РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2011, том 5(14), № 1, с. 56-61
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
ЦИТОКИНОВАЯ РЕГУЛЯЦИЯ НА УРОВНЕ МУКОЗОАССОЦИИРОВАННОЙ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ САЛИВАРНОЙ ЗОНЫ В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ
© 2011 г. Э.Д. Альтман, А.В. Зурочка*, С.Н. Теплова
Е.В. Давыдова*, Д.Ш. Альтман
ГУЗ «Челябинский областной клинический терапевтический госпиталь ветеранов войн», стоматологическое отделение, г. Челябинск, Россия;
*Учреждение РАН НИИ иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург, Россия
Поступила: 08.11.2010. Принята: 25.01.2011
Исследован спектр регуляторных цитокинов и «молекул эндогенной тревоги» на уровне мукозоассоциированной ткани, ассоциированной со слюнной железой (ОЛЬТ) у 106 пациентов зрелого, пожилого и старческого возраста. Со стороны цитокинов, определяющих тип иммунного ответа, установлено нарушение нормального баланса ТЫ/ТЬ2 в сторону снижения клеточно-опосредованного иммунного ответа. Старение ЭЛЬТ сопровождается ростом 1Ь-4, 1Ь-8 и 1Ь-17 в индуктивной зоне, как возможное следствие формирования аллергии к низкомолекулярным соединениям (гаптенам, входящим в состав металлоконструкций зубных протезов — до 75% пациентов). Выявлено возрастзависимое снижение локальной продукции проапоптогенного цитокина ТЫБа, что служит основанием для депрессии ТЫБа-зависимого пути реализации апоптоза. Разнонаправленное изменение базового уровня классических эндогенных молекул тревоги — аларминов: лактоферрина и 1Ь-1 р следует рассматривать как компенсаторный характер ответа клеток врожденного иммунитета на возрастные изменения МАЛТ.
Ключевые слова: старение, мукозоассоциированная лимфоидная ткань, слюна, цитоки-ны, алармины
ВВЕДЕНИЕ
Спектр цитокинов, участвующих в регуляции на уровне мукозальной лимфоидной ткани, ассоциированной с саливарными железами (salivary duct-associated — DALT) определяет характерную локальную «цито-киновую среду» — матрицу оппонентных сигналов. Сигналы носят сложный многоуровневый характер, определяя повышающий или понижающий тип регуляции иммунного ответа. Онтогенетические исследования в области мукозального иммунитета позволили установить наличие однотипных механизмов выживания, защиты и репарации поврежденных тканей макроорганизма. Эндогенные сигнальные молекулы, сигнали-
Адрес: 454005 г. Челябинск, ул. Телевизионная д. 6, кв. 36. E-mail: v_zurochka@mail.ru
зирующие о повреждении клеток и тканей, обозначают термином «алармины» ^lamins) [1]. Эндогенные алармины и экзогенные па-тоген-ассоциированные молекулярные паттерны (РАМР) объединены в группу молекул, сигнализирующих об опасности — DAMPs, что значит dangerous-associated molecule patterns [2]. Цитокиновая регуляция врожденного и адаптивного иммунного ответа на уровне слизистых оболочек обеспечивается обширным спектром регуляторных молекул, работающих как в индуктивной, так и в эф-фекторной зоне мукозоассоциированной лимфоидной ткани (MALT). Особенностью иммунного ответа DALT является кооперативное взаимодействие цитокин-продуци-рующих лимфоидных клеток железистого эпителия слюнных протоков и слизистой оболочки полости рта, особые типы миграции и хоминга лимфоцитов, распознавание бактериальных молекулярных паттернов
(РАМР) с помощью То11-подобных рецепторов, широко представленных и на клетках буккального эпителия, предпочтительной индукцией «эндогенных молекул тревоги», что в целом обеспечивает развитие локальных воспалительных, аллергических процессов и толерантность к непатогенной ауто-флоре.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование проводилось на базе стоматологического отделения ГУЗ Челябинского областного клинического терапевтического госпиталя ветеранов войн и лаборатории нейроиммунологии НИИ иммунологии и физиологии УрО РАН.
Отбор пациентов для исследования осуществлялся в соответствии с клиническими критериями включения, которыми являлись:
— пол — мужской;
— возраст пациентов согласно критериям возрастной периодизации АПН СССР (1965): II период зрелости (от 35 до 60 лет), пожилой (от 61 до 74 лет) и старческий (от 75 лет до 90 лет);
— полная стоматологическая санация ротовой полости до проведения иммунологических исследований;
— отсутствие острых и обострений хронических заболеваний;
— отсутствие в анамнезе злокачественных опухолей;
— отсутствие эндокринной патологии;
— отсутствие заболеваний системы крови;
— отсутствие инфекционных, аллергических и аутоиммунных процессов;
— информированное согласие пациента на проведение обследования.
Обследовано 106 пациентов, которые были распределены по группам в соответствии с возрастом: 1 группа (п = 47) — 35 — 60 лет, 2 группа (п = 25) — 61 — 74 года, 3 группа (п = 37) - 75-90 лет.
Материалом для исследования служил секрет слюнных желез. Забор слюны проводили утром натощак после полоскания ротовой полости водой, в сухие стеклянные флаконы без стимуляции слюноотделения. Транспортировка производилась в термостабильном контейнере. Проведение подготовки образца для исследования осуществлялось не позднее двух часов после забора материа-
ла. При проведении исследования использовали полистироловые пробирки, размером 12 х 75 мм (BD Catalog № 352058). Перед исследованием слюну подвергали последовательному фильтрованию через пористые фильтры фирмы Becton Dickinson с диаметром пор 70 и 35 мкм (Cat. № 340607; 340590) методом самотека.
Концентрацию цитокинов и аларминов в изучаемом секрете определяли с помощью коммерческих тест-систем для ИФА отечественного и зарубежного производства: лак-тоферрин (нг/мл), IL-4 (пг/мл), IL-1 р (пг/мл), IFNy (пг/мл), IL-17 (пг/мл), IFNa (пг/мл), TNFa (пг/мл) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск, Россия); уровень IL-12 (пг/мл) с помощью набора для ИФА — фирмы Bender MedSystems GmbH (Vienna, Austria); TGFp (пг/мл) — производства Invitrogen Corporation (Camarillo, USA). Учет реакции производился на планшетном спектрофотометре «Multiscan plus» при соответствующей длине волны.
Статистическую обработку проводили с применением пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0», использовали непараметрический критерий Манна-Уитни с поправкой Йетса. Различия считали значимыми при p < 0,05. Значения показателей приведены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М ± m).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Оценка уровней регуляторных цитокинов на уровне MALT, ассоциированной с протоками слюнных желез, у лиц старших возрастных групп выявила характерные возраст-зависимые особенности (Таб.).
Изучена регуляторная активность хелпер-ной популяции Т-лимфоцитов, к которой в настоящее время принято относить следующие субпопуляции: Th1, Th2, Th17, Th3, Th9. Показано снижение в 3 возрастной группе (75 — 90 лет) уровня IFNy, продуцируемого TM-лимфоцитами и участвующего в клеточ-но-опосредованном иммунном ответе при параллельном многократном линейном росте секреции IL-4 (^2-цитокин), концентрация которого в мукосаливарном секрете у пациентов старческого возраста (3 группа) оказалась в 4 раза выше, чем в группе лиц II периода зрелости (1 группа).
Зафиксирован рост уровня провоспа-лительного цитокина 1Ь-17, продуцируемого ТЫ7, в слюне у лиц пожилого и старческого возраста в сравнении с лицами зрелого возраста. Определяемый нами уровень трансформирующего ростового фактора — в (TGFP)r секретируемого супрессорными субпопуляциями ТЪ-лим-фоцитов (Тк3 и Тк9) значимо не отличался в разных возрастных группах.
Оценка базового уровня провоспалитель-ного цитокина TNFa в изучаемом секрете показала его достоверно более низкие концентрации во 2 и 3 группах в сравнении с 1 группой пациентов.
Локальную хемотаксическую активность оценивали по уровню хемокина 1Ь-8, продуцируемого преимущественно моноцитами/макрофагами, которая оказалась самой минимальной во второй группе ветеранов (60 — 74 года), максимальные концентрации хемокина установлены для группы лиц старческого возраста (75 — 90 лет).
Уровень в слюне регуляторного цитокина 1Ь-12, продуцируемого главным образом моноцитами/макрофагами, в нашем исследовании оказался наименьшим (5,5 ± 0,9) в 3 группе лиц старческого возраста, его концентрация у лиц II периода зрелого возраста (1 группа) составила 26,6 ± 4,6, что более чем в 5 раз выше уровня 3 группы.
Базовая концентрация в слюне IFNar преимущественно лейкоцитарного (и отчасти эпителиального) происхождения с возрастом имела четко выраженную тенденцию к снижению (р = 0,05 в сравнении между 1 и 3 группами), что косвенно свидетельствует о снижении противовирусного иммунитета в старческом возрасте.
Далее мы исследовали базовые уровни молекул «эндогенного сигнала тревоги» — аларминов, медиаторов повреждения собственных тканей. Развитие локального тканевого повреждения слизистой оболочки полости рта (СОПР), как экзогенного (микробы, вирусы), так и эндогенного (альтера-тивные, постстрессорные изменения клеток), сопровождается активной продукцией «сигнальных молекул опасности» нормальными клетками врожденного иммунитета (нейтрофилами, эозинофилами, базофилами и моноцитами/макрофагами, NK и эпителиальными клетками, включая кератиноциты)
в экстрацеллюлярное пространство [3, 4]. Нами определены концентрации 2 классических «сигнальных молекул тревоги»: лакто-феррина и IL-1ß. Установлено, что продукция лактоферрина с возрастом увеличивается и достигает максимальных значений в возрастной группе старческого возраста. Уровень IL-1 ß, напротив, многократно линейно снижается в группе ветеранов пожилого и старческого возраста.
Полученные нами данные во многом согласуются с литературными, указывающими на наличие в старческом возрасте снижения уровня Thl-лимфоцитов и уровня секреции IL-2, который является главным ростовым фактором для Т-лимфоцитов [5, 6]. Высокая частота реактивации латентной Herpes zoster инфекции в пожилом и старческом возрасте ассоциирована именно со снижением кле-точно-опосредованного (Thl) иммунитета к вирусам при сохранном гуморальном иммунном ответе [7].
Ряд исследователей также отмечает в процессе старения иммунной системы повышение в системном кровотоке уровня IL-4 [8, 9]. Преобладание в составе мукосаливарно-го секрета ^2-цитокинов оказывает
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.