4) в эпителии эндометрия и эпителиальных клетках нижних половых путей. Результаты исследований позволяют предположить, что TLR играют важную роль в осуществлении механизмов защиты и при нормальном функционировании женской репродуктивной системы [7].
Следовательно, для предупреждения развития хронических форм ВЗОМТ у женщин репродуктивного возраста необходимо проведение исследования показателей местного иммунитета с целью обоснованного применения иммунокорригирующего лечения в составе комплексной терапии.
Целью работы явилось исследовать динамику показателей IgG, IgA, sIgA вагинального секрета (ВС) и TLR2, TLR9 в эпителии слизистой цервикального канала до и после проведения иммунокорригирующего лечения в составе комплексной терапии ВЗОМТ у женщин репродуктивного возраста.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Общее количество обследуемых составило 105 человек, из них 78 женщин с ВЗОМТ (группа 1а — ВЗОМТ в стадии обострения, n = 56; группа 1б — ВЗОМТ в стадии ремиссии, n = 22) и 27 женщин, которые составили контрольную группу (группа 2). Возраст пациенток варьировал от 19 до 45 лет. Обследуемые женщины являлись пациентами жен-
ской консультации ГП № 157 САО г. Москвы. Всем пациенткам проводились общеклиническое, клинико-лабораторные, гинекологическое исследования, УЗИ органов малого таза; ПЦР-диагностика хламидий, цитомегалови-русов (ЦМВ), вирусов папилломы человека (ВПЧ) 16, 18, вирусов простого герпеса (ВПГ) I, II. Бактериальные посевы отделяемого влагалища с целью выделения вида условно-патогенных микроорганизмов, определения их количества и чувствительности к антибиотикам проводились в КВД № 3 работниками данного учреждения. Критериями отбора в контрольную группу служили следующие показатели: отсутствие воспалительных и инфекционных (ИШ, ВИЧ, НВв, Н^) заболеваний, аутоиммунной и эндокринной патологии. По результатам обследований проводили комплексную терапию, включающую иммунокорригирую-щее лечение. Повторные обследования проводили через 2 недели и через 3 месяца после проведенного лечения.
Для определения иммуноглобулинов в ВС разработали метод забора материала. Для этого у женщины во время осмотра в зеркалах производился забор только ВС, находящегося в заднем своде влагалища. Ватный тампон, пропитанный ВС, в пробирке-эппендорф поступал в лабораторию, где сразу проводилось определение уровня показателей 1дА, 1дС, в1дА. Для оценки данных показателей применялся метод радиальной иммунодиффузии в геле по С.А. МапсЫш [8] с использованием коммерческого набора, выпущенного НПЦ «Медицинская иммунология» [8, 9]. Согласно многочисленным методическим рекомендациям по работе с биологическими секретами [9, 10] в тест-системе использовано три типа моноспецифических сывороток: против 1дС человека, против а-цепи 1дА молекулы и против секреторного компонента. Таким образом, по количеству 1дА, определяемому в реакции с антисывороткой к а-цепи 1дА-мо-лекулы мы судили об общем уровне 1дА в ВС, а при определении иммуноглобулинов с антисывороткой к секреторному компоненту мы определяли суммарное содержание в1дА и свободного секреторного компонента. По разности этих двух величин мы могли оценить порядковую величину содержания свободного секреторного компонента в образце ВС. Постановку реакции проводили в соответствии с инструкцией, прилагаемой к наборам. Хранение образцов осуществлялось при температуре минус 20 °С.
Уровень экспрессии генов TLR2 и TLR9 в эпителиальных клетках цервикального канала определяли с помощью метода полиме-разной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Для этого выделяли РНК из эпителиальных клеток при помощи комплекта реагентов «РИБО-сорб» (ИнтерЛаб-Сервис, Россия), в строгом соответствии
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.