научная статья по теме РЕЦЕПТОРЫ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, ПЕРЕДАЧА СИГНАЛА ВНУТРИ КЛЕТОК, ГЛАВНЫЙ КОМПЛЕКС ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ Биология

Текст научной статьи на тему «РЕЦЕПТОРЫ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, ПЕРЕДАЧА СИГНАЛА ВНУТРИ КЛЕТОК, ГЛАВНЫЙ КОМПЛЕКС ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ»

Объединенный иммунологический форум, Нижний Новгород 2013

РЕЦЕПТОРЫ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, ПЕРЕДАЧА СИГНАЛА ВНУТРИ КЛЕТОК, ГЛАВНЫЙ КОМПЛЕКС ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ

Анализ двух полиморфизмов гена TLR 4 у больных туберкулезом легких представителей русской популяции Челябинской области

Беляева С. В.1, Бурмистрова А.Л.1, Суслова Т. А.2, Ананьева И. П.3

1Челябинский государственый университет,2 ОГУП «ЧОСПК»,3 ГУЗ «Противотуберкулезный диспансер № 3», Челябинск, Россия

Toll-подобные рецепторы (TLRs) являются ключевыми участниками врожденного иммунитета против микобактерий. Гены TLR 4 локализованы на 9 хромосоме (9q33.1). Наиболее изучены два SNP полиморфизма гена TLR4: Asp299Gly (A/G) и Thr399Ile (C/T). Данные положения приводят к изменениям в лиганд-связывающем сайте рецептора. Аллель Asp299Gly сопровождается провос-палительным фенотипом, тогда как Asp299Gly/Thr399Ile гаплотип не имеет функциональных отличий от дикого типа TLR4. Обнаружена ассоциация активного туберкулеза с полиморфизмом Asp299Gly (Pulido et. al. 2010, Newport et al. 2004, Rosas-Taraco et al. 2007).

Цель исследования: провести сравнительный анализ распределения аллелей, гаплотипов и генотипов гена TLR 4 (в позициях 299 и 399) у здоровых лиц и больных туберкулезом легких русских Челябинской области. Материалы и методы. Исследуемую группу составили 86 больных туберкулезом легких русской национальности, находящихся на стационарном лечении в ГУЗ «Противотуберкулезный диспансер № 3» г. Челябинска. Больные представлены в трех группах с разными фенотипами заболевания: 1 - ограниченные процессы, 2 - распространенный туберкулезный процесс, 3 - хронические формы туберкулеза. Группу сравнения составили 85 практически здоровых лиц русской популяции. Группы имели одинаковый социоэкономический статус. Типирование SNPs в гене TLR 4 проводилось методом ПЦР-SSP с эндонуклеа-зами рестрикции Ncol (299A/G) и Hinf (399 C/T). Для статистической обработки использовались стандартные генетические методы: расчет непараметрического критерия х2 с поправкой Йетса. Расчет частот гаплотипов проводился методом максимального правдоподобия с помощью компьютерной программы Arlequin 3.1 (http://cmpg.unibe.ch/software/arlequin3/). Результаты. Достоверные различия в распределении аллелей, генотипов и гаплотипов TLR 4 (299 и 399) между больными туберкулезом и контролем и между группами больных не были обнаружены. Гетерозиготные генотипы полиморфизма 299TLR4 A/G у больных встречались только в составе гетерозиготного гаплотипа с генотипом 399TLR4 C/T (299TLR4 A/G/399TLR4 C/T). В контрольной группе данная зависимость не была обнаружена. На уровне тенденции у больных с малыми формами заболевания (1 группа) повышена частота встречаемости гетерозиготного генотипа A/G, а также двойного гетерозиготного гаплотипа по сравнению с больными с более тяжелыми формами заболевания (2 и 3 группы).

Выводы. Достоверные различия в распределении аллелей, генотипов и гапло-типов TLR 4 (299 и 399) между больными туберкулезом и группой контроля и среди групп больных туберкулезом легких русских Челябинской области не были обнаружены.

Взаимосвязь аллельного полиморфизма генов рецепторов ФНО-альфа I и II типов с уровнем экспрессии мембраносвязанных рецепторов и сывороточным уровнем растворимых рецепторов Васильев Ф. Ф., Лопатникова Ю. А., Силков А. Н. Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Актуальность. Проявление биологических эффектов многофункционального плейотропного цитокина ФНОа зависит от уровня экспрессии рецепторов на клетках. Различие в уровне экспрессии рецепторов ФНОа может быть обусловлено полиморфизмом генов.

Цель исследования. Установление взаимосвязи полиморфизмов генов рецепторов ФНОа с уровнем экспрессии мембраносвязанных рецепторов ФНОа I и II типов на различных субпопуляциях мононуклеарных клеток, а также с уровнем растворимых рецепторов ФНОа I и II типов в сыворотке крови 150 условно здоровых доноров.

Материалы и методы. Определение уровня экспрессии мембраносвязан-ных рецепторов ФНОа на субпопуляциях мононуклеарных клеток проводилось методом проточной цитометрии с использованием калибровочных частиц ОиапШШЕ РЕ. Определение сывороточного уровня растворимых рецепторов ФНОа проводилось методом ИФА. Генотипирование проводилось методом ПЦР-ПДРФ.

Результаты. Гомозиготные индивиды с генотипом ТТ в точке -609 С/Т промотора гена ТМИ (^4149570) характеризовались сниженным уровнем растворимых рецепторов ФНОа I типа, в сравнении с носителями генотипа СС (р=0,006). Носители генотипа СС в точке -1207 С/С промотора гена ТЮТ! (гб41 49569), имели меньшую плотность экспрессии мембраносвязанных рецепторов ФНОа I типа на CD14+ моноцитах, по сравнению с носителями генотипа СС (р=0,012). У здоровых индивидов, несущих генотип АА по сравнению с индивидами с генотипом АТ, установлено частотное различие по процентному содержанию CD3+ (р=0,024) и CD19+ (р=0,032) клеток, экспрессирующих рецепторы ФНОа II типа в точке -1709 А/Т гена ТШИ (^652625). Носители генотипа СС в позиции -3609 С/Т гена ТШН (^590368) имели пониженное процентное содержание CD14+ клеток, экспрессирующих рецепторы ФНОа II типа, по сравнению с носителями генотипа СТ (р=0,015).

Заключение. Таким образом, нами установлена взаимосвязь полиморфизмов генов рецепторов ФНОа I и II типов с уровнем экспрессии мембранос-вязанных рецепторов на субпопуляциях мононуклеарных клеток и уровнем растворимых рецепторов ФНОа I типа в сыворотке крови условно здоровых доноров. Показано, что аллельный полиморфизм генов рецепторов ФНОа является одним из механизмов, определяющих вариабельность экспрессии мембраносвязанных рецепторов и, соответственно, обеспечивающий различия в степени проявления биологических эффектов иммуномодулирующего медиатора ФНОа.

Влияние активации TLR-4 липополисахаридами различной структуры на экспрессию рецептора CD11b

Зубова С. В.1, Прохоренко И. Р.1, Косякова Н. И.2 ' Институт фундаментальных проблем биологии РАН, 2 Больница Научного Центра РАН, Пущино Московской обл., Россия

Толл-подобный рецептор 4 является сигнальным рецептором для липопо-лисахаридов (ЛПС). Ответы клеток по интенсивности и по набору цитокинов зависят от структуры ЛПС. R- и S-формы ЛПС сигнализируют через TLR4, но различаются по потребности участия CD14 для сигнализации. R-форма ЛПС взаимодействует с TLR4 независимо от CD14. ЛПС, активирующие ответы клеток, влияют на экспрессию рецепторов, участвующих в запуске ответных реакций. В циркулирующих нейтрофилах интегрины (CD11b/CD18) находятся в неактивном состоянии, но активируются после стимуляции Толл-подобных рецепторов (Means and Luster, 2010).

Целью работы было изучение влияния структуры липида А, состава кора и полисахаридного фрагмента ЛПС из токсичных энтеробактерий E. coli и Salmonella enterica на экспрессию рецептора CD11b на нейтрофилах цельной крови условно здоровых доноров.

Цельную гепаринизированную кровь стимулировали в течение 6 ч с помощью различных ЛПС в конечной концентрации 100 нг/мл (E. coli S-, Ra-, Rc-, Rd-, Re-структуры, S. enterica serotype Typhimurium S-, Re-структуры, и S. enterica serotype Minnesota R7 Rd-структуры). После стимуляции образцы цельной крови инкубировали с моноклональными антителами к CD11 b (BioLegend) в темноте в течение 30 мин при комнатной температуре. Эритроциты лизи-ровали с помощью лизисного буфера (BioLegend), лейкоциты отделяли центрифугированием при 300 g 5 мин. Клетки промывали с помощью буфера для окрашивания (BioLegend), осадок лейкоцитов ресуспендировали в 400 мкл данного буфера. В качестве негативного контроля использовали мышиный IgG1 (BioLegend). Экспрессию рецепторов популяции нейтрофилов анализировали на проточном цитофлуориметре EPICS XL-MCL (Beckman Coulter). В ответ на активацию эндотоксинами (ЛПС) гранулоциты дополнительно экспрес-сируют на своей поверхности адгезивные Р2-интегрины - молекулы CD11b/CD18 (Verbon 2001, 10 Power 2001) и усиливают высвобождение цитокинов (Wright 1995). После инкубации крови с разными ЛПС из E. coli или из Salmonella в течение 6-ти часов наблюдалась дополнительная экспрессия CD11b рецептора на поверхности нейтрофилов. Максимальная экспрессия CD11 b наблюдалась на нейтрофилах, активированных Re-хемотипом ЛПС, в состав которого входят только липид А и КДО. По мере удлинения внутреннего кора от Re- к Ra- и далее к полной S-структуре эффект активации снижался. На основании полученных результатов, можно сделать вывод, что основной вклад в активацию клеток, приводящую к дополнительной экспрессии инте-грина CD11b, вносит липид А. При этом существенную роль играет собственно структура самого липида А. Липид А из E. coli, в состав которого входит 6 жирных кислот, проявляет значительно более высокую активность, чем липид А из Salmonella, в состав которого входит 5 или 7 жирных кислот.

Уровни экспрессии мембранных рецепторов фактора некроза опухоли альфа у больных туберкулезом легких и здоровых индивидов

Киреев Ф.Д.1, Альшевская А.А.1, Лаушкина Ж. А.2

1 НИИ клинической иммунологии СО РАМН, 2 Новосибирский НИИ туберкулеза Минздрава России, Новосибирск, Россия

Актуальность. Фактор некроза опухоли альфа (TNF) играет важную роль в иммунном ответе против микобактерии туберкулеза. Биологические эффекты этого цитокина опосредуются посредством взаимодействия с мембранными рецепторами первого и второго типов (TNFR1 и TNFR2). Целью работы явилось изучение уровня экспрессии рецепторов TNF 1 и 2 типов с оценкой абсолютного числа данных рецепторов на различных субпопуляциях иммунокомпетентных клетках.

Материалы и методы. В работе использована периферическая кровь 25 больных активным туберкулезом легких и 150 здоровых доноров. Мононуклеарные клетки получали из цельной крови методом центрифугирования в градиенте плотности раствора фиколл-урографин. Процент Т-, В-клеток и моноцитов, экс-прессирующих TNFR1 и TNFR2, определяли методом проточной цитометрии с использованием фикоэритрин (РЕ)-меченных антител. Число рецепторов на клетках определяли, используя калибровочные бусы QuantiBRITE PE calibration b

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком

Пoхожие научные работыпо теме «Биология»