Влияние АСИТна клеточный иммунитет при БА у детей
183
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работу было включено 22 ребенка в возрасте 7—12 лет. Все дети перенесли инфекционные заболевания не менее чем за 2 месяца до начала исследования. Из 22 детей 14 детей в возрасте 7—12 лет страдали сочетанной патологией: атопической БА и круглогодичным аллергическим ринитом; остальные 8 детей были здоровы. Подбор больных детей осуществляли на базе стационара НИИ педиатрии Научного Центра здоровья детей РАМН и на базе аллергологического отделения детской инфекционной больницы № 12.
Диагноз атопической БА был подтвержден данными анамнеза, клиническими проявлениями, положительными с этиологически значимыми аллергенами кожными пробами, повышенным уровнем общего 1дЕ и специфического 1дЕ в сыворотке крови. Степень тяжести заболевания определяли на основании критериев классификации бронхиальной астмы у детей (Национальная программа «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика», 2008).
Характеристика обследованных групп
Здоровые дети (8 человек) в возрасте 7—12 лет не страдали иммунопатологическими и инфекционными заболеваниями, перенесли острое заболевание не менее чем за два месяца до проведения нашего обследования. Дети, больные атопической БА, получали базисную терапию: кромогликаты, антилейко-
триеновые и антигистаминные препараты для лечения аллергического ринита.
Детям с бронхиальной астмой и круглогодичным аллергическим ринитом проводили аллергенспецифическую иммунотерапию подкожным введением этиологически значимых антигенов, преимущественно аллергеном из домашней пыли. Исследования поверхностных маркеров лимфоцитов проводили в следующие сроки: до АСИТ, сразу после АСИТ, через шесть месяцев после проведения курса АСИТ. АСИТ проводили (по классической круглогодичной схеме в течение 3 лет с постепенным увеличением дозы: так больной получает большую суммарную дозу этиологически значимого аллергена, что обеспечивает более продолжительный и длительный клинический эффект). При наблюдении в катамнезе у детей отмечали хорошие и удовлетворительные результаты (уменьшилось количество и тяжесть приступов при контакте с аллергеном).
Определение содержания в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих поверхностные маркеры: CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD20, CD72, CD23, 1дМ, ДО, CD25, CD71, HLA-DR, CD95, CD 178 ^-Ц, проводили с помощью моноклональных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции.
РЕЗУЛЬТАТЫ
До начала курса аллергенспецифической иммунотерапии провели сравнение количества лимфоцитов, несущих различные поверх-
Таблица 1. Поверхностные маркеры лимфоцитов у детей, больных атопической бронхиальной астмой
до проведения АСИТ
Маркеры Количество лимфоцитов, экспрессирующих маркеры (в %)
здоровые дети (п = 8) больные АБА (п=14)
Т-лимфоциты СЭ3 66,63±0,99 61,75±1,75*
NK-клетки С056 9,83±1,47 16,07±3,46*
В-лимфоциты СЭ20 17,00±1,26 21,72±3,19*
СЭ72 11,16±1,17 12,15±2,21
1дМ 7,50±2,50 13,02±2,96*
1дС 6,50±1,22 15,55±2,81*
Ранние активацион- СЭ23 6,00±0,95 13,49±2,27*
ные маркеры СЭ25 5,91±1,49 5,30±0,87
СЭ71 5,66±1,41 3,91±1,43
Поздние активацион- HLA-DR 13,80±1,73 10,74±2,93*
ные маркеры СЭ95 9,20±0,82 5,13±2,52*
Примечание: *р < 0,05; достоверность различий указана у больных до проведения АСИТ по сравнению со здоровыми детьми.
ностные маркеры у здоровых детей и детей, больных атопической бронхиальной астмой легкой степени тяжести. Результаты этого исследования приведены в таблице 1. У больных детей атопической бронхиальной астмой до начала АСИТ изменен популяционный и суб-популяционный состав лимфоцитов периферической крови. Также происходит количественный сдвиг лимфоцитов, несущих маркеры активации.
1. Уменьшено количество Т-лимфоцитов
2. Количество натуральных киллерных клеток CD56+ значительно выше, чем у здоровых детей.
3. В-клеточное звено иммунной системы характеризуется увеличением общего числа В-лимфоцитов и количества 1дМ+ и IgG+ позитивных клеток.
4. Достоверно увеличено количество клеток, несущих низкоафинный рецептор к 1дЕ ^23).
5. Снижено количество клеток, несущих маркер активационного апоптоза (CD95). Увеличено соотношение HLA-DR/CD95, что характерно для нарушения процессов элиминации клеток.
Таким образом, лимфоциты детей, больных АБА, по сравнению со здоровыми детьми демонстрируют увеличение экспрессии актива-ционных маркеров, активация В-клеточного звена на фоне ослабления индукции актива-ционного апоптоза (табл. 1).
У детей с атопической бронхиальной астмой после курса аллергенспецифической иммунотерапии происходят изменения в Т-, В- и NK-клеточных звеньях иммунной системы.
Таблица 2. Изменение количества клеток с экспрессией ранних активационных маркеров больных атопической бронхиальной астмой
Количество лимфоцитов с экспрессией маркеров в %
маркеры СБ23 СБ25 СБ71
здоровые 6,00±0,95 5,91±1,49 5,66±1,41
дети (п = 8)
Больные БА 13,49±2,27* 5,30±0,87 3,91±1,43
до АСИТ
(п=14)
сразу после 4,97±1,57 23,63±2,03* 3,58±1,03
АСИТ
6 месяцев 21,68±1,53* 10,22±1,04* 4,28±1,10
Примечание: *р < 0,05; достоверность различий указана у больных АБА по сравнению со здоровыми детьми.
Однако наиболее яркие изменения затрагивают активационные антигены.
Активационный процесс в иммунной системе больных детей под влиянием АСИТ отличается рядом особенностей (табл. 2). Наблюдается существенное снижение лимфоцитов, экспрессирующих рецептор CD23 (4,97 ± 1,57%). Через шесть месяцев после окончания курса АСИТ отмечено максимальное увеличение клеток, несущих CD23 маркер до 21,68%. После курса АСИТ увеличивается количество клеток, несущих рецептор к ИЛ-2 ^25 + ) до 23,63 ± 2,03%, что характерно для активации лимфоцитов, но через шесть месяцев уровень этой активации понижается. А количество клеток, экспрессирующих маркер CD71 (рецептор к трансферрину — ранний активационный антиген), ни сразу после курса АСИТ, ни через шесть месяцев не увеличивается и остается на уровне здоровых доноров. Как видно из таблицы 3, в ходе проведения исследования произошло снижение численности CD95 позитивных лимфоцитов на фоне значительного увеличения представительства клеток, экспрессирующих Fas-L.
У всех больных после проведения АСИТ отмечался хороший клинический эффект. Изменения поверхностных маркеров лимфоцитов клинически сопровождались снижением потребности в медикаментах, а также тяжести и продолжительности приступов.
ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ данных после проведения АСИТ показал признаки активации иммунной системы. Повышение количества клеток, несущих
Таблица 3. Изменение количества клеток с экспрессией ранних активационных маркеров больных АБА
Количество лимфоцитов с экспрессией маркеров в %
маркеры СБ95 СБ178 (РАБ^)
здоровые 13,80±1,73 9,20±0,82 5,30±0,96
дети (п = 8)
Больные 10,74±2,93 5,13±2,52* 4,82±2,34
АБА группа
(п=14)
сразу после 18,56±2,82* 10,68±1,42 5,65±2,42
АСИТ
6 месяцев 14,57±1,39* 9,57±1,55 40,16±5,72*
Примечание: * — р < 0,05; достоверность различий указана у больных АБА по сравнению со здоровыми детьми.
Влияние АСИТ на клеточный иммунитет при БА у детей
185
рецептор к ИЛ-2 (CD25 + ), не сопровождается увеличением количества клеток, экспресси-рующих рецептор к трансферрину (CD71 + ), то есть активация лимфоцитов не приводит к их пролиферации. Восстанавливается способность активированных лимфоцитов к выходу в апоптоз (изменение соотношения HLA-DR/ CD95). Одним из механизмов удаления активированных клонов лимфоцитов является система CD95(Fas)-CD178 (Fas-L) взаимодействующих рецепторов [10]. Поэтому можно обоснованно предположить, что после курса аллергенспецифической иммунотерапии происходит включение активационного апо-птоза, который действует на этапе экспрессии рецептора CD71 [9].
Через шесть месяцев после курса АСИТ нормализуется количество HLA-DR+^имфо-цитов, которое сопровождается значительным ростом численности клеток, экспресси-рующих CD 178 (FAS-L)-антиген. Значительное увеличение количества FAS-L+^имфо-цитов (в 10 раз) при двукратном увеличении количества FAS+-лимфоцитов указывает на развитие CD95 (Fas)-CD178 (Fas-L) взаимодействия, которое ведет к развитию актива-ционного апоптоза [11]. Очевидно, усиление апоптоза активированных в ходе аллерген-специфической иммунотерапии лимфоцитов вызывает нормализацию содержания HLA-DR+-лимфоцитов и уменьшает клинические проявления заболевания.
После окончания курса АСИТ происходит снижение численности CD95 позитивных лимфоцитов на фоне значительного увеличения представительства клеток, экспресси-рующих Fas-L. Следовательно, имеет место функциональная перестройка иммунной системы, которая приводит к изменению степени выраженности и характера реакции на естественный контакт с антигеном.
При наблюдении в катамнезе в данной группе больных отмечалась положительная клиническая динамика: снизилась частота приступов, сократилась потребность в брон-хоспазмолитиках короткого действия, значительно уменьшились клинические проявления аллергического ринита.
Исследование показало, что даже однократный курс АСИТ приводит к перестройке иммунной системы больных атопической бронхиальной астмой. Изменения произошли в популяционном и субпопуляционном составе лимфоцитов и в количестве клеток с экспрессией активационных маркеров. Следует
отметить, что описанные выше изменения носили постепенный характер и зависели от сроков проведения исследования и наличия естественного контакта с антигеном.
Можно обоснованно предположить, что в основе наблюдаемых изменений популяци-онного и субпопуляционного составов лимфоцитов лежит увеличение Fas-FasL взаимодействия, обуславливающее ускоренную элиминацию активированных лимфоцитов. Аллергенспецифическая иммунотерапия выполняет роль пускового фактора, индуцирующего увеличение количества FasL+^им-фоцитов, и создает условия для развития их активационного апоптоза.
Работа выполнена при поддержке гранта РГНФ № 09-06-00241а.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Федоскова Т.Г., Ильина Н.И. Роль аллергических заболеваний в общеклинической практике. РМЖ 2004, 14, 876-886.
2. Foske M., Swoboda I., Mat
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.