научная статья по теме ТИРОЛИБЕРИН В РЕГУЛЯЦИИ ФОКАЛЬНОЙ ЭПИЛЕПСИИ Медицина и здравоохранение

Текст научной статьи на тему «ТИРОЛИБЕРИН В РЕГУЛЯЦИИ ФОКАЛЬНОЙ ЭПИЛЕПСИИ»

НЕИРОХИМИЯ, 2008, том 25, № 1-2, с. 70-81

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

УДК 612.66: 616.6: 612.822

ТИРОЛИБЕРИН В РЕГУЛЯЦИИ ФОКАЛЬНОЙ ЭПИЛЕПСИИ

© 2008 г. |С. А. Чепурнов|, К. Р. Аббасова, А. В. Аристов, Р. К. Бердяев, О. Б. Гончаров, Н. Е. Чепурнова*

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

В настоящем исследовании были изучены особенности формирования первичного и зеркального эпилептических очагов на модели фокальной кобальтовой эпилепсии у кроликов. Исследованы временные интервалы формирования первичного и вторичного эпилептических очагов во фронтальной коре мозга кролика и генерализация судорожной активности. Для оценки электрической активности коры головного мозга применен фрактальный анализ. Было проведено исследование противосудорожного действия тиролиберина (ТРГ) в концентрациях 10-12 и 10-9 моль/л при его ин-траназальном введении. Показано тормозное влияние ТРГ в исследуемых концентрациях на текущую эпилептическую активность мозга, вызванную введением металлического кобальта. Однако при внутривенном введении кролику ТРГ в дозах 25, 50 и 100 мкг/кг было зарегистрировано отчетливое усиление эпилептической активности.

Ключевые слова: нейропептиды, тиролиберин, кобальтовая модель, эпилепсия, ЭЭГ, фрактальный анализ, кролик.

Изучение и внедрение в клинику новых проти-восудорожных препаратов остается актуальной задачей как для клиницистов, которые часто встречаются с больными эпилепсией, которая не поддается лечению известными препаратами, так и для фармакологов, биохимиков, физиологов. В настоящее время необходимы исследования причин возникновения этого распространенного и тяжелого заболевания нервной системы и со стороны молекулярных биологов и генетиков. Именно новейшие молекулярно-генетические исследования нервной клетки поставили неврологию в число стремительно развивающихся наук. Результаты исследований молекулярно-генети-ческой биологии обеспечили прорыв в понимании многих патологий и в лечении практически всех болезней человека. Однако значительная часть больных оказывается резистентными не только к классическим давно применяемым про-тивоэпилептическим лекарствам, но и к тем лекарственным средствам, которые разработаны в последнее время на основе фундаментальных научных исследований. По разным данным, в мире страдает эпилепсией около 40 млн человек, и 2030% из них оказываются нечувствительными к современным противоэпилептическим средствам. Но и в том случае, когда удается подобрать для больного эпилепсией адекватную моно- или политерапию, которая купирует приступы или уменьшает их число, остается проблема побочных эффектов противоэпилептических лекарств,

* Адресат для корреспонденции: Москва, Воробьевы горы, МГУ, биологический факультет, тел. 718-33-12, e-mail: chepurnovsa@gmail.com

так как, как правило, больной вынужден принимать лекарственные средства в течение долгого времени или всей жизни. Становится все более актуальным вопрос о переносимости противоэпи-лептической терапии [1]. У трети больных эпилепсией наблюдается быстрая проградиентность течения заболевания. По мере прогрессирования заболевания проявляется полиморфизм эпилептических проявлений, нарастают органические расстройства, снижается переносимость доз анти-конвульсантов и нейролептиков, что приводит к снижению лечебного эффекта. Непереносимость многолетней комбинированной противоэпилеп-тической терапии может выражаться в виде аллергических реакций, интоксикации, авитаминоза, поэтому важен поиск также таких веществ, которые самостоятельно не могут полностью прекратить возможные приступы, но позволят снижать дозу применяемого классического про-тивоэпилептического препарата без уменьшения его терапевтического действия. В клинике применяются такие корректоры, стабилизирующие переносимость противоэпилептических лекарств, как фолиевая кислота, фолиевая диета, витамин В12, мочегонные и десенсибилизирующие средства. Но, с нашей точки зрения, недостаточно внимания уделяется противоэпилептическим свойствам регуляторных нейропептидов.

На кафедре физиологии человека и животных МГУ биологического факультета им. М.В. Ломоносова, начиная с 1987 г. под руководством академика И.П. Ашмарина проводилось всестороннее изучение спектра физиологических функций ней-ропептида тиролиберина (ТРГ) [Ь-руго§1и1ашП-Ь-

ЫзиёП-Ь-ргоНпат1ёе], открытого А. БеИаПу в 1974 г. [2]. ТРГ активирует эмоциональное поведение и бодрствование, активирует дыхательный центр, является антидепрессантом, нормализует мозговое кровообращение и повышает парциальное давление кислорода в крови недоношенных детей, оказывает защитное действие при выполнении сверхмаксимальных физических нагрузок - и это не полный перечень эффектов ТРГ [3-5]. Полученные многочисленные и разнообразные эффекты свидетельствовали о ТРГ как о панак-тивине, следовательно, он должен повышать судорожную готовность мозга, должен провоцировать судорожную активность, о чем писала в своих работах В.А. Клуша [6]. Однако в наших экспериментах мы впервые показали, что эффект определяется дозой ТРГ и способом его введения. Применение ТРГ в ультранизких концентрациях (10-8-10-12 моль/л) при локальном интраназальном введении оказывает противосудорожное действие. Антиэпилептические эффекты ТРГ были получены нами в опытах с краткосрочной эпи-лептизацией мозга при внутрибрюшинном введении хемоконвульсанта пентилентетразола (ПТЗ). ПТЗ вводили дробно, начиная с пороговой дозы 25 мг/кг, при этом в ЭЭГ регистрировали одиночные пик-волновые разряды в гиппокампе. Максимальная доза не превышала 75 мг/кг, и в 80% случаев у крыс развивались при этом тяжелые моторные судороги. Таким образом, у животных возникали генерализованные судорожные припадки, которые нам удавалось купировать ТРГ при его интраназальном введении в ультрамалых дозах [7, 8]. В настоящей работе было продолжено изучение влияния ультрамалых доз ТРГ на эпилептическую активность у животных в условиях формирования в мозге первичного и зеркального очагов в результате введения в неокор-текс металлического кобальта.

МЕТОДИКА

Работа проведена на кроликах (п = 6) в возрасте 3.5 мес. и весом 2700-3200 г. Животных содержали в виварии по одному в клетке, для кормления использовали стандартный комбикорм. Операции проводили под глубоким нембутало-вым наркозом. Нембутал в дозе 30 мг/кг вводили в краевую вену уха. Для вживления регистрирующих электродов и канюли кожу в области разреза обрабатывали 5%-ным раствором иода и проводили дополнительно местную анестезию 0.25%-ным раствором новокаина. После вскрытия кожи освобождали кость от надкостницы и обезжиривали поверхность 70%-ным этиловым спиртом. Металлический порошок кобальта после стерилизации помещали в стеклянную канюлю диаметром 1 мм и вживляли ее в кору правого полушария на глубину 2 мм от поверхности мозга на

уровне 6 мм ростральнее брегмы и 4 мм от срединной линии. Использовали координаты стерео-таксического атласа С.М. Блинкова, Ф.А. Бра-зовской и М.В. Пуцилло [9]. В контрольных опытах кроликам вживляли канюлю без кобальта. Для регистрации ЭКоГ вживляли монополярные электроды диаметром 70 мкм в кору обоих полушарий на расстоянии 4 мм слева и справа от срединной линии на черепе и на уровне 4 мм ростральнее брегмы. Электроды и канюлю закрепляли на черепе протакрилом А и дополнительно фиксировали винтом из нержавеющей стали, который вкручивали в толщу кости черепа (рис. 1). Операция продолжалась 50-60 мин. Регистрацию и анализ ЭКоГ проводили с помощью 4-каналь-ной усилительной системы "CONAN" (НПО "Информатика и компьютеры"). ЭКоГ регистрировали на третий день после введения кобальта, а затем с интервалом 2-3 дня в течение 4 нед. Во время записи ЭкоГ кролики находились в условиях свободного поведения. Всего была обработана 31 запись.

Поскольку эпилептический фокус создавали в премоторной зоне в ростральном участке лобной коры, моторные судороги в исследуемые нами сроки (4 недели) не возникали. Основным критерием возникновения эпилептического очага было наличие эпилептической активности в областях, прилегающих к месту локализации кончика канюли с кобальтом, и в симметричных участках коры другого полушария мозга.

Опыты с интраназальным введением ТРГ начинали тогда, когда у кролика стабильно регистрировалась генерализованная эпилептическая активность в обоих полушариях мозга. Эксперименты проходили по единой схеме: 1) 15 мин - запись базовой активности; 2) введение свежеприготовленного раствора ТРГ (фирмы "Sigma") в каждую ноздрю в объеме 10 мкл в концентрации 10-9 и 10-12 моль/л; 3) продолжение записи ЭКоГ в течение 2 ч.

Для обработки ЭКоГ была применена программа, разработанная А.В. Аристовым, с помощью которой вычислялась автокорреляционная функция (АКФ) на временных промежутках продолжительностью 2 с.

После окончания эксперимента участки мозга извлекали и фиксировали для дальнейшего исследования белого вещества первичного и вторичного очагов, а также мозолистого тела с помощью электронно-микроскопических методов (на кафедре нервных болезней Военно-Медицинской Академии, Санкт-Петербург).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Особенности возникновения фокуса (очага) эпилептической активности в мозге были изуче-

Рис. 1. Сверху: мозг кролика, вид сверху (по Блинкову и др., 1973 - с изменениями). Вскрыта кора для обозначения мозолистого тела; показано положение канюли с кобальтом и первичного очага (7), регистрирующих электродов во фронтальных отделах коры (2). Стрелками показаны пути распространения возбуждения от первичного очага. В левом полушарии показано положение зеркального очага. Внизу: фронтальный срез левого полушария 6 мм ро-стральнее брегмы. Стрелкой показано положение регистрирующего электрода.

ны нами ранее при исследовании амигдалярной эпилепсии [10]. Поскольку миндалина обладает низким судорожным порогом, ее повреждение может стать причиной возникновения судорожных разрядов, распространяющихся к другим структурам мозга и вызывающих тяжелые эпилептические припадки, сопровождающиеся вегетативными и нейроэндокринными расстройствами. Мы исследовали формирование эпилептической активности в мозге в результате очаговог

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком