научная статья по теме ВЛИЯНИЕ БЕТА-ЭНДОРФИНА НА СЕКРЕЦИЮ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМИ МАКРОФАГАМИ МЫШИ Биология

Текст научной статьи на тему «ВЛИЯНИЕ БЕТА-ЭНДОРФИНА НА СЕКРЕЦИЮ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМИ МАКРОФАГАМИ МЫШИ»

Выводы. Женщины с фолликулярными кистами характеризуются высоким содержанием в крови регуляторных Т-лимфоцитов с фенотипом СБ4+СБ25+ и СБ4+СБ152+. При этом выбор различной тактики ведения фолликулярных кист у этих женщин в протоколе ЭКО не оказывает существенного влияние на уровень регуляторных Т-лимфоцитов с фенотипами СБ4+СБ25+ и СБ4+СБ152+.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Матевосян А. А. Вестник Хирургии Армении им. Г. С. Тамазяна. 2010, 2, 38-42.

2. Меджидова К. К. Мать и Дитя: материалы VI Российского форума. М., 2004, 417.

3. Назаренко Т. А., Смирнова А. А. Проблемы репродукции. 2004,1, 36-42

4. Селезнева Н. Д. М.: Мед. книга, 1998.

5. Adamson G. D. Fertil Steril. 2005, 84 (6), 15821586.

6. Chernyshov V. P., Radysh T. V., Gura I. V., Tatar-chuk T. P., Khominskaya Z. B., Am J. Reprod Immunol. 2001, 46 (3), 220-225.

7. Gallimore A., Sakaguchi S. Immunology. 2002, 107, 5-9.

8. Katz VL. Comprehensive Gynecology. 5th ed. Philadelphia: Mosby Elsevier. 2007, 1098-1103.

9. Tai P., Wang J. Cell Physiol. 2008, 214 (2), 456-464.

CHANGES OF THE AMOUNT OF REGULATORY T-LYMPHOCYTES IN THE PERIPHERAL BLOOD OF WOMEN WITH INFERTILITY AND FOLLICULAR CYSTS

Antropova N. V.1, Lazareva Y. Y.2, Bogatova I. K.2

'Ivanovo State Medical Academy, Ministry of Health of Russia; 2Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood named by V. N. Gorodkov Ministry of health of Russia, Ivanovo, Russia

Women with follicular cysts are characterized by the high level of regulatory T-lymphocytes with phe-notype CD4+CD25+ and CD4+CD152+ in the peripheral blood. The different tactic of the treatment of these women in IVF protocols did not significantly influence upon the level of regulatory T-lymphocytes.

Key words: regulatory T-lymphocytes, follicular ovarian cysts, infertility, IVF

ВЛИЯНИЕ БЕТА-ЭНДОРФИНА НА СЕКРЕЦИЮ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМИ

МАКРОФАГАМИ МЫШИ

Баева Т. А.1, Небогатиков В. О.2, Шутова Е.И.3

'ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН; 2ФГБУН Институт технической химии УрО РАН; 3ФГБОУ ВПО Пермский государственный национальный исследовательский университет, Пермь, Россия

Показано, что в системе in vivo высокие дозы бета-эндорфина угнетали спонтанную и зимозан-индуцированную секрецию активных форм кислорода перитонеальными макрофагами мыши. Введение низких доз пептида, напротив, приводило к усилению секреции кислородсодержащих радикалов макрофагами брюшной полости, но только в условиях их дополнительной стимуляции зимозаном.

Ключевые слова: бета-эндорфин, активные формы кислорода, хемилюминисценция, макрофаги, микробицидность

Введение. Многочисленные биохимические реакции в организме протекают с образованием или при непосредственном участии

свободных радикалов, обладающих исключительно высокой химической активностью [1, 2]. Резкое усиление генерации АФК раз-

личными системами макроорганизма, с одной стороны способно приводить к существенным повреждениям органов и систем, с другой - играет роль неспецифической защиты организма. Так, получены убедительные доказательства микробицидной роли активных форм кислорода и радикала NO при бактериальном перитоните, вызываемом Escherichia coli [3]. В регуляции перекисных процессов, согласно литературным данным, принимает активное участие эндогенная опиоидная система, включающая в себя большое разнообразие рецепторов и лигандов, взаимодействующих между собой с разной селективностью и приводящих к образованию многочисленных эффектов, разных как по степени выраженности, так и по направленности действия. Примером положительной для организма роли перекисных процессов является продукция биоцидных кислородных радикалов фагоцитами - полиморфноядерными лейкоцитами и макрофагами.

Цель работы - исследовать влияние бета-эндорфина в системе in vivo на секрецию активных форм кислорода перитонеальными макрофагами мыши.

Материал и методы. Эксперимент в системе in vivo выполнен на 86 белых беспородных мышах средней массой 25-33 г. Животные содержались в условиях лабораторного вивария на пищевом режиме ad libitum. Все исследования проводились в соответствии с международным соглашением об экспериментах на животных.

Бета-эндорфин (Skytek laboratories, США) вводили однократно внутрибрюшинно в объеме 150 мкл. В соответствии с используемыми дозами, все животные были разбиты на 5 групп:

1-я - контрольная (физиологический раствор),

2-я - в-эндорфин в концентрации 100 мкг/кг,

3-я - в-эндорфин в концентрации 1 мкг/кг,

4-я - в-эндорфин в концентрации 0,01 мкг/кг,

5-я - в-эндорфин в концентрации - 0, 0005 мкг/кг. Спустя 1 час после введения пептида/физ. рас-

Таблица. Влияние бета-эндорфина (БЭ) in vivo на секрецию активных форм кислорода перитонеальными макрофагами мыши

Группы Временная динамика ЛЗХЛ (RLU)

0 мин 10 мин 20 мин 25 мин 30 мин 40 мин 50 мин 60 мин

Спонтанная продукция АФК

контроль 14,33± 1,18 32,83± 6,95 65,67± 13,00 73,58± 14,78 86,17± 17,80 76,92± 16,04 70,67± 12,32 67,58± 13,07

БЭ 0,0005 мкг/кг 18,67± 1,31 32,42± 3,51 73,67± 9,49 81,75± 10,58 92,33± 10,99 97,42± 11,46 72,08± 9,19 64,92± 6,54

БЭ 0,01 мкг/кг 17,00± 3,28 33,67± 7,49 69,33± 15,73 85,83± 16,43 84,33± 15,86 86,83± 16,68 68,58± 12,18 61,17± 10,78

БЭ 1 мкг/кг 13,33± 2,14 14,58± 1,94** 26,00± 4,57** 28,75± 3,72** 31,08± 4,85** 29,92± 4,64* 24,92± 2,98** 26,42± 2,52**

БЭ 100 мкг/кг 12,67± 1,49 13,83± 1,41** 24,83± 4,05** 34,00± 5,44* 42,42± 6,52* 27,86± 3,73* 37,42± 4,88* 32,83± 3,07**

Стимулированная продукция АФК

контроль 20,67± 3,39 168,17± 20,22 360,82± 58,87 346,3± 55,53 362,27± 58,23 320,00± 45,74 219,17± 32,37 164,17± 22,55

БЭ 0,0005 мкг/кг 33,17± 2,73 230,08± 10,22* 528,44± 27,07* 497,00± 33,42* 458,56± 38,80 374,25± 32,88 275,83± 23,92 207,33± 19,69

БЭ 0,01 мкг/кг 26,33± 5,11 233,75± 23,97* 545,92± 22,04* 555,92± 23,04** 523,00± 21,32 387,00± 20,32 2758,33± 18,07 188,08± 10,48

БЭ 1 мкг/кг 17,83± 2,50 226,63± 18,53* 567,06± 90,04* 742,00± 54,26*** 564,75± 81,24 419,58± 54,65 283,75± 34,24 206,25± 23,81

БЭ 100 мкг/кг 13,33± 1,65** 97,00± 25,36* 155,67± 35,92* 332,42± 68,17 338,75± 70,10 284,83± 53,87 195,17± 32,41 139,08± 21,19

Примечание: *р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001 по апостериорному критерию Фишера НЗР

твора мышей выводили из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом.

Для оценки люминолзависимой хемилю-минисценции (ЛЗХЛ) использовали перито-неальные макрофаги, для получения которых брюшную полость промывали стерильным раствором Хэнкса («Биолот», г. Санкт-Петербург) в объеме 2 мл, смыв собирали в пробирки и готовили рабочую клеточную суспензию (2*106 клеток/мл Хэнкса). Реакцию ЛЗХЛ проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах (Microlite, U.S.A.), каждую пробу ставили в трех повторностях. Для индукции респираторного взрыва в лунки дополнительно вносили опсонизированный зимозан в концентрации 150 мкг/мл. Концентрация клеток составляла 105 кл/лунку. В качестве маркера выраженности реакции ЛЗХЛ использовался люминол (10-5 М), свечение которого неизбирательно по отношению к различным кислородсодержащим радикалам. Регистрация результатов проводилась в течение часа с пятиминутным интервалом при помощи многофункционального спектрофотометра TECAN (Австрия).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью дисперсионного анализа и апостериорного LSD-критерия Фишера. Все данные на рисунках представлены в виде средней и ее стандартной ошибки (М±т).

Результаты. Секреция активных форм кислорода перитонеальными макрофагами модулировалась под воздействием бета-эндорфина. Показано, что спонтанные уровни кислородсодержащих радикалов статистически значимо снижались при введении мышам бета-эндорфина в концентрациях 1 и 100 мкг/кг за 1 час до забоя, в течение всего периода наблюдения (табл.). При внесении в клеточные культуры опсонизированного зимозана в концентрации 150 мкг/мл эффекты бета-эндорфина меняли свою направленность и выраженность. У животных, которым вводили пептид в концентрации 0, 0005; 0, 01; 1 мкг/кг, наблюдалось увеличение секреции активных форм кислорода с 5-по 25 минуту наблюдения. В это же время у мышей, которым бета-эндорфин вводился в дозе 100 мкг/кг, наблюдалось статистически значимое снижение активных кислородсодержащих радикалов по сравнению с животными контрольной группы (табл.).

В литературе представлено небольшое количество данных о влиянии опиоидных пеп-

тидов на продукцию различных радикалов нейтрофилами и моноцитами, но все они получены в системе in vitro [4, 5, 6]. Так, Diamant M. с соавторами показали, что бета-эндорфин угнетает респираторный взрыв нейтрофи-лов периферической крови, индуцированный форболмиристатацетатом, в физиологических концентрациях (10-10-10-16 М) [4].

Аналогичный эффект был получен Peterson P. K. c соавторами на мононуклеарах периферической крови, стимулированных опсонизированным зимозаном, при этом эффективными оказались концентрации, соответствующие как физиологическим (10-12M), так и фармакологическим (10-8M) концентрациям бета-эндорфина. Авторы отметили также, что спонтанная продукция свободных радикалов статистически значимо повышалась под воздействием этих же концентраций бета-эндорфина [5]. Наши результаты противоречат представленными выше данными и свидетельствуют о том, что бета-эндорфин играет важную роль в регуляции продукции активных форм кислорода клетками иммунной системы, при этом эффекты в системах in vitro и in vivo могут иметь противоположную направленность. Таким образом, можно говорить об участии разных механизмов в реализации влияния бета-эндорфина и других опиоидных соединений на секрецию кислородсодержащих радикалов клетками иммунной системы на уровне целостного организма и в условиях in vitro, что, безусловно, требует дополнительных исследований в данной области.

Работа поддержана грантом программы Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология».

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Нонхибел Д., Теддер Дж., Уолтон Дж. Радикалы, М., 1982, 274 с.

2. Сыровая А. О., Леонтьева Ф. С., Новикова И. В., Иванникова С. В. Международный медицинский журнал 2012, 3, 98-104.

3. Kim Y.

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Показать целиком

Пoхожие научные работыпо теме «Биология»