научная статья по теме СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА ИНТАКТНЫХ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ,ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, И НЕЙТРОФИЛОВ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН (IN VITRO) В РАЗЛИЧНЫЕ ФАЗЫ МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА Биология

Текст научной статьи на тему «СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА ИНТАКТНЫХ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ,ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, И НЕЙТРОФИЛОВ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН (IN VITRO) В РАЗЛИЧНЫЕ ФАЗЫ МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА»

THE ROLE OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR BETA (TGF0) OF PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF EPITHELIUM OF ECTOCERVIX IN WOMEN WITH CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA (CIN) AND HUMAN PAPILLOMA VIRUS

Samodelkin E. I., Vetelina V. V.

State Budgetary Institution of Higher Professional Education "Perm State Medical Academy named after Academician E. A. Wagner" of Ministry of Health of the Russian Federation; Perm, Russia

The aim - to investigate of role of Transforming growth factor beta (TGF^l) in contravention of proliferation and differentiation of epithelium of ectocervix in women with human papilloma virus and cervical intraepithelial neoplasia (CIN) by the study of its expression in epithelial cells. The expression of TGF^l was investigated in biopsies of cervix of 105 women: women with CIN I - 39 persons, CIN II - 24, CIN III - 12; the comparison group - 30 women without CIN, but with human papilloma virus. The expression of TGF^l decreased to complete disappearance with CIN progression. The obtained results showed that the growth of contravention of proliferation and differentiation of epithelium of ectocervix is parallel with decreasing of expression of TGF^l.

Key words: ectocervix, TGF^1, CIN, human papilloma virus

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА ИНТАКТНЫХ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ

ГРАНУЛОЦИТОВ,ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ, И НЕЙТРОФИЛОВ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН Ш У1ТЯО) В РАЗЛИЧНЫЕ ФАЗЫ МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА

Самусева И.В., Смирнова Т.Г., Маркова В.А., Логинова Ю.В.,

Курносенко И.В.

ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России; кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики; Челябинск, Россия

В обзоре приводится сравнительная оценка функционального статуса интактных ней-трофилов, выделенных из периферической крови, и нейтрофильных гранулоцитов церви-кального и вагинального секретов женщин в первую и вторую фазы менструального цикла. Установлено, что у интактных нейтрофилов, выделенных из периферической крови, и нейтрофилов цервикального и вагинального секретов независимо от фазы менструального цикла наблюдаются различия в функциональном статусе. Наибольшей функциональной активностью обладают нейтрофильные гранулоциты цервикального секрета. У нейтрофи-лов, выделенных из периферической крови, и нейтрофилов урогенитального тракта женщин в течение менструального цикла происходит рост показателей фагоцитарной функции и их способности к формированию внеклеточных сетей.

Ключевые слова: нейтрофильные гранулоциты, фагоцитоз, нейтрофильные внеклеточные ловушки

Актуальность. Согласно современным представлениям, нейтрофильные гранулоциты являются одной из самых многочисленных

клеточных популяций в организме и в крови человека. Это высоко дифференцированные клетки гранулоцитарного ростка с многодоль-

чатым сегментированным ядром и набором гранул [1]. Данные литературы свидетельствуют о том, что дисфункции нейтрофилов приводят к тяжелым формам бактериальных инфекций [2], что подчеркивает ключевую роль нейтрофилов в обеспечении врожденного иммунитета. Свои основные эффектор-ные функции нейтрофильные гранулоциты осуществляют в тканевых депо и в секретах слизистых оболочек. Нейтрофильные гра-нулоциты играют важную роль в противо-инфекционной защите женского репродуктивного тракта благодаря своей способности поглощать патогены и высвобождать широкий спектр противомикробных компонентов, в том числе и формировать внеклеточные ловушки [3, 4, 5]. Иммунная система женского репродуктивного тракта специфически регулируется половыми гормонами, под действием которых в женском организме происходит изменение состава, консистенции и количества секрета [6].

В настоящее время разработаны способы обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек, которые позволяют изучить их как в слизистых секретов, так и в выделенной фракции нейтрофилов периферической крови.

Цель работы: сравнить функциональный статус интактных нейтрофилов, выделенных из периферической крови, и нейтрофилов урогенитального тракта женщин в первую и вторую фазы менструального цикла.

Материал и методы: в эксперименте приняли участие условно здоровые женщины в возрасте от 18 до 36 лет. У которых забирали кровь, цервикальный и вагинальный секреты. Из периферической крови на двойном градиенте плотности фиколл - верографина выделяли чистую фракцию нейтрофилов (чистота составляла 98-100%). Полученную клеточную концентрацию стандартизовали до 5*106 кл/л. Для изучения НВЛ в чистой фракции нейтро-филов клеточную взвесь инкубировали при температуре 37°С, 30 минут, окрашивали флуоресцентным ядерным красителем Sytox Green и делали препарат «раздавленная капля». Оценку окрашенных препаратов проводили с помощью люминесцентной микроскопии. Секреты урогенитального тракта женщин инкубировали при температуре 37°С, 30 минут. Для подсчета количества нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек в цервикальном

и вагинальном секретах был применён способ обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секрета [7]. НСТ-тест нейтрофильных гранулоцитов, выделенных из периферической крови, проводили в модификации А. Н. Маянского и М. К. Виксмана (1979 г.). Для определения внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности ней-трофилов секретов урогенитального тракта использовали метод «оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма ней-трофилов мукозальных секретов с помощью НСТ-теста» [8]. Для исследования фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоци-тов использовали модифицированный метод Фрейдлин И.С (1986 г.).

Результаты: в первую фазу менструального цикла содержание внеклеточных сетей нейтрофильных гранулоцитов значимо различается во всех изучаемых биологических жидкостях. Максимальный процент НВЛ регистрируется в цервикальном секрете, минимальный - у нейтрофилов, выделенных из периферической крови. Показатели НСТ-теста и фагоцитарной функции интактных нейтро-филов значимо различались во всех биологических средах, и были наиболее выражены у нейтрофильных гранулоцитов цервикально-го секрета. Самые низкие показатели внутриклеточной бактерицидной активности были зарегистрированы у нейтрофильных грануло-цитов вагинального секрета.

Во вторую фазу менструального цикла результаты носят аналогичный характер. Так, при сравнительной оценке функциональной активности интактных нейтрофильных гранулоцитов, выделенных из периферической крови, и нейтрофилов урогенитального тракта женщин наблюдалась разнородность показателей в зависимости от условий локализации нейтрофильных гранулоцитов (т.е. исследуемого материала), что указывает на гетерогенность популяции нейтрофилов циркулирующих в периферической крови и клеток, присутствующих на слизистых оболочках урогенитального тракта женщин. Наиболее выраженными кислородзависимыми эффек-торными системами обладают интактные жизнеспособные нейтрофильные гранулоциты цервикального секрета. Наименьший уровень показателей НСТ-теста наблюдается у клеток вагинального секрета. Способность к фагоцитозу, его эффективность, а также активность

процесса формирования внеклеточных сетей нейтрофильными гранулоцитами, также, по-видимому определяется их принадлежностью к тому или иному клеточному пулу, и зависит от их локализации. Установлено, что максимальный процент клеток, вступивших в фагоцитоз, и наибольшее количество внеклеточных волокон ДНК нейтрофилов на 30 минуте инкубации регистрируется в цервикальном секрете в независимости от фазы менструального цикла.

Далее был проведен сравнительный анализ функциональной активности интактных нейтрофильных гранулоцитов в первую фазу менструального цикла с аналогичными показателями нейтрофилов, изучаемых во вторую фазу менструального цикла.

Установлено, что у женщин во вторую фазу менструального цикла по сравнению с первой фазой происходит рост фагоцитарной функции и способности к образованию внеклеточных сетей при одновременном снижении показателей НСТ-теста нейтрофильных гра-нулоцитов урогенитального тракта и нейтро-филов, выделенных из периферической крови женщин.

Обсуждение. Полученные данные можно объяснить тем, что морфологически не различимые и выполняющие одинаковые функции клетки одной популяции могут быть функционально неравнозначными и проявлять неодинаковую специфическую функциональную активность, то есть быть функционально неоднородными. Это подтверждают результаты нашего исследования, которые согласуются с данными литературы [9]. Различную способность нейтрофильных грану-лоцитов к образованию внеклеточных сетей в различные фазы менструального цикла можно объяснить изменением гормонального фона у женщин во вторую фазу по сравнением с первой, так как идет преовуляторный пик эстрадиола и увеличивается количество прогестерона. Половые стероидные гормоны, свою очередь участвуют в регуляции функций фагоцитирующих клеток [10]. Циклические изменения гормонального фона также действуют на микрофлору женского урогени-тального тракта. Во вторую фазу менструального цикла микрофлора становиться более однородной и обогащена Lactobacterium зрр., которые индуцируют образование экстрацел-люлярных сетей нейтрофильными грануло-

цитами [11].Таким образом, нейтрофильные гранулоциты отличаются высоким уровнем функциональной мобильности и играют важную роль в противоинфекционной защите женского репродуктивного тракта, благодаря своей способности поглощать патогены и высвобождать широкий спектр противо-микробных компонентов.

Выводы: интактные нейтрофильные гра-нулоциты, выделенные из периферической крови женщин, нейтрофилы цервикально-го и вагинального секретов функционально неоднородны. Наиболее выраженным функциональным статусом обладают ней-трофильные гранулоциты цервикального секрета. Во вторую фазу менструального цикла у нейтрофилов, выделенных из периферической крови, и нейтрофилов урогенитального тракта женщин наблюдается значимое увеличение показателей фагоцитарной функции и их способности к формированию внеклеточных сетей.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Долгушин И.И., Бухарин О. В. Нейтрофилы и гомеостаз. 2001.

2. Нестерова И. А., Ковалева С.В, Чудило-ва Г. А. Ломтатидзе Л.В, Ев

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком