ВЛИЯНИЕ НЕЙРОМЕДИАТОРОВ НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ И АПОПТОЗ CD4+, CD8+-ЛИМФОЦИТОВ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ С РАЗЛИЧНОЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ МЕЖПОЛУШАРНОЙ АСИММЕТРИЕЙ МОЗГА (ФМА)
Абрамова Т. Я., Абрамов С. В., Сизиков А. Э., Кожевников В. С., Козлов В. А.
ФГБУ «НИИ клинической иммунологии» СО РАМН, Новосибирск, Россия
Установлен зависящий от характера ФМА модулирующий эффект физиологических доз ацетилхолина и адреналина на уровень апоптоза CD4+, CD8+- лимфоцитов больных ревматоидным артритом. Определено повышение уровня апоптоза CD4+ лимфоцитов под влиянием нейромедиаторов и понижение исходно высокого апоптоза CD8+ клеток в группах «правополушарных» больных, а также высокий уровень апоптоза в обеих Т-клеточных субпопуляциях. Ответ на нейромедиаторы в группе «левополушарных больных отсутствовал.
Ключевые слова: апоптоз, пролиферация Т-лимфоцитов, нейромедиаторы
Введение. При исследовании любых процессов, связанных с клеточной активностью, пролиферацией и апоптозом, длина теломерных районов ДНК становится одним из важных функциональных показателей, поскольку ее укорочение связано с клеточным делением. В частности, хронический воспалительный процесс, сопровождающий ревматоидный артрит, оказывая репликативное давление на иммунную систему больных, вызывает укорочение длины теломер в лим-фоидном и миелоидном ростках кроветворения по сравнению со здоровыми людьми соответствующего возраста [2, 4]. Известно ведущее значение иммунных расстройств в патогенезе РА, а также центральная роль Т-лимфоцитов в индукции процесса. Вместе с тем, являясь системным воспалительным заболеванием соединительной ткани [3, 8], РА относится к истинным, то есть связанным с органическими изменениями, психосоматическим заболеваниям [5]. Двойственный генез патологии, а также взаимозависимый характер функционирования иммунной и нейроэндокринной систем свидетельствуют о необходимости комплексного иссле-
дования систем при ревматоидном артрите. Ранее нами была установлена роль высшей нервной деятельности (ВНД) в формировании иммунологической разнородности, существовании нейро-иммунных типов среди здоровых людей, выявленных на основе билатерально-асимметричной организации мозга, как фактора, детерминирующего особенности ВНД [1]. При исследовании вклада ВНД в патогенез психосоматических заболеваний были определены особенности снижения длины теломерных районов ДНК Т-лимфоцитов и гранулоцитов больных РА с различной ФМА [2].
Целью настоящего исследования являлось определение особенностей пролиферативной активности и апоптоза Т-клеточных субпопуляций, а также влияния нейромедиаторов на указанные процессы у больных РА с различными типологическими особенностями личности, обусловленных характером ФМА.
Материал и методы. Было обследовано 49 женщин больных РА (средний возраст 48±1,2года), находившихся на лечении в отделении ревматологии ГУ НИИКИ СО РАМН, г. Новосибирск. Контрольную группу соста-
вили 33 женщины, не имевшие аутоиммунных, аллергических и острых воспалительных заболеваний (средний возраст 43,3±0,9 г.).
Определение профиля функциональной сенсомоторной асимметрии по четырем парным функциям проводилось с помощью опросного метода и функциональных проб [1]. Обследованные лица разделялись на 3 группы, отличающиеся степенью выраженности признаков право и леволатеральности. В 1 группу «правшей» были отнесены люди абсолютно праволатеральные по четырем парным функциям. Группа «амбидекстров» включала всех остальных людей с различной степенью латерализованности в обоих полушариях: «амбидекстры 1» с одним симметричным или латерализованным слева признаком (группа 2) и «амбидекстры 2» с двумя и более симметричными или латерализованными слева признаками (группа 3).
Определение относительного количества CD4+CD45RO+-, CD4+CD45RA+-, CD8+ CD45RO+- и CD8+CD45RA+ -лимфоцитов выполняли в соответствии с инструкцией производителя антител и рекомендациями к аналитической системе FACS Calibur фирмы Becton Discinson (США). Определение фаз клеточного цикла и апоптоз в популяциях CD4+ и CD8+ лимфоцитов проводили на проточном цито-метре FACS Calibur (Becton Dickinson, США) с использованием программы CellQuestPro (Becton Dickinson, США). Относительное содержание клеток с гипердиплоидным (клетки в S-M фазах клеточного цикла) и с гиподи-плоидным (апоптотические клетки) набором ДНК определяли по степени флуоресценции внутриядерного красителя 7-AAD.
Влияние нейромедиаторов на клеточный цикл и апоптоз CD4+ и CD8+ лимфоцитов определяли в тесте совместного культивирования стерильно выделенных мононуклеаров (106 клеток на лунку) в течении 24 часов с аце-тилхолином йодидом (ах) (1х10-7М) и адреналином гидрохлоридом (ad) (1х10-7М) относительно контроля (к) в полной культуральной среде (ПКС) в термостате при 37 °C. Анализировали на проточном цитофлюориметре, применяя анти CD4+ и CD8+ антитела.
Статистический анализ проводился с помощью пакета программ STATISTICA 6.0.
Результаты и обсуждение. В настоящее время известно, что дебют РА, его обострения и особенности клинического течения связа-
ны с межполушарными взаимоотношениями, состоянием нейроэндокринной и вегетативной систем [1, 3, 6]. В наших исследованиях были установлены различия в сокращении длины теломерных районов ДНК групп больных РА, отличающихся по характеру ФМА относительно здоровых людей с аналогичной асимметрией [2]. Указанные различия были ассоциированы с особенностями пролифера-тивной активности и апоптоза Т- клеточных субпопуляций. В частности, вторая группа пациентов, не отличающаяся по длине тело-мер в CD4+, CD8+ лимфоцитах и гранулоци-тах от здоровых женщин, имела средние значения пролиферации и апоптоза и значимо не отличалась от двух других групп больных. В то же время, между пациентками первой и третьей групп были установлены различия по содержанию Т-клеточных субпопуляций с преобладанием CD4+CD45RO+ -лимфоцитов в 1 группе (24,4±1,9 vs 17,6±2,05, соответственно, р=0,019) и CD8+CD45RA+ «наивных» лимфоцитов - в третьей, (15,4±1,7 vs 20,8±1,7; соответственно, р=0,047). Ранее было определено, что в этих группах, как и в общей группе больных, длина теломерных районов ДНК CD4+ и CD8+ лимфоцитов и грану-лоцитов была значимо снижена [2]. Следует также отметить, что дефицит CD8+CD45RO+ был характерен для всех больных независимо от ФМА. Тем не менее, 2 и 3 группы («амби-декстры 1,2») больных РА характеризовало снижение уровня апоптоза CD8+CD45RO+-лимфоцитов, а в 1 группе «правшей» дефицит усугублялся высоким уровнем апоптоза данной субпопуляции. Здоровые женщины сопоставимого возраста с различной ФМА не различались по параметрам пролиферации и апоптоза.
Известно, что в качестве факторов, опосредующих взаимодействие между нервной и иммунной системами, могут выступать нейроме-диаторы ВНС и гормоны ГГНС [6]. Нами был определен характер влияния физиологических концентраций нейромедиаторов на процессы пролиферации и апоптоза CD4+, CD8+ лимфоцитов in vitro. Использование этой модели позволяет оценить функциональное состояние Т-лимфоцитов, в частности, косвенно судить об уровне экспрессии адрено- и холи-норецепторов. Данные некоторых исследований свидетельствуют о том, что катехоламины и агонисты в-адренорецепторов подавляют
пролиферацию Т-клеток, индуцированную митогенами, что ассоциируется с повышением концентрации цАМФ в лимфоцитах [6]. Пролиферативный ответ CD8+ Т-клеток ингибируется в большей степени, чем CD4+ Т-клеток, что связано с большей плотностью в-адренорецепторов на поверхности CD8+ Т-клеток. Увеличение уровня цАМФ также ингибирует секрецию IL-2 Т-лимфоцитами, тем самым, подавляя пролиферацию.
Нами было установлено, что иммуноком-петентные клетки здоровых людей устойчивы к воздействию физиологических концентраций нейромедиаторов и не различаются по уровню апоптоза в зависимости от ФМА, как в CD4+, так и в CD8+ лимфоцитах.
В то же время, Т-лимфоциты больных РА после суточной инкубации in vitro достоверно различались по уровню апоптоза - более высокий уровень этого показателя для обеих Т-клеточных субпопуляций был в 1 группе больных с доминантным левым полушарием. Высокий уровень апоптоза в культурах больных 1 группы достоверно не изменялся под воздействием ацетилхолина и адреналина, как для CD4+ (0,24±0,05 (к);0,18±0,08 (ах); 0,19±0,06 (ad); p>0,05), так и для CD8+ лимфоцитов (0,36±0,08 (к); 0,52±0,1 (ах); 0,69±0,3 (ad); p>0,05),
В то время как, относительно низкий уровень апоптоза CD4+-клеток в контроле у пациентов с активностью правого полушария 2 (0,078±0,03 (к);0,2±0,08 (ах); 0,097±0,06 (ad); p>0,05) и 3 групп (0,048±0,02 (к); 0,12±0,04 (ах); 0,16±0,06 (ad); p<0.05 относительно контроля), увеличивался в опыте после добавления ней-ромедиаторов, что и нивелировало различия между группами. При этом следует отметить, что присутствие адреналина в культуре пациентов третьей группы вызывало также выраженную тенденцию к увеличению числа клеток, находящихся в митозе, то есть, не только повышало апоптоз, но и пролиферативную активность клеток.
Характер воздействия БАВ на CD8+ лимфоциты больных РА 2 и 3 групп, в отличие от первой, был иным: если в контроле апоп-тоз был относительно высок, и различий по уровню между группами не было, то добавление ацетилхолина и адреналина в куль-
туру вызывало появление этих различий, умеренно снижая во 2 (0,56±0,06 (к); 0,23±0,09 (ах); 0,29±0,08 (ad); p>0,05) и 3 группах (0,42±0,09 (к); 0,25±0,07 (ах); 0,33±0,11 (ad); p>0,05) с достоверным увеличением, в случае с ацетилхолином, в 1 группе.
Таким образом, влияние физиологических доз ацетилхолина и адреналина на Т- клеточные субпопуляции зависит от характера ФМА: высокий уровень апоптоза CD4+ и CD8+ лимфоцитов пациентов «правшей» не чувствителен к нейромедиаторам и модулируется у «амбидекстров». При этом, для CD4+ клеток, исходно низкий уровень апоптоза во 2 и 3 группах повышается, с достоверным изменением в 3 группе, а для CD8+ лимфоцитов, исходно высокий уровень апоптоза понижается, достоверно изменяясь в 3 группе. Нормативной длине теломер во 2 группе пациентов может способствовать низкая пролифератив-ная активность и низкий уро
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.